Ошибки колич ИФА ноябрь 2024

1.

Количественный ИФА.
Особенности, ошибки, интерпретация
Кокорина Е.В.,
Молчанова А.Р.,
лаб. ИФА гормонов и
опухолевых маркеров

2.

Количественный ИФА
• Результат анализа рассчитывается по
калибровочной кривой и показывает
сколько содержится аналита в образце
3,000
2,500
2,000
1,500
1,000
0,500
0,000
0
20
40
60
80
концентрация
100
120

3.

Количественный ИФА
Количественный
ИФА
Неконкурентный
«Сэндвич»
Непрямой
Конкурентный

4.

Неконкурентный «сэндвич»-метод
ИФА

5.

«Сэндвич»- метод
Тиреотропный гормон(ТТГ)
ПСА
СА 19-9
Тропонин
СА 125
и др.

6.

Неконкурентный непрямой
ИФА

7.

Неконкурентный непрямой
ИФА
Антитела к тиреоглобулину (анти-ТГ)
АТ к ТГ
АТ к ТПО

8.

Конкурентный метод

9.

Конкурентный метод
Общий тироксин (Т4 общий)
Т4 свободный
Т3 общий
Т3 свободный
Прогестерон
Тестостерон
Кортизол
и др.

10.

Оценка правильности постановки
• Контрольный образец попадает в заданный интервал
Сэндвич
• ОП нулевого калибратора не
>0,1 (фон)
• ОП верхнего калибратора не <
1, близко к паспортным данным
• График – прямая линия
Конкурентный
• ОП нулевого калибратора не < 1,
близко к паспортным данным

11.

Оценка правильности результатов
• Есть ли завышение/занижение значений
анализируемых образцов
• Внутрилабораторный контроль
• Внешний контроль качества (лифочеки,
ФСВОК и т.д.)

12.

Результаты ФСВОК ТТГ

13.

Основные затруднения в работе с
ИФА- наборами
1. Несоответствие паспортным данным
- низкая оптическая плотность калибровочных
образцов;
- непопадание значения контрольного образца в
заданный диапазон значений;
- нестабильность компонентов набора при дробном
использовании;
- внутрисерийная невоспроизводимость результатов
Причины:
• Агрессивные дез. средства
• Нарушение условий хранения набора

14.

Основные затруднения в работе с
ИФА- наборами
2. Несоответствие в работе внутренних контролей и
калибраторов
- высокая оптическая плотность «0» калибратора(фон);
- дефекты или невозможность построения
калибровочного графика.
Причины:
• Плохая промывка ( контаминация вошера, плохое
качество дистиллированной воды, неправильный
режим промывки, «старый» однократный ФСБ-Т)

15.

Основные затруднения в работе с
ИФА- наборами
Свободный трийодтиронин
(Т3 свободный)
Правильный график
График со слиянием калибровочных
образцов

16.

Основные затруднения в работе с
ИФА- наборами
3. Завышение результатов анализа
Причина: воздействие агрессивных дез.средств на
калибраторы/конъюгат
4. Низкие результаты анализа
Причина: нарушения на преаналитическом этапе:
- условия забора крови;
- системы забора крови;
- используемый антикоагулянт при получении плазмы;
- хранение проб ( длительное хранение сывороток над
сгустком крови; хранение в открытых пробирках; нарушение
условий хранения замороженных образцов).
Возможны ошибки при предварительном разведении проб.

17.

Основные затруднения в работе с
ИФА- наборами
На этапе подготовки проб к
проведению анализа
следует обращать
внимание на правильное
размораживание проб,
необходимость их
обязательного
перемешивания.

18.

Ошибки аналитического этапа
постановки ИФА
• Несоблюдение инструкции
• Используемые дез. средства
• Неравномерный прогрев компонентов набора и исследуемых
образцов;
• Длительное время внесения образцов;
• Нарушение требования проведения анализа в дублях;
• Использование не всех калибровочных образцов;
• Ошибки дозирования;
• Нарушение режима инкубации;
• Смена порядка нанесения растворов или путаница с
нанесением растворов
• Некачественная промывка( недостаточный объем,
контаминация при отсутствии регулярной обработки вошера,
недостаточное осушение лунок планшета после промывки);
• Контаминации на этапе внесения ТМБ;

19.

Алгоритм поиска ошибок
Дезрастворы
Промывка/Вошер
Условия проведения анализа/инкубации
Приготовление растворов
Дозирование
Хранение набора/компонентов
Прочее

20.

Основные затруднения в работе с
ИФА- наборами
5. Несоответствие полученных результатов ожидаемым
Причины:
• Отсутствие необходимой клинической информации о пациенте,
позволяющей правильно оценить полученные результаты.
Отличающиеся от нормы показатели не всегда свидетельствуют о
наличии патологии, а могут быть обусловлены влиянием ряда
факторов
( лекарственные препараты, физиологические состояния, суточные
ритмы гормонов и т.д.)
• Нецелевое использование набора реагентов.

21.

Основные затруднения в работе с
ИФА- наборами
6. Несоответствие полученных результатов при сравнении с другим
набором-аналогом (ИФА) или другим методом;
Причины:
• Сравнение только с одним набором-аналогом (ИФА);
• Сравнение с другим методом.
• Сравнение абсолютных значений без учета возможного смещения
значений норма-патология в различных методиках.
• Сравнение значений в разных единицах измерения без учета
фактора конверсии.

22.

Лифочеки BioRad

23.

Аттестация изготовителя референсных образцов фирмы
Bio-Rad (USA) Lyphochek® Tumor Marker Plus Control, Levels 1, 2, 3
Units
Level 1
Level 2
Level 3
Mean
Range
Mean
Range
Mean
Range
U/mL
35,6
28,4-42,9
89,8
68,9-111
270
208-333
U/mL
36,9
31,0-42,8
99,2
83,3-115
305
256-354
U/mL
18,9
12,7-25,1
50,7
34,0-67,4
167
112-222
U/mL
29,0
22,9-35,1
74,5
58,9-90,1
225
178-272
U/mL
33,8
27,1-40,4
85,2
69,1-101
250
210-290
U/mL
37,3
29,8-44,7
98,5
78,8-118
302
241-362
U/mL
31,7
23,3-40,1
83,7
61,6-106
249
191-307
U/mL
34,8
24,4-45,3
96,1
67,3-125
310
217-403
CA 125
Abbott ARCHITECT
iSystems
Beckman Coulter
Access / 2 / 2i
(OV Monitor) (2)
Monobind AccuBind
ELISA (2)
Roche Elecsys / E170
/ cobas e Systems (2)
Siemens ADVIA
Centaur / Centaur XP
Siemens IMMULITE
(2)
Siemens IMMULITE
2000 / 2000 XPi
Tosoh ST AIA-PACK
(2)

24.

Основные затруднения в работе с
ИФА- наборами
6. Несоответствие полученных результатов при сравнении с другим
набором-аналогом (ИФА) или другим методом;
Причины:
• Сравнение только с одним набором-аналогом (ИФА);
• Сравнение с другим методом.
• Сравнение абсолютных значений без учета возможного смещения
значений норма-патология в различных методиках.
• Сравнение значений в разных единицах измерения без учета
фактора конверсии.

25.

Причины несоответствия получаемых
результатов
Причиной несовпадения уровня определяемого аналита
разными методами (наборами реагентов) при исследовании
одного индивидуального образца может быть методзависимое смещение, обусловленное:
1. Селективностью (специфичностью) антител
- использование моно-, поликлональных антител,
специфически взаимодействующими с различными
антигенными детерминантами;
- возможность проявления перекрестных реакций.

26.

Используемые моноклональные антитела
к различным эпитопам тропонина I
High Sensitive Assays:
bioMerieux Vidas High Sensitive
ET Healthcare Pylon hsTnI assay
LSI Medience (Mitsubishi) PATHFAST hsTnI
Ortho VITROS Troponin I hs
Siemens ATELLICA TnIH
Siemens ADVIA Centaur XP/ XPT TNIH
Siemens Dimension VISTA TNIH
Siemens Dimension ExL TNIH
Singulex Clarity cTnI
Contemporary assays:
Abbott AxSYM ADV
Abbott Achitect
Abbott i-STAT
Alere Triage SOB
Alere Triage Cardio 3
Beckman Coulter Access 2/AccuTnI+3
bioMerieux Vidas Ultra
Mitsubishi Chemical PATHFAST
Ortho VITROS Troponin I ES
Philips Electronics Minicare I-20/Minicare
cTnI
Radiometer AQT90 FLEX TnI
Response Biomedical RAMP
Roche E 2010/cobas e 411/
Roche E 170/cobas e 601/602 cTnI
Siemens ADVIA Centaur® TnI-Ultra™
Siemens Dimension® EXL™ TNI
Siemens Dimension® RxL CTNI
Siemens Dimension VISTA® CTNI
Siemens IMMULITE® 1000 Turbo
Siemens IMMULITE® 1000
Siemens IMMULITE® 2000 XPi
Siemens IMMULITE® 2500 STAT
Siemens IMMULITE® 1000
Siemens Dimension EXL Systems
Tosoh ST AIA-PACK
24-40
41-49
87-95
41-49
71-116
163-209
24-40
41-49
87-91
29-34
41-50
171-190
29-34
41-50
171-190
29-34
41-50
171-190
29-34
41-50
24-40
41-49
171-190
86-90
24-40
190-96
87-91
41-49
24-40
28-39
87-91
41-49
62-78
87-91
27-40
27-39
83-93
24-40
190-96
41-49
22-29
41-49
87-91
41-49
24-40
71-116
41-49
163-209
87-91
41-49
20-100 + TnC mAb
41-49
85-92
137-149
190-96
26-38
23-29
87-91
27-43
27-40
41-49
27-32
41-56
27-32
41-56
27-32
41-56
190-96
87-91
27-40
87-91
27-40
87-91
27-40
87-91
27-40
87-91
27-40
87-91
27-32
41-56
41-49
87-91
cTnI
NH2
1
10
COOH
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
130 140
150
160
170
180
190
200 209

27.

Причины несоответствия получаемых
результатов
2. Калибровочные образцы
- какие используются антигены
(нативные, рекомбинантные)
-степень чистоты
Стандартизация калибровочных образцов
Возможное использование аттестованных
относительно разных эталонов калибраторов
Одна из основных проблем- отсутствие единых
международных стандартов на целый ряд аналитов

28.

Причины несоответствия получаемых
результатов
3. Конструктивные особенности набора реагентов
• чувствительность;
• диапазон измерения;
• количество стадий ( возможность проявления «хукэффекта»);
• степень разведения исследуемого образца;
• применение специфических блокирующих добавок
для устранения эффекта неспецифического
связывания, обусловленного присутствием в
образце гетерофильных антител, аутоантител,
НАМА.

29.

Сравнение наборов
Корректное сравнение результатов,
полученных различными методами
(наборами) и оценку сопоставимости
результатов необходимо проводить на
достаточно больших, статистически
значимых выборках здоровых людей и
пациентов с клинически подтвержденной
патологией.

30.

Возможные ошибки при расчете
результатов
• Использование других фильтров на ридере;
• Загрязнение фильтров ( или дна лунок
планшета);
• Неправильно введены значения
концентрации калибровочных образцов;
• Использование разных программ расчета;
• Экстраполяция при расчете значений в
пробах с высоким содержанием аналита.

31.

Неподтвердившееся расхождение результатов
определения ТТГ в двух лабораториях
№ образца
ТТГ, мМЕ/л
ТТГ, мМЕ/л ТТГ, мМЕ/л
Производитель 1 Производитель 2
№730
Исходный
˃16
образец
Разведение 130,0
образца
1/20
˃15,8
142
Производитель 3
˃100
-

32.

Благодарю за внимание!