Методы заражения куриных эмбрионов

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

Существует
6
методов
заражения
куриных
эмбрионов.
Наиболее
часто используют заражение в
аллантоисную полость (1) и хорионаллантоисную
оболочку (2), реже - в амниотическую полость (3)
и в желточный мешок (4) и совсем редко – в тело
зародыша (5) и в кровеносные сосуды ХАО (6).

9.

При заражении этим методом
хорошо
размножаются
вирусы
гриппа,
ньюкаслской
болезни,
ринопневмонии лошадей и др.
Эмбрион
фиксируют
вертикально тупым концом вверх. В
скорлупе на стороне зародыша,
отступая 5-6 мм от края воздушной
камеры к ее середине, делают
отверстие диаметром около 1 мм.
Иглу вводят параллельно продольной
оси на глубину 10-12 мм. После
инъекции
вируссодержащего
материала
иглу
извлекают,
а
отверстие в скорлупе закрывают
каплей расплавленного стерильного
парафина.

10.

Для
заражения
через
естественную
воздушную
камеру
эмбрион
помещают
вертикально тупым концом вверх
и в скорлупе против центра
воздушной камеры вырезают
круглое окно диаметром 15-20
мм.
Через
него
пинцетом
снимают
подскорлупную
оболочку и на обнажившийся
участок
ХАО
наносят
вируссодержащий
материал.
Отверстие
закрывают
лейкопластырем или покровным
стеклом
с
использованием
расплавленного парафина.

11.

В скорлупе над
воздушной
камерой делают отверстие для
выхода
части
воздуха.
Отверстие же для самого
заражения делают на участке
бессосудистой
зоны
хорионаллантоисной оболочки
(ХАО) со стороны зародыша.
Иглу вводят на глубину не
более 2-3 мм. Инъецируют
инфицирующую жидкость в
объеме 0,1-0,2 мл и закрывают
отверстие парафином.

12.

Эмбрион помешают в штатив горизонтально зародыше вверх.
В скорлупе делают два отверстия: одно над центром
воздущной камеры ( предназначено для откачивания из него
воздуха), другое отверстие диаметром 0,2-0,5 см сбоку, со
стороны зародыша. Сложность метода в том, что делая второе
отверстие, необходимо снять кусочек скорлупы и, не
повреждая ХАО, сдвинуть подскорлупную оболочку в сторону
так, чтобы через образовавшийся дефект мог пройти воздух.
После этого резиновой грушей через первое отверстие
откачивают воздух из естественной воздушной камеры. В
результате через боковое отверстие наружный воздух
устремляется внутрь, образуя искусственную воздушную
камеру, дном которой является ХАО.
На поверхность ХАО и наносят вируссодержащую жидкость, а
отверстие закрывают лейкопластырем. Первое отверстие над
воздушной камерой не закрывают, так как внутренний листок
подскорлупной оболочки не нарушен и играет роль защитного
барьера. Инкубацию эмбрионов проводят в горизонтальном
положении.

13.

Этот метод используют для
культивирования
хламидий,
вируса
болезни
Марека,
ринопневмонии
лошадей,
катаральной лихорадки овец.
Также
существует
несколько
вариантов. В первом варианте
эмбрион фиксируют вертикально
тупым концом вверх. Делают
отверстие над центром воздушной
камеры и вводят иглу на глубину
3,5-4,0 см под углом 45°С в
направлении, противоположном
от зародыша.

14.

Открытый способ: эмбрион фиксируют
горизонтально и срезают скорлупу над
воздушной камерой размером 1,5-2,5
см в диаметре. Пинцетом снимают
подскорлупную
оболочку.
Затем
анатомическим пинцетом (14 см) с
сомкнутыми браншами продавливают
ХАО по направлению к зародышу и
захватывают амниотическую оболочку,
подтягивая ее к отверстию. Удерживая
левой рукой пинцет с фиксированной
оболочкой
амниона
вводят
вируссодержащий материал. После
инъекции все оболочки опускают,
отверстие закрывают лейкопластырем.

15.

Рисунок:
Овоскопирование
куриного эмбриона на
10-е
сутки
инкубации. Видны тени:
1 – зародыша; 2 –
желточного мешка; 3 –
кровеносных сосудов
ХАО; 4 – воздушной
камеры; 5 – белка

16.

Заражение в тело зародыша
Заражение в тело зародыша проводят так же, как
в амнион, закрытым и открытым способом. Разница в
том, что подтягивают тело зародыша и используют
острую иглу, проследив подчинение зародыша
движению иглы. Материал можно вводить в головной
мозг или определенные участки тела. При этом может
быть значительный процент неспецифической гибели
эмбрионов.