Использование хлорофилла как флуорофора для визуализации и определения гидрофильных соединений
Использование хлорофилла
Цель работы:
Структуры лекарственных веществ (физиологический заряд)
Методика работы. Схема визуализатора
Выделение хлорофилла из шпината
Спектры выделенных фракций
Структуры ПАВ
Выбор условий определения цефтриаксона
Выбор условий определения бензилпенициллина
Выбор условий определения винорелбина
Возможность образования тройных агрегатов с одноимённо заряженными ПАВ
Выбор условий определения блеомицина
Зависимость сигналов от времени
Эффект коиона в системе хлорофилл-ПГМГ-ДДС-блеомицин
Выбор условий определения метотрексата
Определение лекарственных веществ в водном растворе
Определение метотрексата и бензилпенициллина в моче
- Показана возможность использования тройных агрегатов для определения - цефтриаксона, блеомицина, метотрексата, винорелбина,
Контейнеры с цефтриаксоном и метотрексатом для визуализации доставки
Контейнеры с винорелбином для визуализации доставки
Выбранные полимеры для получения контейнеров
Ковалентная сшивка контейнеров с винорелбином эпихлоргидрином
Устойчивость к диализу несшитых контейнеров
Методика работы с клетками аденокарциномы молочной железы человека
Результаты поглощения контейнеров клетками
Результаты эндоцитоза
Выводы
Спасибо за внимание!
Стабильность флуоресценции тройных агрегатов и контейнеров с цефтриаксоном
Сохранение флуоресценции в тройных агрегатах с винорелбином
Сохранение флуоресценции в несшитых контейнерах с винорелбином
4.70M
Категория: ХимияХимия
Похожие презентации:

Использование хлорофилла как флуорофора для визуализации и определения гидрофильных соединений

1. Использование хлорофилла как флуорофора для визуализации и определения гидрофильных соединений

Московский государственный университет
им. М.В.Ломоносова
Химический факультет
Кафедра аналитической химии
Лаборатория биоаналитических методов анализа и оптических сенсорных систем
Использование хлорофилла как флуорофора для
визуализации и определения гидрофильных
соединений
Видинчук Татьяна
Анатольевна
Студентка 6 курса
Руководитель
д.х.н., в.н.с. Беклемишев М.К.
Москва · 2023

2. Использование хлорофилла

Хлорофилл – зелёный пигмент растений,
длинноволновый флуорофор (λem=680 нм)
Применение
Литература
Определение низкомолекулярных
соединений
1. Отдельные работы (в основном, химически
модифицированный хлорофилл)
2. Определение неомицина*
Визуализация доставки
лекарственных веществ
Нет работ**
* Zakharenkova S.A. e.a. ACS Sustain. Chem. Eng. 2021, 9, 3408.
**Визуализация доставки изучена С.А. Захаренковой с использованием
карбоцианиновых флуорофоров: Zakharenkova S.A. e.a. Molecules, 2021, 26, 7426.
2

3. Цель работы:

Использование хлорофилла как флуорофора для определения
лекарственных веществ и визуализации их доставки в
эукариотические клетки
Задачи:
• Показать возможность флуориметрического определения
цефтриаксона, блеомицина, винорелбина, метотрексата и
бензилпенициллина в воде и искуственной моче в виде тройных
агрегатов аналит-краситель-противоион.
• Выбрать системы для визуализации доставки этих соединений с
использований хитозанов и плюроников.
3
3

4. Структуры лекарственных веществ (физиологический заряд)

Цефтриаксон (-1)
Бензилпенициллин (-1)
Метотрексат (-1)
Винорелбин (+2)
Блеомицин (+2)
4

5. Методика работы. Схема визуализатора

Схема устройства регистрации флуоресценции в БИК-диапазоне:
1 – фотокамера, оснащенная светофильтром, пропускающим излучение с длиной волны более 700 нм,
2 – одиннадцать последовательно закрепленных красных светодиодов с максимумом излучения 660 нм,
3 – алюминиевый радиатор для охлаждения светодиодов,
4 – 96-луночный планшет с образцами,
5 – светонепроницаемый кожух
5

6. Выделение хлорофилла из шпината

• Экстракция смесью ацетона и гексана (1:1 об.)
• Удаление экстрагента испарением
• Растворение полученного остатка в ацетоне
• Разделение смеси на фракции методом ТСХ
• Десорбция ацетоном
5

7. Спектры выделенных фракций

Интенсивность
поглощения, усл. ед.
Спектры поглощения
Спектры флуоресценции
Хлорофилл a
Хлорофилл b
Феофитины
Хлорофилл a
Хлорофилл b
Феофитины
Длина волны поглощения, нм
Выделенные фракции распознавали,
сравнивая их спектры с литературными
данными.
Хлорофилл а флуоресцирует, а хлорофилл b – нет.
Далее использовали хлорофилл а.
7

8. Структуры ПАВ

Цетилтриметиламмония бромид (ЦТАБ)
Полигексаметиленгуанидин гидрохлорид (ПГМГ)
Додецилсульфат натрия (ДДС)
Лаурат натрия
Для определения лекарственных веществ
требовалось найти системы хлорофилл-ПАВ-аналит
с наибольшей разностью сигналов тройного агрегата и контрольного опыта
8

9. Выбор условий определения цефтриаксона

Интенсивность
флуоресценции
Интенсивность
флуоресценции
100
хлорофилл-ПАВцефтриаксон
0
а)
в)
хлорофилл-ПАВ
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
100
V ПГМГ, мкл
80
40
20
0
б)
хлорофиллЦТАБ
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
хлорофиллПАВцефтриаксон
60
0
200
100
200
V цефтриаксона, мкл
120
Интенсивность
флуоресценции
Интенсивность
флуоресценции
Зависимость флуоресценции тройного агрегата с цефтриаксоном
от концентраций компонентов
хлорофиллЦТАБцефтриаксон
хлорофиллПГМГ-ЦТАБцефтриаксон
100
80
60
хлорофиллПГМГ-ЦТАБ
40
20
0
0
10
V ЦТАБ, мкл
20
г)
0
100
время, мин
а) ПГМГ, б) цефтриаксона, в) ЦТАБ, г) времени.
200
9
Условия определения
цефтриаксона и получения
тройных агрегатов для
контейнеров:
• раствор хлорофилла 30-40
мкл;
• фосфатный буфер (рН 7,4) 30
мкл;
• вода до 300 мкл;
• ПГМГ (0,0056 М) 60 мкл;
• ЦТАБ (0,01 м) 10 мкл;
• анализируемый раствор 100
мкл.

10. Выбор условий определения бензилпенициллина

Зависимость флуоресценции тройного агрегата с бензилпенициллина от концентраций компонентов
без бензилпенициллина
100
с бензилпенициллином
Интенсивность
флуоресценции
120
80
60
40
Условия определения
бензилпенициллина и получения
тройных агрегатов для контейнеров:
• раствор хлорофилла 10-20 мкл;
• фосфатный буфер (рН 7,4) 30 мкл;
• вода до 300 мкл;
• ЦТАБ (0,01 М) 10 мкл;
• анализируемый раствор 100 мкл.
20
0
ЦТАБ,
а)
ПГМГ,
ЦТАБ
ПГМГ
70
Интенсивность
флуоресценции
60
50
40
30
20
10
0
б)
0
100
200
V бензилпенициллина, мкл
300
а) природы ПАВ, б) бензилпенициллина.
10

11. Выбор условий определения винорелбина

50
40
30
20
10
0
0
20
40
V ПГМГ, мкл
60
б)
0
10
20
V ЦТАБ, мкл
Флуоресценция в течение часа
70
Интенсивность
флуоресценции
а)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Интенсивность
флуоресценции
Интенсивность
флуоресценции
Зависимость флуоресценции тройного агрегата с винорелбином от концентраций компонентов
в)
60
50
40
30
0
10
20
V винорелбина, мкл
30
30
Условия определения
винорелбина и получения
тройных агрегатов для
контейнеров:
• раствор хлорофилла 15
мкл;
• фосфатный буфер (рН 7,4)
30 мкл;
• вода до 300 мкл;
• ЦТАБ (0,01 М) 10 мкл;
• анализируемый раствор 10
мкл.
а) ПГМГ, б) ЦТАБ, в) винорелбина и времени: измеряли флуоресценцию каждой системы каждые 5
мин; Стандартные отклонения означают колебания флуоресценции в течение 1 ч.
11

12. Возможность образования тройных агрегатов с одноимённо заряженными ПАВ

Зависимость флуоресценции тройного агрегата с винорелбином от природы ПАВ
ЦТАБ+ДДС
Винорелб.(2+) + ДДС(–) + ЦТАБ(+) = Агрегат
ПГМГ+ДДС
ПГМГ+ЦТАБ
ПГМГ
с вин.
ЦТАБ
без вин.
ДДС
Винорелб.(2+) + ДДС(–) = Агрегат
нет ПАВ
0
50
100
Интенсивность флуоресценции
• Винорелбин способен образовывать тройные агрегаты как с катионными, так и с
анионным ПАВ (ЦТАБ или ДДС).
• Добавление ПГМГ в качестве коиона повышает разность сигнала и контрольного опыта.
12

13. Выбор условий определения блеомицина

Зависимость флуоресценции тройного агрегата
с цефтриаксоном от концентраций компонентов
50
50
40
30
20
10
0
5
рН
10
15
30
20
10
б)
70
60
50
40
30
20
10
0
0
50
100
V ПГМГ, мкл
150
0
20
40
V блеомицина, мкл
60
100
Интенсивность
флуоресценции
Интенсивность
флуоресценции
40
0
0
а)
в)
Интенсивность
флуоресценции
Интенсивность
флуоресценции
60
0
10
V ДДС, мкл
20
80
60
Условия определения
блеомицина и получения
тройных агрегатов для контейнеров:
• раствор хлорофилла 10 мкл;
• буфер бура (рН 8,5/9,2) 30 мкл;
• вода до 300 мкл;
• ПГМГ (0,0056 М) 20 мкл;
• ДДС (0,008 м) 10 мкл;
• анализируемый раствор 10 мкл.
40
20
0
г)
а) рН, б) ПГМГ, в) ДДС, г) блеомицина.
13

14. Зависимость сигналов от времени

Агрегаты хлорофилл-ПГМГ-ДДС-блеомицин и контрольный опыт
Интенсивность флуоресценции
90
80
70
60
контроль с ПГМГ и
ДДС
50
тройной агрегат с
блеомицином
40
30
0
10
20
Время, мин
30
40
• Сразу после приготовления сигналы различаются почти вдвое, однако через 7-10 минут
различие исчезает.
• Измерять флуоресценцию систем, где присутствует подобное сочетание необходимо сразу
после приготовления (системы с блеомицином и винорелбином).
14

15. Эффект коиона в системе хлорофилл-ПГМГ-ДДС-блеомицин

Зависимость флуоресценции тройного агрегата с блеомицином от концентрации ПГМГ
50
45
Интенсивность
флуоресценции
40
35
30
25
20
15
10
5
0
0
50
V ПГМГ, мкл
100
150
• Без ПГМГ тройные агрегаты хлорофилл-ПАВ-блеомицин флуоресцируют на уровне
контрольного опыта (без блеомицина).
• ПГМГ является коионом по отношению к блеомицину: флуоресценция возрастает в
диапазоне концентраций ПГМГ (0,0056 М) от 0 до 20 мкл.
• Эффект коиона наблюдается только с блеомицином и винорелбином.
15

16. Выбор условий определения метотрексата

без ПАВ
с метотрексатом
ПГМГ
без метотрексата
Интенсивность
флуоресценции
Зависимость флуоресценции тройного агрегата с метотрексатом от концентраций компонентов
ДДС+ПГМГ
ЦТАБ+ПГМГ
ДДС
ЦТАБ
0
20
40
60
Интенсивность флуоресценции
б)
50
100
V ПГМГ, мкл
150
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
80
60
40
20
0
0
в)
0
Интенсивность
флуоресценции
Интенсивность
флуоресценции
а)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
10
20
V ЦТАБ, мкл
30
г)
0
50
100
V метотрексата, мкл
а) природы ПАВ, б) ПГМГ, в) ЦТАБ, г) метотрексата.
150
Условия определения
метотрексата и получения
тройных агрегатов для
контейнеров:
• раствор хлорофилла 15-20
мкл;
• фосфатный буфер (рН 7,4)
30 мкл;
• вода до 300 мкл;
• ПГМГ (0,0056 М) 20-40 мкл;
• ЦТАБ (0,01 М) 10 мкл;
• анализируемый раствор
100 мкл.
16

17. Определение лекарственных веществ в водном растворе

90
65
80
60
70
60
50
40
30
0,0E+00
а)
Интенсивность
флуоресценции
Интенсивность
флуоресценции
Зависимость флуоресценции тройного агрегата от концентраций аналита:
а) блеомицина, б) винорелбина, в) метотрексата, г) бензилпенициллина.
y = 180000x + 44,417
R² = 0,921
5,0E-05 1,0E-04 1,5E-04
С блеомицина, М
2,0E-04
в)
Интенсивность
флуоресценции
Интенсивность
флуоресценции
90
70
60
50
40
30
0,0E+00
y = 78800x + 42,967
R² = 0,9413
2,0E-04
4,0E-04
С метотрексата, М
6,0E-04
г)
17
50
45
y = 31038x + 35,7
R² = 0,9933
40
35
30
0,0E+00
б)
80
55
65
60
55
50
45
40
35
30
0,0E+00
2,0E-04 4,0E-04 6,0E-04
С винорелбина, М
8,0E-04
y = 87000x + 36,6
R² = 0,9688
1,0E-04
2,0E-04
С бензилпенициллина, М
3,0E-04

18. Определение метотрексата и бензилпенициллина в моче

Зависимость флуоресценции тройного агрегата от концентраций
аналита: а) метотрексата, б) бензилпенициллина.
85
80
75
70
65
60
55
50
y = 8231,7x + 54,201
R² = 0,847
45
40
0,0E+00
а)
90
Интенсивность флуоресценции
Интенсивность флуоресценции
90
5,0E-04
1,0E-03
1,5E-03
2,0E-03
C метотрексата в моче, М
2,5E-03
80
70
60
50
30
0,0E+00
3,0E-03
y = 21105x + 55,481
R² = 0,8045
40
5,0E-04
1,0E-03
С бензилпенициллина, М
б)
18
1,5E-03

19. - Показана возможность использования тройных агрегатов для определения - цефтриаксона, блеомицина, метотрексата, винорелбина,

Характеристики методик определения лекарственных веществ
в воде и искусственной моче
предел
обнаружения,
М
В воде
общее
число
точек
Блеомицин
1,1·10-4
12
(1,1-1,7) ·10-4
-
-
-
Винорелбин
3,4·10-4
20
(3,4-6,5) ·10-4
-
-
-
Метотрексат
1,4·10-4
12
(1,4-5,0) ·10-4
7,6·10-4
14
(7,6-2,7) ·10-4
4,5·10-5
15
(4,5-2,7) ·10-5
1,0·10-3
22
-
Аналит
Бензилпенициллин
линейный
диапазон, М
В искусственной моче
предел
общее
линейный
обнаружения,
число
диапазон, М
М
точек
Показана возможность использования тройных агрегатов для определения
- цефтриаксона, блеомицина, метотрексата, винорелбина, бензилпенициллина –
в водном растворе на уровне 0,1 мМ,
- метотрексата и бензилпенициллина – в искусственной моче на уровне 1 мМ.
19

20.

Контейнеры для визуализации доставки
лекарственных веществ
(полимер – лекарственное вещество – ПАВ – хлорофилл)
Структуры полимеров
немодифицированный хитозан
карбоксиметилированный хитозан
плюроник F-68
плюроник F-127
20

21. Контейнеры с цефтриаксоном и метотрексатом для визуализации доставки

Зависимость флуоресценции от природы полимера контейнеров с а) цефтриаксоном б) метотрексатом
полиакриловая кислота
полиакрил. к-та
полистир. со-мал.
кислота, соль
полистир. со-мал. к-та, соль
альгинат
альгинат
плюроник F-127
плюроник F-127
плюроник F-68
с цефтриаксоном
плюроник F-68
карб. хз
мал. сульф. хит.
мал. несульф. хит.
без цефтриаксона
немод. хит.
немод. хз
а)
без мет.
карб. хит.
мал. несульф. хз
0
50
100
Интенсивность флуоресценции
с мет.
без полимера
б)
0
50
100
Интенсивность флуоресценции
• Для контейнеров с цефтриаксоном в качестве полимеров выбраны немодифицированный,
карбоксиметилированный и малеинированный хитозаны.
• Для контейнеров с метотрексатом в качестве полимеров выбраны плюроники F-68 и F-127.
• Частицы: размер 10-1000 нм, дзета-потенциалы около 0 мВ.
21

22. Контейнеры с винорелбином для визуализации доставки

Зависимость флуоресценции контейнеров с винорелбином а) от природы полимера
б) природы полимера и осаждения
мал. хз
полиакрил. к-та
полистир. к-та
альгинат
плюроник F-68
карб. хз
плюроник F-127
с вин.
мал. хит.
без вин.
плюроник
F-68
карб. хит.
немод. хит.
без полимера
0
а)
20
40
60
б)
Интенсивность флуоресценции
с вин.
без вин.
с вин.
без вин.
с вин.
без вин.
осадки после выд-ния
растворы после
выделенияния
до выделения
0
20
40
60
80
Интенсивность флуоресценции
• Только контейнеры с карбоксиметилированным хитозаном сохраняют
флуоресценцию после выделения осаждением.
• Другие полимеры дают осадок, флуоресцирующий на уровне контрольного опыта.
22

23. Выбранные полимеры для получения контейнеров

Аналит
Полимер
Немодифицированный хитозан
Цефтриаксон
Карбоксиметилированный хитозан
Малениированный хитозан
Метотрексат
Плюроник F-68
Плюроник F-127
Плюроник F-68
Плюроник F-127
Винорелбин
Малениированный хитозан несульф.
Малениированный хитозан сульф.
23

24. Ковалентная сшивка контейнеров с винорелбином эпихлоргидрином

Зависимость флуоресценции контейнеров
с винорелбином от природы хитозана
Интенсивность флуоресценции
30
25
20
без вин.
15
10
с вин.
5
0
карб. хит.
мал. хит.
• В сшитых контейнерах с винорелбином и хитозанами нет
разности с контрольным опытом
• Переход к работе с несшитыми контейнерами
24

25.

Стабильность флуоресценции тройных агрегатов
и контейнеров во времени
Соединение
Агрегаты / контейнеры
Изменение сигнала во времени
Цефтриаксон
Тройные агрегаты (без
полимера)
Снижается
Несшитые с немодифиц.
хитозаном (ПГМГ – ЦТАБ)
Сохраняется 2 сут
Сшитые с немодифиц.
хитозаном
Возрастает (выталкивание
цефтриаксона сшивателем из
агрегатов)
Тройные агрегаты с
ПГМГ+ДДС
Сохраняется 2 сут
Тройные агрегаты с
лауратом
Отличие от контрольного опыта
появляется через сутки
Контейнеры с хитозанами
и плюроником F-68
Сохраняется 2 сут
Винорелбин
Метотрексат
25
* Заменили
токсичный ДДС
на лаурат

26. Устойчивость к диализу несшитых контейнеров

Состав контейнера
Аналит
полимер
ПАВ
Время диализа до разрушения
контейнера
Плюроник F-68
Лаурат

Плюроник F-127
Лаурат

Карб. хит.
ЦТАБ-ПГМГ
45 мин
Плюроник F-68
ЦТАБ-ПГМГ
10 мин
Плюроник F-127
ЦТАБ-ПГМГ
10 мин
Винорелбин
Метотрексат
Контейнеры с винорелбином и плюрониками устойчивы к диализу в течение 1 ч,
Контейнеры с метотрексатом и карбоксиметилированным хитозаном устойчивы к диализу по
крайней мере в течение 45 мин
Разрушение контейнеров с метотрексатом и плюрониками начинается в течение 10 мин
Все изученные системы потенциально пригодны для доставки в клетки
26

27. Методика работы с клетками аденокарциномы молочной железы человека

Живые клетки сорбированы на дне лунок при 37˚С:
1) Промывка ячеек фосфатным буферно-солевым
раствором (PBS)
Ячейки для конфокального микроскопа
2) Заливание коллоидного раствора контейнеров
3) Инкубирование при 37˚С в течение 40 минут
4) Отбор раствора и промывка PBS
5) Фиксация (4%-формальдегид и выдерживание
без термостата 15 минут)
Работа с фиксированными клетками:
6) Промывка PBS
7) Заливка смеси глицерин – PBS (1:1 об.)
Фиксированные клетки могут храниться несколько
дней.
Далее исследование на конфокальном микроскопе.
27

28. Результаты поглощения контейнеров клетками

28

29. Результаты эндоцитоза

1) Есть поглощение контейнеров клетками
2) Флуоресценция наиболее заметна в цитоплазме, на ядерной мембране и в ядрышках ядра клеток
после интернализации контейнеров. Доставка в ядро интересна для визуализации доставки
противораковых веществ
3) Сигнал контейнеров тройного агрегата выше, чем сигнал в отсутствие аналита, это означает, что
переносится именно контейнер с тройным агрегатом.
Флуоресценция клеток после поглощения контейнеров
Винорелбин (лаурат, без полимера)
Метотрексат (ПГМГ, ЦТАБ, плюроник
F-127)
Цефтриаксон (ПГМГ, ЦТАБ, карб.
хитоз.)
0
40
80
120
160
Интенсивность флуоресценции клеток
Контейнеры с лекарственным веществом
«Пустые» контейнеры (контроль)
29

30. Выводы

1. Получены флуоресцирующие тройные агрегаты хлорофилла а с аналитами и противоионом и показана
возможность их использования для определения цефтриаксона, блеомицина, метотрексата,
винорелбина, бензилпенициллина в водном растворе на уровне 0,1 мМ, а метотрексата и
бензилпенициллина – в искусственной моче на уровне 1 мМ.
2. Выявлено образование флуоресцирующего агрегата блеомицина с одноименно заряженным полимером
(блеомицин(2+) – полигексаметиленгуанидин(+) (ПГМГ) – додецилсульфат(–) – хлорофилл). В отсутствие
ПГМГ («коиона») флуоресценция агрегатов не отличается от флуоресценции контрольного опыта (без
блеомицина). Для ранее изученных модельных аналитов эффект «коиона» не наблюдали.
3. Взаимодействием тройных агрегатов (хлорофилла с модельными лекарственными веществами и
противоионами) с анионированными хитозанами или плюрониками получены контейнеры для
визуализации доставки цефтриаксона, метотрексата и винорелбина в эукариотические клетки.
4. Ковалентная сшивка контейнеров эпихлоргидрином не позволила получить устойчивого сигнала
модельных лекарственных веществ. Показана возможность длительного сохранения флуоресценции
выше сигнала контрольного опыта в тройных агрегатах без полиэлектролита и несшитых контейнерах
на основе карбоксиметилированного и малеинированного хитозана и плюроников F-68 и 128.
5. Показано сохранение флуоресценции контейнеров винорелбин – лаурат – плюроник F-68 (или F-128) во
время диализа против фосфатно-солевого буфера по крайней мере в течение 1 часа (в отличие от
аналогичных контейнеров с метотрексатом, ПГМГ и ЦТАБом, разрушающихся за 10 мин).
6. Показано проникнование контейнеров с винорелбином, цефтриаксоном и метотрексатом в клетки
аденокарциномы молочной железы человека с сохранением флуоресценции выше контрольного опыта.
Наблюдали распределение флуоресцирующих частиц в структуры цитоплазмы, ядерную мембрану и
ядрышко ядра.
30

31. Спасибо за внимание!

31

32. Стабильность флуоресценции тройных агрегатов и контейнеров с цефтриаксоном

Зависимость флуоресценции контейнеров от природы хитозана и времени
Интенсивность флуоресценции
120
Несшитые без цефтриаксона
Несшитые с цефтриаксоном
Сшитые без цефтриаксона
Сшитые с цефтриаксоном
100
80
60
40
20
0
без хит. немод. карб.
хит.
хит.
мал.
хит.
Сразу после приготовления
без хит. немод. карб.
хит.
хит.
мал.
хит.
Через 2 дня после
приготовления
Изменение сигнала (относительно контроля) во временем (в течение двух суток):
- тройные агрегаты (без полимера): уменьшается
- несшитые контейнеры с немод. хитозаном: сохраняется
- сшитые контейнеры с немод. хитозаном: возрастает (выталкивание цефтриаксона сшивателем из
агрегатов)
32

33. Сохранение флуоресценции в тройных агрегатах с винорелбином

Зависимость флуоресценции контейнеров с винорелбином от природы ПАВ и времени
ПГМГ+лаурат в воде через день
ПГМГ+лаурат в воде сразу
ПГМГ+лаурат в ацетоне через день
с вин.
ПГМГ+лаурат в ацетоне сразу
без вин.
ПГМГ+ДДС через 2 дня
ПГМГ+ДДС сразу
0
20
40
60
80
100
Интенсивность флуоресценции
• Флуоресценция сохраняется в течение двух суток, если в качестве ПАВ использованы ПГМГ+ДДС или
лаурат в ацетоне
• В случае лаурата в воде разность с контрольным опытом появляется через сутки
• Принято решение далее работать с лауратом в воде (наименее токсичен)
33

34. Сохранение флуоресценции в несшитых контейнерах с винорелбином

Зависимость флуоресценции контейнеров с винорелбином от природы ПАВ, природы хитозана и времени
через сутки
плюроник F-68+лаурат в…
мал. сульф. хз меч.+лаурат в…
карб. хз меч.+лаурат в ацетоне
лаурат в ацетоне
с винорелбином
ацетон вместо лаурата
без винорелбина
сразу после
приготовления
плюроник F-68+лаурат в…
мал. сульф. хз меч.+лаурат в…
карб. хз меч.+лаурат в ацетоне
лаурат в ацетоне
ацетон вместо лаурата
0
20
40
60
80
Интенсивность флуоресценции
• Возможна замена токсичного ДДС на лаурат (в случае тройного агрегата с
винорелбином и контейнеров с хитозанами и плюроником F-68); далее работали с ними
• В системах с лауратом флуореценция через сутки возрастает
34
English     Русский Правила