Изучение химического состава и антиоксидантной активности листьев бадана толстолистного и корней солодки

1. «Изучение химического состава и антиоксидантной активности листьев бадана толстолистного и корней солодки».

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение
высшего образования
Первый Московский государственный медицинский университет им.
И.М.Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации
(Сеченовский Университет)
Институт фармации им. А.П.Нелюбина
Кафедра фармацевтического естествознания
«Изучение химического состава и
антиоксидантной активности листьев
бадана толстолистного и корней солодки».
Работу выполнила:
Студентка группы 05-01
Филатова Юлия Сергеевна
Научный Руководитель:
К. фарм.н, ассистент кафедры фармацевтического
естествознания — Доровских Екатерина Анатольевна
Москва,2022

2.

Актуальность
Оксидативный стресс
Повышенная вирусная нагрузка
Хронические стрессовые
ситуации
приводят к нарушениям
адаптационных возможностей
организма.
Перед наукой ставятся задачи по поиску перспективных препаратов с
минимальным количеством побочных эффектов и эффективных для лечения
широкого спектра патологий.
Одной из задач, стоящих перед фармацевтической отраслью, является курс
на импортозамещение согласно госпрограмме "Фарма-2020"
Поиск веществ, способных подавлять развитие коронавируса в организме
человека и минимизация последствий перенесенной инфекции стали
одной из приоритетных задач в 2021 году.
Критериям высокой безопасности и эффективности отвечают
фитопрепараты, которые оказывают антиоксидантное,
иммуномодулирующее, адаптогенное и противовоспалительное действие.

3.

Цель и задачи
Целью научно-исследовательской работы является изучение качественного состава и антиоксидантной
активности листьев бадана толстолистного и корней солодки.
Задачи:
1)Провести информационно-аналитическое исследование по изучаемой теме; охарактеризовать
основные фармакологические свойства и химический состав листьев бадана толстолистного и корней
солодки на основании научно-медицинской литературы;
2) Изучить качественный состав листьев бадана толстолистного и корней солодки;
3)Провести количественное определение содержания флавоноидов и сухого остатка в листьях бадана
толстолистного, корнях солодки и ноотропном сборе;
4) Определить антиоксидантную активность листьев бадана толстолистного, корней солодки и
ноотропного сбора спектрофотометрическим методом.

4.

Антиоксидантная активность
В настоящее время интерес к антиоксидантам растет. Это обусловлено тем, что антиоксиданты обладают
способностью блокировать повреждающее воздействие свободных радикалов и, тем самым, они
предохраняют организм от многих заболеваний сердечно-сосудистой и нервной систем: ишемической
болезни сердца, инсульта, болезни Альцгеймера.
Антиоксидантная активность (АОА) – скорость, с которой антиоксиданты нейтрализуют свободные
радикалы. Для оценки АОА используют различные методы :
Химические методы (титриметрические, гравиметрические)
Физико-химические методы ( фотометрические: с ДФПГ, FRAP,
CUPRAC,флуоресцентные и люминесцентные)
Электрохимические метод( амперометрический,
кулонометрический и потенциометрический методы)

5.

Листья бадана толстолистного
Бадан толстолистный (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch.,
семейство Saxifragaceae), представляет собой
многолетнее травянистое растение высотой до 50 см.
Изучали листья бадана толстолистного, являющиеся
перспективным для заготовки сырьем.
Химический состав: дубильные вещества, фенолыгаллокатехин, катехингаллат, гидрохинон,
фенологликозид-арбутин,фенолкарбоновые кислотыгалловая и эллаговая, изокумарин- бергенин,
флавнониды- кверцетин, рутин, хлорогеновая кислота.
Фармакологические свойства и применение: у
корневищ-противомикробное, вяжущее действие, у
зеленых листьев- ноотропное, адаптогенное и
иммуномодулирующее действие.

6.

Корни солодки
Солодка Glycyrrhiza L. относится к семейству бобовых
(Fabaceae). В качестве ЛРС используется солодка
голая-Glycyrrhiza glabra L. и солодка уральскаяGlycyrrhiza uralensis Fisch.
Сырье-корни солодки.
Химический состав: тритерпеновые сапонины–
глицирризиновая кислота (ГК) и ее производные - ее
агликон - глицерритиновая (глицирретовая) кислота
(ГЛК), флавоноиды- кверцетин, ликвиритигенин,
ликвиритин и глабрин,рутин, хлорогеновая кислота.
Фармакологические свойства и применение:
отхаркивающее, противовоспалительное,
иммуностимулирующее, антибактериальное
действие. Помимо этого, солодка обладает
ноотропным, противосудорожным и холинолитическим
действием.
1-солодка голая
2-солодка уральская

7.

Объект и методы
Объект исследования- листья бадана толстолистного, корни солодки
Методы исследования:
Для изучения качественного состава использовали
фармакопейные качественные реакции и
хроматографические методы (ТСХ);
Для определения содержания флавоноидов
использовали спектрофотометрический метод ( ГФ
XIV том IV ФС 2.5.0015.15 «Зверобоя трава») ;
Сухой остаток определяли гравиметрическим
методом (ГФ XIV том IV);
Процентное соотношение
компонентов в ноотропном сборе
5
5
20
50
20
Гинкго двулопастного листья - Ginkgo biloba folia
Бадана толстолистного листья - Bergeniae crassifoliae folia
Таволги вязолистной трава - Filipendulae ulmariae herba
Определение антиоксидантной активности
проводилось спектрофотометрическим методом.
Солодки корни - Glycyrrhizae radices
Боярышника плоды - Crataegi fructus.

8.

Качественные реакции на группы БАС
Наблюдаемый эффект
Групппа БАВ
Реактив
Листья бадана толстолистного
Водное извл..
Спирт. извл.
Флавоноиды
Дубильные
вещества
ЖАК
Черно-синее окрашивание
Аминокислоты
Нингидрин
Фиолетовое окрашивание раствора
Сапонины
NaOH, с HCl
Ванилин в среде HCl
Водное извл.
Черно-зеленое окрашивание
Спирт. извл.
Желтое
окрашивание
Черно-зеленое окрашивание
Фиолетовое
окрашивание
Фиолетовое окрашивание раствора
раствора
Оранжевое
Оранжевое
окрашивание
раствора;
Красное окрашивание, пена не
Появление
Образование
окрашивание
образовалась c NaOH, с HCl образование
устойчивой пены с
устойчивой пены не
раствора;
устойчивой пены
NaOH и HCl
наблюдается.
образование
образование
устойчивой пены с
устойчивой пены
NaOH и HCl.
только с HCl.
Образование темно-желтого осадка
Ацетат свинца (II)
Катехины
Спирт. извл.
Черно-зеленое водного и спиртового извлечений
FeCl3(III)
пенообразования с
Водное извл.
Ноотропный сбор
Желтое окрашивание водного и спиртового извлечений
Спиртовой 1% р-р AlCl3
Реакция
Корни солодки
Красно-оранжевое окрашивание раствора
Желтоватое
Желто-оранжевое
окрашивание
окрашивание
раствора
раствора
Красно-оранжевое окрашивание раствора

9.

Тонкослойная хроматография
Хроматограмма определения
фенольных соединений (УФ свет 365нм)
ПФ: муравьиная кислота – вода –
этилацетат (10:8:34)
Детектор: 1% раствор аминоэтилового
эфира дифенилборной кислоты, 5%
спиртовой раствор полиэтиленгликоля
400, УФ-свет при длине волны 365 нм.
1 – спиртовое извлечение ноотропного
сбора; 2 – спиртовое извлечение
листьев бадана толстолистного; 3 –
спиртовое извлечение корней солодки; 4
– СО рутина; 5 – СО хлорогеновой
кислоты.

10.

Результаты количественного определения суммы флавоноидов в
пересчете рутин в листьях бадана толстолистного, корнях
солодки и сборе ноотропном сборе
ЛРС
Листья бадана
толстолистного
Корни солодки
Ноотропный
сбор
Спектр поглощения: 1- комплекс СО рутин
с AlCl3 (٨ max 409нм),
2-комплекс ноотропного сбора с AlCl3 (٨ max 406нм)
Содержание
суммы
флавоноидов в
пересчете рутин
ഥ
Х
ΔХ
Р,%
t(P;f)
E,%
1,84
1,82
1,78
1,81
0,0758
95
4,3
4,18
1,96
0,0895
95
4,3
4,57
2,19
0,0872
95
4,3
3,99
1,97
1,99
1,92
2,22
2,15
2,19

11.

Содержание сухого остатка в извлечениях листьев бадана
толстолистного, корней солодки и ноотропного сбора
ЛРС
Листья бадана
толстолистного
Корни солодки
Ноотропный
сбор
Содержание,
%
0,411
0,414
0,419
0,345
0,341
0,348
0,350
0,355
0,358
ഥ
Х
ΔХ
Р,%
t(P;f)
E,%
0,41
0,0100
95
4,3
2,42
0,34
0,0087
95
4,3
2,53
0,352
0,0141
95
4,3
4,0

12.

Определение антиоксидантной активности
Для оценки антиоксидантной активности использовали ДФПГтест, основанный на реакции 2,2- дифенил-1-пикрилгидразила
(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, ДФПГ) с антиоксидантом, в ходе
которой идет
восстановления ДФПГ с уменьшением оптической плотности
раствора, изменяется интенсивно-фиолетовая окраска ДФПГ.
Перед проведением
испытания готовили ДФПГ в
концентрации 1:4 для
контрольного измерения и
ДФПГ в концентрации 1:2 для
добавления в колбу с
аликвотой.
Для определения
антиоксидантной активности
готовили 8 разведений
спиртового извлечения
листьев бадана
толстолистного, 6
разведений спиртового
извлечения корней солодки
и сбора ноотропного.
Контрольный раствор
ДФПГ и исследуемые
растворы измеряли на
спектрофотометре.

13.

Определение антиоксидантной активности
По полученным результатам считали антиоксидантную активность (АОА)- соотношение величин
поглощения исследуемого раствора и контрольного раствора ДФПГ в процентном соотношении по
формуле:
АОА = Ах/Адфпг
Обозначения:
Aх – величина поглощения исследуемого раствора;
Адфпг – величина поглощения контрольного раствора ДФПГ.
Для расчета IC50 строили графики зависимости АОА
от концентрации, где выбирали отрезок на прямолинейном
участке графика. И по уравнению прямой рассчитывали IC50.
IC50- концентрация исходного спиртового извлечения, при котором 50% радикалов ДФПГ связывается с
тестируемым образцом

14.

Определения АОА в спиртовых извлечениях бадана
толстолистного
График зависимости антиоксидантной активности извлечения листьев
бадана толстолистного от разведения

15.

Результаты определения АОА в спиртовых
извлечениях корней солодки
График зависимости антиоксидантной активности извлечения из
корней солодки от разведения раствора

16.

Результаты определения АОА в спиртовых извлечениях
ноотропного сбора
График зависимости антиоксидантной активности ноотропного
сбора от разведения раствора

17.

Результаты эксперимента
Извлечение
Листья бадана
Разведение
IC50 в пересчете
IC50 в пересчете
на сухой остаток
на флавоноиды
1:69,7
0,0588±0,0014 мг/мл 0,2596±0,0108 мг/мл
Корни солодки
1:10,95
0,3105±0,0079 мг/мл 1,7898±0,0817 мг/мл
Сбор ноотропный
1:101,4
0,0345±0,0013 мг/мл 0,2159±0,0086 мг/мл
толстолистного

18.

Выводы
1.В ходе проведения информационно-аналитического исследования было установлено, что нейропротекторные препараты
обладают антиоксидантной активностью. Соответственно, для растительного сырья, обладающего ноотропной активностью,
целесообразно определение АОА. Для изучения были выбраны листья бадана толстолистного и корни солодки, являющиеся
перспективным сырьем, обладающим нейропротекторным, антимикробным, антиоксидантным, противовоспалительным,
противоопухолевым, иммуностимулирующим, адаптогенным и антиоксидантным действием.
2.Проведено изучение качественного состава листьев бадана толстолистного, корней солодки и ноотропного сбора, с
помощью химических реакций и хроматографических методов определены основные группы биологически активных
веществ: флавоноиды, дубильные вещества, сапонины, аминокислоты, катехины.
3.Определена сумма флавоноидов в пересчете на рутин с помощью спектрофотометрического метода. В ноотропном сборе
сумма флавоноидов в пересчете на рутин составила 2,19±0,0872%. в листьях бадана -1,81±0,0758%, в корнях солодки 1,96±0,0895%. Содержание сухого остатка составило 0,350±0,0141%, 0,41±0,0100%, 0,34±0,0087%, соответственно.
4. В результате эксперимента определена антиоксидантная активность спиртового извлечения листьев бадана толстолистного,
корней солодки и ноотропного сбора. По результатам эксперимента было получено значение IС50 для ноотропного сбора,
листьев бадана толстолистного, корней солодки и сделан пересчет на сухой остаток и на флавоноиды. Для извлечения листьев
бадана IС50 достигалась при разведении 1: 69,7, при этом IC 50 в пересчете на сухой остаток составило 0,0588±0,0014 мг/мл,
в пересчете на флавоноиды 0,2596±0,0108 мг/мл . Для извлечения корней солодки IС50 достигалась при разведении 1: 10,95 ,
при этом IC 50 в пересчете на сухой остаток составило 0,3105±0,0079 мг/мл в пересчете на флавоноиды. 1,7898 ±0,0817 мг/мл.
Для извлечения ноотропного сбора IС50 достигалась при разведении 1: 101,4, при этом IC 50 в пересчете на сухой остаток
составило 0,0345 ±0,0013 мг/мл, в пересчете на флавоноиды. 0,2159±0,0086 мг/мл.

19.

Спасибо за внимание!