Микробиологические основы

1.

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего
образования
«Вятский государственный университет»
Институт биологии и биотехнологии
Кафедра микробиологии
Презентация к лекции по дисциплине «Микробиологический контроль
косметических средств»
Микробиологические
основы

2.

2
Этап проведения
анализа
• Отбор проб;
• Транспортирование;
• Подготовка проб к анализу;
• Проведение анализа;
• Обработка результатов.

3.

3
Отбор проб. Визуальный осмотр
- нормальные по внешнему виду, при осмотре которых
не обнаружены отклонения, вызванные развитием
микроорганизмов;
- подозрительные по внешнему виду, при осмотре
которых обнаружены одно или несколько отклонений,
которые могли возникнуть как вследствие микробной
порчи, так и вследствие химических и биохимических
реакций в продукте;
- испорченные продукты, при осмотре которых
обнаружены явные дефекты упаковочных единиц и
(или) продукта: вздутие, брожение, плесневение,
гниение, ослизнение, прокисание и др.

4.

4
Отбор проб
• Отбор проб продукции проводят по каждому виду
отдельно.
• Пробы продуктов для микробиологических анализов
отбирают до взятия проб для физико-химических и
органолептических анализов, асептическим способом,
исключающим микробное загрязнение продукта из
окружающей среды. Пробы помещают в стерильную
посуду, края которой предварительно обжигают в
пламени горелки.
• Масса (объем) пробы продукта устанавливается в
соответствии с нормативно-технической
документацией на конкретный вид продукции и
должна быть достаточной для проведения
микробиологических анализов.

5.

5
Отбор проб от кусковой продукции
• Пробы отбирают ложкой, половником, пинцетом,
пилой, пробоотборником или другим инструментом.
• При массе изделия более 1 кг у изделий квадратной
формы разрез делают перпендикулярно к грани, у
изделий продольной формы – перпендикулярно
продольной оси, у шарообразных изделий –
клинообразно. Возможен отбор проб из глубины.
• Отбор точечных проб повторяют до тех пор, пока не
отберут массу (объем) продукта, необходимую для
формирования лабораторной пробы, при этом массу
(объем) точечных проб допускается не устанавливать.

6.

6
Отбор проб Жидких и пастообразных продуктов
• Из емкости вместимостью не более 1000 см3 пробу отбирают
пипеткой или металлическим половником. Если продукт
неоднороден по высоте емкости, то содержимое ее перед
отбором пробы тщательно перемешивают.
• Из емкости вместимостью не менее 1000 см3 пробу отбирают
с различной глубины не менее чем из трех слоев продукта, в
одну посуду или каждую пробу в отдельную посуду, в
зависимости от цели испытания.
• При отборе проб из резервуара, оснащенного краном, кран
сначала промывают, вытирают ватой, пропитанной этиловым
спиртом, и обжигают в пламени. Предварительно выпускают
немного жидкости и только после этого отбирают пробы.
Данный метод не применим для отбора проб от продуктов,
содержащих спирты.

7.

7
Отбор проб сыпучих продуктов
• Пробу от сыпучего продукта отбирают после его
тщательного перемешивания мешалкой или
половником. Пробу от продукта, который не может
быть перемешан, отбирают точечно из разных мест.
ОТБОР ПРОБ ПРОДУКТОВ С РАЗНОЙ КОНСИСТЕНЦИЕЙ
• Пробы отбирают таким образом, чтобы в них входили
все компоненты в соотношении, в котором они
находятся в продукте. Допускается в зависимости от
особенностей анализируемого продукта, цели
испытания и предполагаемой микробиологической
загрязненности отбирать пробы от каждого
компонента отдельно.

8.

ПОДГОТОВКА ПРОБ К АНАЛИЗУ
• Упаковку пробы осматривают и устанавливают
соответствие надписи на литографическом оттиске или
на этикетке указанной в сопроводительном документе.
• Упаковку с пробой очищают от загрязнений.
• Если на анализ поступили герметично укупоренные
пробы продукта, то проверяют герметичность тары.
Герметично укупоренную стеклянную, металлическую
или полимерную тару с продуктом моют водой с
детергентом, затем ополаскивают чистой водой и
высушивают. Негерметичную упаковку с продуктом
протирают тампоном, смоченным этиловым спиртом.
8

9.

ВСКРЫТИЕ УПАКОВКИ С ПРОБОЙ ПРОДУКТА.
• Непосредственно перед вскрытием сыпучие или имеющие жидкую
фазу упаковки с пробой продукта в потребительской таре
перемешивают 10-кратным переворачиванием тары с донышка на
крышку или круговым движением.
• Упаковку с пробой продукта (кроме консервов) протирают
тампоном, пропитанным 70 % этиловым спиртом, спирт сжигают
или удаляют путем свободного испарения. Затем упаковку
вскрывают, горлышко металлических или стеклянных банок
обжигают и отбирают массу (объем) продукта, необходимую для
приготовления одной или нескольких навесок.
• Вскрытие упаковки с пробой продукта проводят таким образом,
чтобы была исключена возможность загрязнения продуктом
окружающих предметов и среды.
9

10.

ОБРАБОТКА ПОВЕРХНОСТИ ЭТИЛОВЫМ СПИРТОМ
• у стеклянных банок обрабатывают крышку, у металлических банок конец, противоположный маркированному. Поверхность крышки
протирают спиртовым тампоном, тампон оставляют на поверхности и
перед вскрытием консервов зажигают;
• резиновые колпачки и корончатые крышки, бекелитовые и
пластмассовые затворы обрабатывают так же, но тампон не зажигают;
• металлическую крышку (конец) в зависимости от целей анализа
вскрывают или прокалывают пробойником 1-4 раза в
непосредственной близости от горящего тампона. Отобранные навески
продукта немедленно высевают в питательные среды или переносят в
пептонно-солевой раствор для приготовления разведения;
• перед вскрытием бутылок или туб с завинчивающимися крышками
обработанную крышку или бушон отвинчивают.
10

11.

ОТБОР НАВЕСОК И ПРИГОТОВЛЕНИЕ ИСХОДНОГО РАЗВЕДЕНИЯ
• Из каждой пробы отбирают одну или несколько навесок для
приготовления разведений и(или) высева в питательные
среды.
• Масса (объем) навески должна быть установлена в
нормативно-технической документации на конкретный вид
продукции или методы анализа.
• Навеску для посева отбирают весовым или объемным
методом непосредственно после вскрытия пробы продукта.
Вскрытие проводят в условиях, исключающих загрязнение
продукта микроорганизмами, в непосредственной близости от
пламени горелки стерильными инструментами.
• Для приготовления разведений навески продукта используют
пептонно-солевой раствор.
11

12.

ОТБОР НАВЕСОК И ПРИГОТОВЛЕНИЕ ИСХОДНОГО РАЗВЕДЕНИЯ
• При необходимости разведения навески продуктов,
содержащих большое количество жира, можно
использовать поверхностно-активные вещества
(двууглекислый натрий и др.), не обладающие
антимикробной активностью.
• Жидкий продукт, насыщенный углекислым газом,
переносят в стерильную, закрытую ватной пробкой
коническую колбу или в другую посуду и подогревают
при частом перемешивании круговыми движениями на
водяной бане при температуре от 30 до 37 °С до тех пор,
пока из него не перестанут выделяться пузырьки газа.
• Определение микробного загрязнения поверхности проб
продукта проводят смывом с помощью ватных тампонов.
12

13.

ИСХОДНОЕ РАЗВЕДЕНИЕ НАВЕСКИ ПРОДУКТА
ГОТОВЯТ
• растворением продуктов;
• разбавлением продуктов, имеющих жидкую
фазу;
• суспензированием порошков, пастообразных
продуктов и поверхности загрязненных
микробами кусочков продукта;
• гомогенизацией твердых продуктов.
13

14.

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
• Для выявления или подсчета живых микроорганизмов
соответствующих групп или видов, определения их
физиологических или таксономических свойств проводят
культивирование посевов.
• Культивирование проводят на питательных средах в условиях,
благоприятных для роста определяемых микроорганизмов.
• Для выявления или подсчета микроорганизмов в питательные
среды вносят навески продуктов, или разведения навески, или
осажденные на мембранном фильтре клетки микроорганизмов.
• Для определения физиологических или таксономических
свойств микроорганизмов применяют одно- или многоэтапный
порядок культивирования микроорганизмов на обогатительных
неселективных, селективно-диагностических и диагностических
средах.
14

15.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ
МИКРООРГАНИЗМОВ
• Количественные (Учитываются либо все
колонии микроорганизмов, выросшие в данных
условиях (например, при определении
КМАФАнМ, ОМЧ), либо только колонии
определенной группы или групп
микроорганизмов (например, плесени и
дрожжи)):
• Качественные – на присутствие/отсутствие МО
– использование диффиринциальнодиагностических и иногда селективных сред.
15

16.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ
• поверхностный чашечный метод;
• глубинный чашечный метод и его модификации;
• двухслойный чашечный метод;
• метод НВЧ (наиболее вероятного числа) в разных
вариантах исполнения;
• метод мембранной фильтрации и другие.
16

17.

ГЛУБИННЫЙ МЕТОД ПОСЕВА В ПЛОТНЫЕ
СРЕДЫ
• Жидкий продукт или разведение навески вносят
параллельно в две чашки Петри и заливают не позднее,
чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до
температуры 45±0,5°C питательной средой.
• Высота слоя питательной среды должна быть 4-5 мм.
• Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным
материалом круговыми движениями чашки так, чтобы
среда не вытекла из чашки и не загрязнила крышку.
• После застывания среды чашки с посевами вверх дном
помещают в термостат.
17

18.

ПОВЕРХНОСТНЫЙ МЕТОД ПОСЕВА НА
ПЛОТНЫЕ СРЕДЫ
• Среду наливают в чашку Петри и после застывания
подсушивают. Для удаления влаги с поверхности
среды чашки открывают, пере-ворачивают вверх
дном и выдерживают в течекие 30 мин при 48-50
°C.
• На подсушенную среду наносят жидкий продукт или
разведение навески и равномерно растирают по
поверхности шпателем - изогнутой стеклянной
палочкой. Подсушивают, переворачивают.
18

19.

МЕТОД МЕМБРАННЫХ ФИЛЬТРОВ
• Мембранные фильтры применяют для анализа легко фильтруемых жидких
продуктов или продуктов, дающих растворы с высоким осмотическим
давлением.
• Жидкий продукт, содержащий небольшое число взвешенных частиц,
фильтруют в два этапа. Для освобождения от частиц его фильтруют через
фильтр со средним диаметром пор 4 мкм, а затем — через фильтр, диаметр и
размеры пор которого выбраны в соответствии с группой или видом
выявляемых микроорганизмов. Оба фильтра культивируют в аналогичных
условиях.
• После осаждения микроорганизмов на фильтре из растворов с высоким
осмотическим давлением или из растворов, содержащих антимикробные
вещества, его промывают дистиллированной водой или пептонно-солевым
раствором.
• Фильтр переносят на плотные или в жидкие питательные среды. На плотную
среду фильтр накладывают нижней стороной так, чтобы она полностью
соприкасалась с поверхностью среды. Посевы термостатируют в условиях,
благоприятных для роста определяемых микроорганизмов.
19

20.

НВЧ
• Этот способ используют, если нужно определить не
только превышение определенных предельных
норм, но и количество присутствующих
микроорганизмов.
• В зависимости от требуемой точности результатов
засевают необходимое количество флаконов или
пробирок одним и тем же разведением.
• Значения индекса НВЧ для приемлемых сочетаний
находят по таблице. С помощью индекса НВЧ
определяют наиболее вероятное количество
микроорганизмов в заданном объеме по формуле.
20