Похожие презентации:
Методы исследования комплексообразования. Леция 2
1. ЛЕЦИЯ №2
•Методы исследования комплексообразования:1) масс-спектрометрия
2) плазмонный резонанс
3) Спектральные методы
а) электронные спектры поглощения
б) линейный дихроизм
в) круговой дихроизм
г) флуоресценция
4) рентгено-структурный анализ
2.
Схематическое представление процесса образованиязаряженных каплей раствора ДНК в ацетате аммония
(отрицательная и положительная моды)
3.
Полные спектры ESI-MS дуплекса d(CGCGAATTCGCG)2с дауномицином, доксорубицином и бромистым этидием
в отрицательной (верх) и положительной (низ) моде
4.
Масс-спектрометрический анализ5.
Образование 10-компонентного белковогокомплекса с кофакторами и лигандами (а)
Диссоциация мультипротеинового комплекса (b)
6.
Плазмонный резонанс7.
Сенсограмма8.
9.
10.
11.
12. Метод кругового дихроизма Вращательная сила электронного перехода
13. Структура и спектры поглощения и КД уридина
14.
Спектр КД димера• Общее выражение
• Три слагаемых
а) собственный КД мономеров (одноэлектронный член)
б) магнитно-электрический член
в) экситонный член
• Необходимость учитывать дополнительные слагаемые в
первом члене (возмущение, вносимое полем димера) и в
остальных членах (взаимодействие с другими электронными
переходами мономера)
15.
Экситонный спектр КД16. Спектры КД ДНК при 0% и 60% спирта (В-форма) и 80% спирта (А-форма)
Спектры КД ДНК при 0% и 60% спирта (Вформа) и 80% спирта (А-форма)17.
Индуцированный КД (по Mason, 1971)• Влияние асимметричного поля ДНК: смешение
электрического и магнитного моментов одного
перехода (одно-электронный член)
• Конформационная подвижность лиганда
• Вырожденное экситонное взаимодействие между
соседними связанными молекулами лиганда
• Невырожденное экситонное взаимодействие
хромофора лиганда и мономера ДНК
• Невырожденное экситонное взаимодействие
между соседними связанными молекулами
лиганда
• Зависимость от r в каждом случае
• Соотношение со спектром поглощения
18.
Сила вращения разрешенного перехода с большим дипольныммоментом, взаимодействующего с хирально расположенным
дипольным моментом
19.
Интеркаляционное связывание20.
Бороздочное связывание21.
ИКД связанных с ДНК мономеров и димеровактиноцина
De
De
8
1 (0.13)
2 (0.065)
1,0
6
3 (0.033)
r = 0.01 - 0.07
0,5
4 (0.015)
4
2
0,0
0
-0,5
-2
-1,0
-4
-1,5
-6
-2,0
350
400
450
500
550
lnm
-8
350
400
• ИКД изолированного мономера (интеркаляция)
• Экситонное взаимодействие (димеры)
450
500
550
lnm
22.
Преобразование спектров ИКД3
De
а)
1
2
De
2
2
3
1
1
2
1
3
4
0
4
5,6
-1
0
-2
-1
-3
-4
-2
350
400
450
500
lнм
550
350
400
450
500
550
lнм
600
• Спектры ИКД связанных и взаимодействующих мономеров
• Результат вычитания из спектров взаимодействующих мономеров
предельного спектра (при r=0.02) - экситонная составляющая
ИКД
23. Инфракрасная спектроскопия
24. Флуоресцентная спектроскопия
• Физическая основа - испускание света при переходе из возбужденного восновное состояние - временной масштаб 10-9 - 10-8 с.
• Наблюдаемые параметры
1) Квантовый выход - отношение числа излученных фотонов к числу
поглощенных - зависит от:
а) внутренняя конверсия (колебательные свободы)
б) столкновение и комплексообразование с тушителем
в) интеркомбинационная конверсия (переход в триплетное
возбужденное состояние)
2) Форма и положение спектра возбуждения и излучения (флуоресценции)
а) нет зависимости от длины волны возбуждения
б) сдвиг в область более низких энергий относительно полосы
поглощения
в) зеркальное отражение длинноволновой полосы поглощения
3) Время жизнм
4) Поляризация
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31. Синглет-синглетный перенос энергии
• Способность хромофоров, удаленных от данногохромофора (до 80А), находящегося в возбужденном
синглетном состоянии, вызывать тушение его
флуоресценции - слабые взаимодействия
а) донор и акцептор энергии (D и A)
б) возникновение резонанса - совпадение энергии
излучения D с энергией поглощения А
в) теория Ферстера - зависимостьот расстояния между D
иА
32. Примеры рентгенограмм (дифракционных картин)
БелокДНК-порфирин
33. Изоморфное замещение
34. Процесс определения структуры белка по дифракции на одиночном кристалле и использованию явления аномального рассеяния
35. Пример модели, вписанной в карту электронной плотности
36.
Кристаллическая структура комплекса ДНК-актиномицинD37.
Кристаллическая структуракомплекса ДНК с дисахариднымиантрациклинами