Разбавление и хранение спермы

1. Разбавление и хранение спермы

Разбавление спермы

2. Значение разбавления спермы

- получается большой объем спермы;
- спермии переходят из активного в анабиотическое состояние;
- удлиняется срок жизни спермиев вне организма
вследствие:
А) устойчивости к температурным перепадам,
Б) защиты мембраны клеток от разрушения
токсическими веществами и обеспечения их
дополнительной энергией,
В) блокирования действий микробных факторов.

3. КОМПОНЕНТЫ РАЗБАВИТЕЛИ

Сахара (глюкоза, лактоза, сахароза, рафиноза) –
неэлектролиты - не допускают агглютинации и потери
электрического заряда; для дыхания и гликолиза; для
поддержки осмотического давления;
Соли (цитраты-натрий лимонно-кислый)-защита спермиев
от самоотравлениям; обеспечивает буферность среды;
трилон Б (хелатон), эдта, фосфорные соли и т.д.
Антибиотики – предотвращают действие условнопатогенной микрофлоры. (спермосан-3 - ППК)
Яичный желток – смягчает температурный шок спермиев
при охлаждении;
Глицерин используют при замораживании - при этом
замерзание происходит без образования крупных
кристаллов, повреждающих спермии.

4. Методика приготовления сред

1. Кипятят дистиллированную воду, остужают до 35 град;
2. Сахара и соли заливают водой, размешивают до полного
растворения, фильтруют, стерилизуют 5-10 мин на водяной
бане, охлаждают;
3. Добавляют желток (предварительно подготовленный) и
спермосан-3, тщательно размешивают;
4. Среду в термостат или на водяную баню (35 град.)
5. Разбавляем сперму не позднее 3-4 часов от момента
приготовления среды.

5. Техника разбавления спермы

1. Условие: одинаковая Т спермы и среды (35 градусов).
2. Среду приливают к сперме небольшими порциями (из
шприца по стенке стакана), перемешивая осторожно.
3. Доводят до нужного объема (зависит от концентрации
спермы).
4. Проверяют активность (подвижность) и концентрацию
спермы.
5. Постепенно охлаждают (до 30 – 22 град-водяная баня –
20-30 минут).
6. Фасуют и помещают в холодильник (+2+5 град) на 3 часа.

6. Способы и формы фасовки спермы

Быка, барана:
Флаконы, пробирки, ампулы (охлажденная)
Гранулы (открытые, облицованные), пайетты (соломинки) –
заморозка.
Жеребца:
Банки стеклянные (по 50-100 мл) – охлажденная;
Гранулы, алюминевые пакеты – замороженная.
Хряка:
Стеклянные колбы, полиэтиленовые флаконы

7.

Среда ЛФРМГЖ для разбавления и
замораживания спермы быка в
полипропиленовых соломинках:
Лактоза, г
80,5
Фруктоза, г
12,0
Раффиноза 5-водная, г
19,5
Магний сернок, г
0,1
Глицерин, мл
50,0
Спермосан-3, тыс ед
- 500-700
Желток кур яиц, мл
- 200,0
Вода дист, мл
- 1000,0

8. Среды в облицованных гранулах:

Среда № 1: 11% р-р лактозы или сахарозы, мл - 63,0
Желток кур яиц, мл
- 30,0
Глицерин, мл
7,0
Среда № 2: Лактоза или сахароза, г
Натрий лимкисл 3-зам 5-вод, г
Глицерин, мл
Вода дист, мл
- 6,0
- 1,4
- 5,0
- 100,0

9. Среда для разбавления и замораживания спермы быка в форме гранул:

Лактоза, г
Желток кур яиц, мл
Глицерин, мл
Спермосан-3, тыс ед
Вода дист, мл
- 11,5
- 20,0
- 5,0
- 50,0
- 100,0
Разбавляют сперму быка в 10-50 раз.

10. Среда для спермы быка(охл)

Среда глюкозо-цитратно-желточная
при 2-4 град (ГОСТ 14746-69)
Глюкоза б\водная, г
- 3,0
Натрий лимкисл(3-х зам 5-вод),г - 1,4
Желток кур яйца, мл
- 20,0
Спермосан-3, тыс ед
- 75-90
Вода дистил, мл
- 100,0

11. Хранение спермы быка

1. Свежая сперма (При Т 18-20 градусов) -в
течение 1 суток; А – не < 7 баллов
2. Охлаждение до 2-4 градусов (использовать в
течение 3 суток);
Активность при осеменении – не ниже 6 балл;
3. Заморозка в жидком азоте (-196 граднесколько лет и десятки лет): А – не менее 4 бал
- в гранулах (0,2-0,5 мл.),
- в облицованных гранулах,
- в полипропиленовых соломинках (пайеттах по
0,25 мл.)

12. Разбавление спермы барана

Разбавляют в 2-3 раза сперму с показателями
Г-9, К=2,5 млрд/мл.
100 мл дистилированной воды;
2,8 г натрия лим кисл 3-х замещ 5-водн;
0,8 г глюкозы (медиц чистой) или фруктозы;
20,0 мг (на 100 мл среды) желток кур
свежий(ярко-оранжевый).
50-75 тыс ед пенициллина кристалл (натриевая
или калиевая соль);
50-75 тыс ед стрептомицина (сернокисл или
солянокисл);
0,1-0,2 г стрептоцида белого растворимого;

13. Разбавление спермы барана

Или заменить антибиотики на
«Спермосан-3»
Приготовленную среду можно хранить не
более 4 час.
Перед осеменением:
А – не ниже 8 баллов,
К – не менее 900 млн/мл.

14. ХРАНЕНИЕ СПЕРМЫ БАРАНА:

1. Свежую (охлажденную до 17-18 град,
разбавленную средой глюкозофосфатной.(используют в течение 3-8
часов). А – не < 8 баллов.
2. Охлажденную до 2-5 град (в течение
24-36 часов); А- не <8 баллов;
Замороженную в гранулах (0,15).
А – не < 7 баллов.

15. Режим охлаждения спермы барана

Время после получ спермы,
Мин
0
20
60
120
180
Допустимые колебания
температуры спермы,град
35-36
18-22
13-20
5-10
3-5
Когда время, затрачиваемое на перевозку и использование
спермы не превышает 2-3 ч с момента ее получения,
целесообразно не охлаждать сперму до 2-4 град, а
перевозить ее в разбавленном виде при Т около 17-18 град.

16. При этом разбавлять не глюкозо-цитратной средой, а глюкозофосфатной, приготовленной след образом:

Вода дист
100 мл
Натрий фосф кисл 2-х замещ - 2,08 г
Калия фосф кисл 1-замещ
-0,08 г
Глюкозы б\водн мед
- 3,2 г
При проведении работы на пунктах с Т
ниже +18 град, на 100 мл разбавителя
добавляют 20 мл желтка свежего
куриного яйца.

17. Разбавление и хранение спермы хряка

Для искусственного осеменения используют
сперму хряков со следующими показателями:
- объем профильтрованного эякулята – 125 мл;
- подвижность спермиев - не менее 7 баллов;
- концентрация спермиев в 1 мл – не менее 100
млн.;
- выживаемость спермиев – не ниже 6 баллов
ч\з 72 ч.;
- абсолютный показатель выживаемости
спермиев – 700;

18. ХРАНЕНИЕ при Т 16-20 град.

ГХЦС: (ГОСТ 1737-72): глюкоза мед -40 г;
Хелатон(трилон Б, ЭДТА) –
2,6 г;
Натрий лим кисл 3-х замещ – 3,8 г;
Аммоний сернокислый –
1,8 г;
Натрий двууглекислый –
0,5 г;
Вода дист. 1000 мл;
«Спермосан-3» из расчета 250-300 тыс ед
на 1 л среды.
Разбавляют в 2-3 раза.

19.

Если сперму исп-ют в теч 6-8 час
после взятия, то ее можно
разбавлять глюкозо-хелатоцитратной средой (ГЦХ-У):
Глюкоза мед. –
50 г;
Натрий лим кисл 3-замещ. – 3 г;
Хелатон (трилон Б) –
1г;
Вода дист. –
1000 мл.

20. Если сперму используют в течение 1-2 час после ее взятия, то можно

разбавлять глюкозо-цитратным
разбавителем:
Глюкоза мед –
50 г;
Натрий лим кисл 3-х замещ – 5 г;
Вода дист. –
1000 мл.
Во всех случаях в разбавлении 1:3
проверяют активность спермиев. Если в
течение 5-10 мин она не ухудшилась, то
ее используют.

21. Хранение спермы хряков и жеребцов

ХРЯКОВ:
- -сразу после разбавления; А не <7
- до Т 16-20 град (сутки) (А – не ниже 6);
- охлажденную до +2+5 (3 суток);А не <6.
ЖЕРЕБЦОВ:
Свежую (среда ГЖ, ЛЖ – 24-36 час.);
Охлажденн. до +2+5 град (среда ЛХЦЖ до 3 сут);
Заморозка:
- гранулы (0,2 мл),
- алюминевые пакеты (тубы с дозой 25-40 мл).

22. Разбавление спермы жеребцов

Сост. вещ-ва ГЖ
ЛЖ
ЛХЦЖ
Вода дист,мл 100
100
100
Глюкоза,г
7
Лактоза,г
11
11
Хелатон,мг
100
Гидр.карб Na,мг 8
Na лим.кисл,мг 89
Желток, мл
0,8
0,8
1,6
Глицерин,мл
3,5
Спермосан 3
по 30 тыс. ед.

23. Сперма жеребцов

Используется сперма:
А не менее 6 баллов;
К не менее 150 млн в 1 тмл.
Разбавляют в 3-4 раза.
Если К более 300 млн в 1 мл, то
разбавляют ЛХЦЖ в 5 раз.

24.

25. РЕЖИМЫ РАЗМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ

Произво Способы
дитель
фасовки и
дозы,мл
Бык
Температ
ура
размораж
Порядок
размораживания
Продолжит
Разморажи
вания, с
Необлиц.г
ранулы по
0,1-0,2
40-42
Ампулу (флакон) с 1 мл 2,9%
цитрата натрия на водяной
бане 23 мин, затем опуск в
нее гранулу
5-8
Необлиц
гран по 0,5
40-45
Стерильный флакон
выдержив. на водяной бане
23 мин, затем опускают в
него 2 гранулы
90-120
Облицов.
гранулы
по 0,25
40
Дозу спермы опускают в
водяную баню пинцетом с
широкими браншами
8-10
Пайеты по
0,25
38
Погружают пинцетом в
водяную баню заводской
пробкой вниз, оставляя
верхний конец ее на 0,51 см
выше поверхности воды
10-11

26. Разморозка спермы

Произво
дитель
Способы
фасовки
и дозы,
мл
Темпер
атура
размор
озки
Порядок
разморозки
Продолжи
тельность
разморозк
и, сек.
Баран
Необлиц.
гранулы по
0,2 мл
70-80
В разогретый водяной или
электрооттаиватель
засыпают по 20 гранул;
размороженная сперма
стекает в стерильный
флакон
До полного
разморажи
вания
Жеребец
Алюминев
ые пакеты
по 25
40
Пакет погружают пинцетом в
водяную баню и слегка
покачивают
45-50
Необлицов
анные
гранулы по
0,5
40
В стерильную коническую
колбу быстро насыпают
гранулы в 1 слой и
погружают колбу в водяную
баню.
До полного
разморажи
вания.