Методы измерения PUR

1. Методы измерения

2. План презентации

01
Принципы детекции
03-2
Rate Method
02
Методы измерения
03-3
VLin Integral Method
03
Алгоритмы измерения
03-1
Percentage Detection Method

3. Принципы детекции

01
Принципы детекции

4. Мультиволновая светодиодная технология

Фотодиод
Галогеновая
лампа
Источники света:
• 340 нм
• 405 нм
• 575 нм
• 660 нм
• 800 нм
Оптическое
волокно
■
Свет от галогеновой лампы
рассеивается на длинах волн: 405, 575,
660, 800 нм с помощью 4 видов
фильтров.
■
Оптическое волокно переносит
спектроскопический свет к детектору,
через кювету с реакционной смесью.
■
Каждые 0,1 секунды фотодиод
улавливает проходящий свет и
преобразует его в электронные
сигналы.
■
Микропроцессор преобразует эти
сигналы в dOD/мин (дельта оптической
плотности/мин) и время свертывания
крови (в зависимости от метода
измерения).

5. Принцип измерения (подробное описание)

02
Методы измерения

6. Методы измерения

Клоттинговый метод
■ Основан на определении времени
■
■
■
образования сгустка.
Измеряется изменение светопоглощения.
Мутность изменяется, когда фибриноген
превращается в фибрин под действием
тромбина.
Определяется активность отдельных
звеньев системы свертывания и
фибринолиза.

7. Клоттинговый метод

Хромогенный метод
■ Целью этих анализов является измерение
■
■
■
концентрации определенной молекулы в
плазме крови пациента.
Реагенты содержат:
Активатор: активирует определенный
фермент
Субстрат: является мишенью
активированного фермента. После
активации он изменяет цвет.
Фермент образует комплекс с искомым
веществом, после чего происходит
изменение интенсивности окраски, которая
прямо пропорциональна концентрации
искомого аналита.
Измеряется поглощение света.
28.03.2019 • 8

8. Хромогенный метод

Иммунотурбидиметрический метод
■ Плазма содержит антигены в неизвестной
■
■
■
концентрации.
Реагент содержит латекс, покрытый
антителом.
Комплексы [АГ-АТ] образуются в кювете и
визуализируются латексом. Плазма
становится более мутной с увеличением
образования комплексов [АГ-АТ].
Измеряется поглощение света.
28.03.2019 • 9

9. Иммунотурбидиметрический метод

03
Алгоритмы измерения

10. Алгоритмы измерения

Алгоритм
Percentage detection method
Описание
Алгоритм используется для оценки клоттинговых
тестов. Измеряется время свертывания
Rate method
Алгоритм используется для оценки хромогенных и
иммунотурбидиметрических тестов. Рассчитывается
разница в светопоглощении
Vlin integral method
Алгоритм используется для оценки
иммунотурбидиметрических тестов. Рассчитывается
разница в абсорбции.

11. Алгоритмы измерения

Percentage detection method
Инициирование образования сгустка
■ Регистрируемое пропускание света находится на
самом высоком уровне, поскольку бедная
тромбоцитами плазма и диспергированные
частицы фибрина пропускают свет. Стартовые
реагенты добавляются для того, чтобы начать
реакцию.
Образование сгустка
■ Регистрируемое светопропускание находится на
самом низком уровне, так как фибриноген
блокирует световой поток.

12. Percentage detection method

Анализ
■
■
■
■
Отслеживание различий в
интенсивности света останавливается,
как только будет идентифицирована
конечная точка реакции или после
отсутствия изменений в интенсивности
света.
В конце измерения фиксируется
начальная точка реакции (= базовая
линия, bH, 0%) и конечная точка
реакции (= 100%).
Определение точки считывания для
свертывания и времени свертывания
крови по оси абсцисс.
Выдача результата в [с], или в других
единицах, например, в %.
стартовая точка
реакции
50% время свертывания
конечная точка реакции
Время (секунды)

13. Percentage detection method

Rate method
Инициирование хромогенной реакции
■ По истечении времени инкубации образца плазмы с
низким содержанием тромбоцитов и промежуточных
реагентов, добавляют субстратный реагент. Субстрат
расщепляется его ферментом (параметр измерения или
продукт измеряемого параметра).
Хромогенная реакция
■ Когда субстрат расщепляется, раствор образца-реагента
меняет цвет на желтый пропорционально объему
расщепленного субстрата. Свет, попадающий в кювету,
поглощается или рассеивается. Меньшее количество
света достигает детектора и соответствует количеству
расщепленного субстрата.

14. Percentage detection method

Rate method
■
■
■
Каждая комбинация тест-реагент имеет
свой определенный диапазон измерения,
в котором реакция является линейной.
Эта область ограничена начальной и
конечной точками. Анализатор
вычисляет разницу в интенсивности
света (оптической плотности) в
определенном временном отрезке.
Разница (в dOD) переносится на
калибровочную кривую и конвертируется
в выдаваемые единицы измерения,
такие как %.
Данный метод используется для оценки
хромогенных и иммунологических тестов.
Светопропускание (%)
Анализ
Линейный
участок
конечная
точка
реакции
стартовая
точка
реакции
Время (секунды)

15. Percentage detection method

Vlin integral method
Добавление латексных частиц, покрытых антителами
■ Латексные частицы, покрытые антителами добавляют после
инкубации образца плазмы бедной тромбоцитами с
промежуточными реагентами. Множество мелких частиц
практически полностью блокирует проходящий свет.
Формирование комплексов AГ-AТ
■ Антитела (AТ) из образца взаимодействуют с латексными
частицами, покрытыми антигенами (AГ) и образуют
комплексы AГ-AТ (AГ в избытке). Свет проходит между
комплексами AГ-AТ и попадает на датчик.

16. Rate method

Vlin integral method
Анализ
Регистрация изменений в
интенсивности света на протяжении
всего заданного времени измерения
(=диапазон измерения).
■
Линейный диапазон кривой (зависит
от образца и реагента) определяется
с помощью касательной линии.
■
Определение начальной и конечной
точки линейного диапазона.
■
Вычисление разницы в оптической
плотности (dOD) измерения.
Светопропускание (%)
■
Измеряемый
диапазон
Линейны
й участок
конечная
точка
реакции
стартова
я точка
реакции
Время (секунды)

17. Rate method

Спасибо за внимание!