Диареегенные эшерихии
Дифференциация эшерихий
Антигены
Энтеротоксигенные E.coli (ETEC, ЭТЭ, ЭТКП)
Энтеропатогенные E.coli (EPEC, ЭПЭ, ЭПКП)
Энтероинвазивные E.coli (EIEC, ЭИЭ, ЭИКП)
Энтерогеморрагические E.coli (ЭГКП, EHEC)
Энтерогеморрагические E.coli (ЭГКП,EHEC)
Схема выделения и идентификации E. coli O157:H7/O157:H-
Энтероаггрегиррующие E.coli (ЭАКП,EAggEC)
Диффузно-адгерентные E coli (DAEC)
E. coli O104:H4
Клиническая классификация эшерихиозов принятая в России(Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я., 1999)
Иммунитет
Эпидемиологические особенности
Лабораторная диагностика
Лабораторная диагностика
Лабораторная диагностика
Агглютинация в РА на стекле с ОКА-сывороткой означает принадлежность колонии к диареегенным эшерихиям
Сыворотки диагностические эшерихиозные ОК поливалентные
Серотипирование чистой культуры в реакции агглютинации на стекле
Лечение
3.35M
Категория: МедицинаМедицина

Диареегенные эшерихии

1. Диареегенные эшерихии

2.

В настоящее время известно около 170 антигенных
вариантов Е. coli; более 80 из них вызывают колиинфекцию.
Диареегенные эшерихии отличаются от остальных
эшерихий, в том числе от банальной кишечной
палочки – комменсала ЖКТ , антигенными
свойствами, факторами патогенности, особенностями
патогенеза, локализацией патологического процесса,
клинически и эпидемиологически.

3.

Возбудители кишечных коли-инфекций:
Энтеропатогенные E.coli (ЭПКП);
Энтеротоксигенные E.coli (ЭТКП);
энтероинвазивные E.coli (ЭИКП);
Энтерогеморрагические E.coli (ЭГКП);
Энтероаггрегирующие E.coli (ЭАКП)
Диффузно-адгерентные E coli (DAEC)
Возбудители внекишечных эшерихиозов:
Уропатогенные E.coli
Септицемические E.coli
Менингит-ассоциированные E.coli

4.

5.

Морфология. Прямые грамотрицательные
палочки размером 0,4-0,6x2-6 мкм, подвижные за
счет перитрихиально расположенных жгутиков,
могут иметь микрокапсулу
Факультативные анаэробы
Культуральные свойства. Не требовательны к
питательным средам, на плотных средах образуют
гладкие полупрозрачные колонии. На
дифференциальных средах (Эндо, Левина)
образуют окрашенные колонии
(лактозопозитивные)
Биохимические свойства: обладают
выраженной биохимической активностью

6. Дифференциация эшерихий

Подвижность
Ферментацию глюкозы с газообразованием
Ферментация лактозы
Образование индола
Отсутствие образования сероводорода
«Неактивные» E.coli имеют сниженную биохимическую
активность

7. Антигены

О-антиген – ЛПС наружной мембраны клеточной стенки,
полисахаридная часть;
термостабильный; по О-антигену
разделяют на серогруппы
Н-антиген – жгутиковый белок флагеллин, термолабильный, отвечает
за деление на серотипы
К-антиген – поверхностные полисахариды, термолабильны, как
правило, мешают определению О-антигенной специфичности (Оинагглютинабельность). По отношению к температуре подразделяют
на L и В-антигены – термолабильные и А-антиген – термостабильный
По О-антигену или сочетанию О и К-антигенов эшерихии разделены на
серогруппы
По сочетанию О:К:Н или О:Н – на серовары
Антигенная формула: О55:К59:Н6 или О157:Н7

8.

9.

10.

11. Энтеротоксигенные E.coli (ETEC, ЭТЭ, ЭТКП)

ЭТКП являются возбудителями холероподобного
заболевания у детей и взрослых, известного под названием
«диарея путешественников».
Патогенность связана с выработкой 2 энтеротоксинов,
которые вызывают развитие секреторной диареи:
термолабильного (LT), структурно и функционально
связанного с холерным токсином, и термостабильного (ST)
энтеротоксинов. Синтез обоих токсинов детерминируется
плазмидой.
Факторами патогенности также являются пили IV типа,
которые называются факторами колонизации CF (от
англ. colonization factors). Их синтез контролируется второй
плазмидой. Факторы колонизации CF являются пилями IV
типа.
Благодаря CF ЭТКП прикрепляются и размножаются на
поверхности эпителия тонкой кишки.
Колонизация поверхности тонкой кишки обеспечивает
массивный выброс энтеротоксинов, которые нарушают
водно-солевой обмен в кишечнике, приводя к развитию
водянистой диареи.
Механизм развития диареи связывают с активацией
аденилатциклазы LT кишечника, а гуанилатциклазы - ST.

12. Энтеропатогенные E.coli (EPEC, ЭПЭ, ЭПКП)

ЭПКП вызывают диарею у детей первого года жизни.
Заболевание может также протекать как внутрибольничная
инфекция в отделениях для новорожденных и грудных детей,
находящихся на искусственном вскармливании.
Заболевание передается контактно-бытовом путем.
Пили и белок-интимин обеспечивают тесное взаимодействие
бактериальной клетки с эпителиоцитом, а в результате действия
эффекторных белков секреторной системы в месте
прикрепления бактериальной клетки к эпителиоциту
формируется пьедестал, который является результатом
реорганизации клеточного цитоскелета эффекторными белками,
представляя собой полимеризованный актин.
Процесс размножения на поверхности эпителия тонкой кишки,
приводящий к разрушению микроворсинки и повреждению
апикальной поверхности эпителия, известен под названием
«прикрепление и сглаживание»
В результате в участке прикрепления бактерий к эпителию тонкой кишки происходит
дегенерация эпителиальной поверхности, сопровождающаяся потерей эпителиальных
микроворсинок и сборкой пьедесталоподобной актиновой структуры, следствием чего
является уменьшение всасывающей поверхности кишечника.
Некоторые серовары, например О55:Н10, O111H2, O26HNM, продуцируют шигаподобные
токсины.

13.

A. Электронная микрофотография клеток
слизистой кишечника кролика,
инфицированная энтеропатогенной
кроличьей Escherichia coli (EPEC)
B. B. Взаимодействие EPEC со слизистой
кишечника.
Начальная адгезия с помощью пилий,
которая также опосредует аггрегацию
бактерий.
Далее инициальное прикрепление, и EPEC
секретирует в клетку хозяина некоторые
факторы вирулентности (секреция IIIтипа).
В клетке начинается активация
фосфолипазы С и протеинкиназы, Ca2+
высвобождается из внутренних хранилищ.
Бактерия более тесно прикрепляется к
клетке, продуцирует в клетку хозяина свой
собственный рецептор и дополнительно
закрепляется за его наружную часть.
Актин, миозин и некоторые другие белки
цитоскелета подходят к месту адгезии.
Реорганизованный цитоскелет образует
фундамент для проживания бактерии на
поверхности клетки.

14.

Патогенез поражений определяется адгезией возбудителей к
эпителию тонкого кишечника, повреждением микроворсинок,
однако без инвазии в клетку.
Вирулентность этих бактерий связана с наличием особого
генного локуса, который находится в составе хромосомного
островка патогенности – локуса «стирания энтероцитов».
Данный локус кодирует различные факторы патогенности.
Важнейшие из них – адгезин интимин и рецепторный для
него белок Tir.
Для направленной доставки рецепторного Tir-белка в
энтероциты у возбудителей имеется специализированная
органелла инжектисома (или иглокомплекс). В ее состав входят
сократительные белки. Инжектисома относится к системе III
типа секреции бактерий, которая обеспечивает активное
поступление белков патогенности в пораженные клетки.

15.

В норме на энтероцитах Tir-рецептора нет. Однако он
присутствует в бактериальной клетке. После контакта E. сoli с
клетками эпителия тонкой кишки с помощью инжектисомы
происходит впрыскивание белков, составляющих Tir-рецептор к
интимину, внутрь эпителиоцита. Через некоторое время этот
рецептор появляется на мембране энтероцита.
E. сoli посредством интимина присоединяется к внедренному Tirрецептору. Это обеспечивает прочную адгезию микроба с
поверхностью эпителиальных клеток. Кроме того, Tir-рецептор
активирует перестройку внутриклеточного актина и других белков
в месте прикрепления микробов.
В результате после присоединения большого количества бактерий
происходит сглаживание и стирание микроворсинок эпителия
кишечника. При этом может развиваться локальное воспаление.
Все это ведет к нарушению всасывания, расстройству
электролитного обмена и диарее.

16.

(D)Сканирующая электронная микрофотография энтеропатогенных
Е. coli, прикрепляющихся к опороподобным клеточным выростам на
поверхности HeLa клеток. (E) Окружение Shigella flexneri
цитоплазматическими выростами клеток (по типу ряби), во время
вторжения бактерий в HeLa эпителиальные клетки.

17. Энтероинвазивные E.coli (EIEC, ЭИЭ, ЭИКП)

ЭИКП вызывают дизентериеподобные
заболевания у взрослых и детей.
Патологический процесс локализуется в
толстой кишке и нижнем отделе
подвздошной
От шигелл приобрели плазмиду,
кодирующую синтез поверхностных
эффекторных ТТСС белков:
IPA-антигенов, опосредующих процесс
инвазии в клетки слизистой оболочки
толстой кишки,
и белок VirG, обеспечивающий сборку
актина.
Результатом действия этих факторов патогенности является размножение в эпителиальных
клетках слизистой оболочки толстой кишки с последующей их деструкцией
ЭИКП приобрели и некоторые антигены шигелл, что обеспечивает их агглютинацию
шигеллезными сыворотками
Подобно шигеллам они неподвижны, не ферментируют лактозу, не образуют газ при
ферментации глюкозы
Вирулентность ниже, чем у шигелл, поэтому заболевание протекает по типу пищевой
токсикоинфекции после критического накопления возбудителя в пищевом продукте
Заражение ЭИКП происходит водным и элементарными путями, возможны вспышки
внутрибольничных инфекций, вызванных ЭИКП.

18. Энтерогеморрагические E.coli (ЭГКП, EHEC)

Острые кишечные инфекции с проявлениями геморрагического колита (ГК) и
гемолитикоуремического синдрома (HUS), вызываемые эшерихиями,
продуцирующими шигатоксины (STEC), распространены во многих странах
мира и регистрируются в виде спорадических случаев или вспышек с охватом
больших количеств людей: от десятков до нескольких тысяч.
Заражение происходит при употребления недоброкачественных мясных
продуктов, непастеризованного молока, йогуртов, сыра, овощей, шпината,
разных салатов, пророщенных зерен бобовых, соков, других пищевых
продуктов и воды, обсемененных STEC-бактериями.
Возможно заражение людей при контакте с сельскохозяйственными и
домашними животными, а также при непосредственном контакте с больными
STEC-инфекцией. Штаммы EHEC представляют серьезную угрозу жизни
особенно для пожилых людей и детей до 5 лет.
Источником и основным резервуаром этого патогена являются
сельскохозяйственные животные: крупный рогатый скот, овцы, козы, свиньи и
птица, а также дикие животные.

19. Энтерогеморрагические E.coli (ЭГКП,EHEC)

Факторы патогенности: шигаподобные токсины SLT-I, SLT-II, адгезин интимин и
эффекторные белки ТТСС; сериновая протеаза и гемолизин
Развитие ГК и HUS обусловлено действием шигаподобных токсинов, которые
блокируют синтез белка в эндотелии мелких кровеносных сосудов, в том числе
почек, что ведет к кровотечению, ишемии и некрозу тканей. Сериновая
протеаза нарушает процесс свертывания крови.

20.

21. Схема выделения и идентификации E. coli O157:H7/O157:H-

22. Энтероаггрегиррующие E.coli (ЭАКП,EAggEC)

ЭАКП являются преобладающим этиологическим агентом
персистирующей диареи в развивающихся странах и медленно
текущей диареи в индустриально развитых странах.
Особенность возбудителя заключается в том, что они прикрепляются
к эпителиальным клеткам в характерной манере, напоминающей
укладку кирпичей.
Прикрепляясь к слизистой оболочке кишечника, они стимулируют
продукцию слизи, приводя к образованию толстой слизистой
биопленки, инкрустированной ЭАГКП.
Образование биопленки усиливает персистенцию микроба и создает
барьер, препятствующий проникновению антибиотиков и
антибактериальных факторов хозяина.
В развитии заболевания участвуют: фимбриальные адгезины
(AAF), синтез которых опосредуется плазмидой 65 МД,
высокоиммуногенный белок дисперзин, который, связываясь с
клеточной поверхностью, принимает участие в образовании
биопленки, а также термостабильный энтеротоксин-1 и токсины с
цитотоксическим эффектом.
Неинвазивны
Обнаружены только у человека.
Не все представители групп EAgEC способны вызывать ОКИ у человека, как правило, болеют
лица с ослабленной сопротивляемостью к инфекциям (дети раннего возраста, лица
пожилого возраста, ВИЧ-инфицированные и др.).

23. Диффузно-адгерентные E coli (DAEC)

Характеризуются образованием диффузных аггрегатов на эпителиальных
клетках HeLa или HEp-2
Обладают адгезинами семейства Afa/Dr
После связывания адгезинами происходит «демонтаж» актина в энтероцитах,
приводящий к удлинения микроворсинок и перераспределению белков
цитоскелета
Последнее обеспечивают ТТСС белки-эффекторы (см. секреция III типа)
Обнаружены автотранспортеры – сериновые протеазы, способные повреждать
связи эпителиальных клеток с повышением проницаемости
DAEC демонстрируют провоспалительные эффекты. Связанные с повышенной
секрецией интерлейкина- 8 эпителиальными клетками.
Штаммы DAEC , несущие гены вирулентности, обнаружены в составе
нормальной микрофлоры клинически здоровых детей.

24.

25. E. coli O104:H4

E. coli O104:H4
Серовар E. coli O104:H4 , явившийся причиной крупной эпидемической
вспышки геморрагического колита и тяжелых случаев HUS в Германии и других
странах Европы весной-летом 2011 года, охватившей более 4000 человек, по
своим культуральным, биохимическим и другим фенотипическим свойствам
является типичным представителем вида Е. coli.
Генотип этого высоковирулентного для человека штамма вобрал в себя
факторы патогенности энтероаггрегативных эшерихий (способность к
аггрегации и образованию биопленки на слизистой кишечника) и
энтерогеморрагических (способность к синтезу веротоксина (шигаподобного
токсина) Stx2 - основного фактора, обусловливающего HUS у человека).
Кроме того, эпидемический штамм E. coli O104:H4 характеризуется широким
спектром устойчивости к антибактериальным препаратам: к бета-лактамам ампициллину, амоксициллину/клавулонату, пиперациллину/сульбактаму,
пиперациллину/тазобактаму, цефуроксину, цефуроксиму, цефокситину,
цефотаксиму, цефтазидиму, цефподоксиму, а также к стрептомицину,
налидиксовой кислоте, тетрациклину и триметоприму/сульфаметоксазолу.
Устойчивость к бета-лактамам обусловлена присутствием в геноме штамма
бета-лактамаз расширенного спектра (БЛРС) - СТХ-М-15 и ТЕМ-1.

26. Клиническая классификация эшерихиозов принятая в России(Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я., 1999)

По этиологическим
признакам:
энтеротоксигенные;
энтероинвазивные;
энтеропатогенные;
энтерогеморрагические;
энтероадгезивные.
По тяжести течения:
лёгкое;
средней тяжести;
тяжёлое.
По форме заболевания:
гастроэнтеритическая;
энтероколитическая;
гастроэнтероколитическая;
генерализованная (колисепсис, менингит,
пиелонефрит, холецистит).

27. Иммунитет

При кишечных эшерихиозах вырабатывается местный
иммунитет, опосредованный секреторными IgA.
После кишечного эшерихиоза, вызванного ЭТКП, происходит
выработка антител к субъединице В LT, иммунологически
родственной субъединице В холерного энтеротоксина.
У детей первого года жизни пассивный трансплацентарный
иммунитет к ЭПКП обеспечивается проходящими через плаценту
IgG.
Естественный иммунитет детей первого года жизни
обеспечивают бифидобактерии, которые колонизируют
кишечник к 5-му дню жизни, и антитела, находящиеся в
материнском молоке.
Надежный иммунитет к возбудителям парентеральных
эшерихиозов не вырабатывается.
Специфическая профилактика не разработана.

28. Эпидемиологические особенности

ЕТЕС – антропоноз;. Максимальна заболеваемость у детей после
прекращения грудного вскармливания. Высокая инфицирующая доза.
ЕРЕС – антропоноз. Максимальная заболеваемость у детей до 2 лет. В
старшем возрасте высока частота бессимптомного носительства.
EIEC – антропоноз. Эпидемиология сходна с шигеллезами, но
инфицирующая доза выше.
EHEC – зооноз; естественный резервуар – крупный рогатый скот, режесвиньи, собаки, куры. Низкая инфицирующая доза. Пищевой, реже водный
путь передачи.
EAgEC – антропоноз. В основном – спорадическая заболеваемость. У части
пациентов в форме длительного (около14 дней) энтерита без
фебриллитета.
DAEC- антропоноз? Эпидемиология изучена недостаточно

29. Лабораторная диагностика

1. Бактериологический метод
2. Серологический метод (ИФА для обнаружения LT- и
ST-энтеротоксинов);
3. Молекулярно-генетический метод (ПЦР для
обнаружение генов, кодирующих факторы
вирулентности);
4. Иммунофлуоресцентный метод (прямой) как
экспресс-метод во время вспышек кишечной
инфекции

30. Лабораторная диагностика

О-антигенная характеристика изолята E. coli в бактериологическом
исследовании не во всех случаях четко коррелирует с наличием у него
факторов вирулентности, определяющим принадлежность к одной из шести
групп диарогенных эшерихий.
Прямыми критериями отнесения E. coli к патогенетическим группам являются
ключевые факторы вирулентности, наиболее охарактеризованные из которых
представлены ниже.
Для EHEC – продукция шигаподобных токсинов (веротоксинов) 1 и/или 2 типа,
в сочетании с наличием интимина (eae-ген) или без него;
Для ЕТЕС – продукция термостабильного (ST) или термолабильного (LT)
токсинов,
Для ЕРЕС – наличие так называемого А/Е (attaching and effacing) эффекта,
обеспечиваемого интимином (eae – ген) при отсутствии генов шигаподобных
токсинов,
Для EIEC- наличие плазмидных генов факторов вирулентности (inv, ipa и др.),
Для EAgEC – наличие плазмидных генов факторов вирулентности aggR, aspU,
Для DAEC – afa – afimbrial factors adhesins, daa – DAEC F1845 fimbriae и др.

31. Лабораторная диагностика

Клинический материал: испражнения. Рвотные массы и др.
1. Бактериологический метод
1 этап: Посев на среду Эндо с целью получения
изолированных колоний.
2 этап: Изучение культуральных и морфологических свойств;
постановка ориентировочной реакции агглютинации на
стекле с поливалентной ОКА-коли сывороткой с материалом
из лактозопозитивных колоний. Колонию с положительной
реакцией отсевают на скошенный агар или среду Клиглера
3 этап: Идентификация по биохимическим свойствам
(система API-20E); серологическая (антигенная)
идентификация с поливалентными OKB,OKC, OKD и OKE
сыворотками, а затем последовательно с адсорбированными
моновалентными ОК-сыворотками и групповой О-сывороткой
с гретой культурой (при кипячении удаляется К-антиген)

32. Агглютинация в РА на стекле с ОКА-сывороткой означает принадлежность колонии к диареегенным эшерихиям

Агглютинация в РА на
стекле с ОКАсывороткой означает
принадлежность
колонии к
диареегенным
эшерихиям
Среда Клиглера
до посева

33. Сыворотки диагностические эшерихиозные ОК поливалентные

Действующим началом сывороток являются специфические К и О агглютинины
против антигенов эшерихий патогенных ОК групп:
О44:К74
О114:К90
О127а:К63
ОКА: О18ас: К77
О20:К84
О55:К59
О124:К72
О119:К69
О128аdc:К67
О75:К
О125:К70
О142:К86
О25:К11
О86а: К61
О126:К71
О143:К
О26:К60
О111аb:К58
О151:К
О144:К
О33:К
ОКВ:
ОКС:
О20:К84
«408»
О26:К60
О55:К59
О111ab:К58
О86а: К61
О128abc:К67
О125:К70
О119:К69
О126:К71
О33:К
О127а: К63
ОКД:
ОКЕ:
О18ас: К77
О75:К
О143:К
О25:К11
О114:К90
О151:К
О44:К74
О142:К86
«408»
О124:К72
О142:К86
О143:К
О144:К
О151:К

34. Серотипирование чистой культуры в реакции агглютинации на стекле

ОКА-сыворотка
Поливалентная
Содержит Ат к 22 Аг серогрупп E.coli
ОКВ
«+»
ОКЕ
ОКД
ОКС
Поливалентные сыворотки более узкого спектра
«+»
«-»
«-»
«-»
Моно-сыворотки
ОК
О20:К84
«-»
О26:К60
«-»
О55:К59
«-»
О111ab:К58
«+»
РА групповой
сыворотки с гретой культурой
О111
«+»

35. Лечение

Антибиотики (амоксициллин и другие
полусинтетические пенициллины; цефалоспорины,
карбопенемы, аминогликозиды и др.
Коли-фаг, коли-протейный бактериофаг, интести-фаг
(содержит коли-бактериофаг)
По окончании курса антибиотикотерапии
рекомендованы препараты для коррекции
микрофлоры кишечника: бифидумбактерин и др.
English     Русский Правила