Лабораторная диагностика коклюша

1.

ОГАПОУ «Старооскольский медицинский колледж»
Лабораторная диагностика коклюша в ЛКМ ОГБУЗ
«Старооскольская окружная больница Святителя
Луки Крымского»
Выполнила:
студентка 340 л/д
Андреев Дмитрий Васильевич
Научный руководитель:
Белых Ирина Валерьевна

2.

Актуальность. Коклюш в нашей стране
требует пристального внимания со стороны
врачей
различных
специальностей.
Своевременная и качественная лабораторная
диагностика коклюшной инфекции позволит
избежать ошибок в постановке диагноза и будет
способствовать эффективной терапии.
Цель исследования: проанализировать методы
лабораторной диагностики коклюша в ЛКМ
ОГБУЗ «Старооскольская окружная больница
Святителя Луки Крымского».

3.

Задачи данной работы:
1. Изучить учебно-методическую литературу,
касающуюся как самого заболевания, так и его
диагностики.
2. Оценить методы лабораторной
диагностики коклюша, используемые в ЛКМ
ОГБУЗ «Старооскольская окружная больница
Святителя Луки Крымского».
3. Проанализировать динамику
заболеваемости коклюшем на территории
Белгородской области за 2017-2019 гг.

4.

Объект исследования: коклюш.
Предмет исследования: методы лабораторной диагностики
коклюша.
Материалом исследования послужили сведения о
заболеваемости коклюшем, предоставленные статистическим
кабинетом ОГБУЗ «Старооскольская окружная больница
Святителя Луки Крымского» (главный врач – Немцева
Светлана Алексеевна), медицинским информационноаналитическим центром, статистические данные из
Областного доклада «О состоянии санитарноэпидемиологического благополучия населения в
Белгородской области в 2019 году.
Методы исследования:
• научно-теоретический анализ литературы;
• сравнение методов лабораторной диагностики коклюша и
паракоклюша;
• анализ статистических данных по данной проблеме.

5.

Коклюш
–
острая
антропонозная
воздушно-капельная
бактериальная инфекция, наиболее характерным признаком, которой
является
приступообразный
спазматический
кашель.

6.

Лабораторная
диагностика
коклюша

7.

Микроскопический метод
Микроскопический метод является вспомогательным
вариантом диагностики, так как коклюшные бактерии не имеют
четких морфотинкториальных особенностей.

8.

Бактериологический метод
Схема бактериологической диагностики коклюша
включает 4 этапа:
I этап (1-й день). Забор материала : основной материал –
слизь с задней стенки глотки. Посев на пластинки БордеЖангу с 20-30% крови или КУА, бордетеллагар с
добавлением
селективного
фактора
цефалексина;
термостатирование при 35-36°С, 2-5 суток с ежедневным
просмотром. На КУА колонии имеют серовато-кремовый
цвет, а на среде Борде-Жангу приобретают жемчужный или
ртутный блеск.

9.

II этап (2-3-и сутки). Отбор характерных колоний и отсев
на сектора пластинки КУА или бордетеллагара для
накопления чистой культуры, термостатирование. Изучение
морфологических и тинкториальных свойств в мазке по
Граму. При наличии множества типичных колоний изучение
антигенных свойств в слайд-агглютинации с поливалентной
коклюшной и паракоклюшной сыворотками и выдача
предварительного ответа.

10.

Ш этап (4-5-е сутки). Проверка чистоты накопленной
культуры в мазках по Граму. Изучение антигенных
аггютинации с поливалентными коклюшной, паракоклюшной
и адсорбированными факторными сыворотками 1 (2, 3) и 14,
выдача предварительного ответа. Изучение биохимических
свойств (уреазной и тирозиназной активности, способности
утилизировать цитрат натрия). Изучение подвижности и
способности расти на простых средах.
IV этап (5-6-е сутки). Учет дифференциальных тестов;
выдача окончательного ответа по комплексу фенотипических и
антигенных свойств.

11.

Серологические методы
Начиная с 3-4 недели заболевания в
крови больных начинают появляться
антитела, которые можно обнаружить
серологическим методом c помощью
реакции агглютинации, РСК по БордеЖангу и РНГА, РИФ, ИФА.

12.

Реакция агглютинации
Пробирки
с
разведенной
сывороткой
и
добавленным
в
них
диагностикумом помещают на 2 часа в термостат при 37 °C, а затем на сутки
оставляют при комнатной температуре.
Реакция
считается
положительной
при
четкой
агглютинации
с
интенсивностью на ++ + + и + + +. Результаты реакции имеют
диагностическое значение только при изучении их в динамике, в связи с чем
они повторяются не менее двух раз в течение болезни с интервалами 5-7
дней.

13.

Реакция непрямой гемагглютинации
Основана на использовании эритроцитов (или латекса) с
адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами,
взаимодействие которых с соответствующими антителами или
антигенами сыворотки крови больных вызывает склеивание и
выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде
фестончатого осадка.
Через 2 ч инкубации при 37°С учитывают результаты, оценивая
внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): при
отрицательной реакции появляется осадок в виде пуговки на дне
лунки, при положительной реакции − характерный кружевной осадок
эритроцитов, тонкая пленка с неровными краями.

14.

Реакция связывания комплемента по Борде-Жангу
Омыв бактерий центрифугируют до полного просветления, осадок
эмульгируют в дистиллированной воде для растворения случайно смытых со
среды эритроцитов. После повторного центрифугирования готовят 1 млрд.
суспензию культуры (взвесь 2-дневной культуры палочек коклюша),
инактивируют при +56 °C 1 час и подвергают титрованию. Антиген титруют
в присутствии комплемента.
Учет результатов :
«++++» − отсутствие гемолиза, надосадочная жидкость прозрачная,
бесцветная; «+++» − гемолиз 25 % эритроцитов; «++» − гемолиз 50%
эритроцитов; «+» − гемолиз 75% эритроцитов; «−» − полный гемолиз
эритроцитов, осадок отсутствует, жидкость интенсивно окрашена
гемоглобином.

15.

Реакция иммунофлюоресценции
Для этого мазки из исследуемого материала обрабатывают
специальными
флюоресцирующими
сыворотками
или
люминесцирующими
коклюшными
иммуноглобулинами,
приготовленными из гипериммунных антибактериальных
сывороток.
Исследование
проводят
с
помощью
люминесцентного микроскопа.

16.

Иммуноферментный анализ (ИФА)
В роли инфекционного возбудителя коклюша выступает
палочка Борде-Жангу. Выделяемые
палочкой токсины
являются антигенами, в ответ на которые иммунная система
ребенка вырабатывает антитела – иммуноглобулины (Ig).
Следовательно, повышение иммуноглобулинов с достаточной
степенью достоверности свидетельствует об этом заболевании.
При коклюше повышаются иммуноглобулины нескольких
классов. Анализ на иммуноглобулины при коклюше позволяет
судить о стадии и тяжести заболевания.

17.

Молекулярно-генетический метод (ПЦР)
В основе этого метода исследования лежит многократное
копирование (амплификация) специфических участков ДНК
искомых бактерий, в процессе повторения от 35 до 45 раз
запрограммированных циклов, состоящих из трех (как правило)
режимов температуры, удерживаемой определенное время.

18.

Динамика заболеваемости коклюшем за 2017-2019 гг.
на территории Белгородской области в сравнении с
общероссийскими показателями (на 100 тыс. населения)
9,81
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
7,1
Россиская Федерация
Белгородская область
3,69
2,21
2,26
0,97
2017 год
2018 год
2019 год

19.

Административные территории с превышением
областного показателя заболеваемости
коклюшем в 2017-2019 гг

20.

Возрастная структура заболеваемости коклюшем в
2017-2019 годы на территории Белгородской области
18,70%
34,40%
12,50%
до 1 года
1-2 года
3-6 лет
школьники
34,40%

21.

Анализ прививочного статуса заболевших
коклюшем на территории Белгородской
области за 2017-2019 гг
9,60%
3,20%
6,00%
Непривитые
Привитые
Мед.отвод
По возрасту
Отказ
11,40%
69,80%

22.

Формы течения коклюша
6,0%
Типичная форма
Атипичная стертая форма
94,0%

23.

Структура тяжести течения коклюша среди
заболевшего населения Белгородской области в
2017-2019 гг
6,0%
16,0%
Легкая форма
Среднетяжелая
форма
Тяжелая форма
78,0%

24.

Сравнение эффективности диагностики
коклюша различными лабораторными методами
11,0%
9,5%
3,5%
Бактериологический
РА с диагностикумом
коклюшным жидким
ПЦР
ИФА
76,0%

25.

ВЫВОДЫ
1. Коклюш ‒ одна из наиболее распространенных
«управляемых» инфекций, регистрируемая в настоящее
время в мире.
2. Наиболее эффективным методом в диагностике коклюша
является ПЦР.
3. Анализ уровня заболеваемости коклюшем, показал, что в
Белгородской области в динамике за 3 анализируемых года
отслеживается тенденция к увеличению заболеваемости
коклюшем. В возрастной структуре заболеваемости
коклюшем преобладают дети в возрасте до 1 года.

26.

Спасибо за внимание!