Иммунный статус человека, методы оценки

1. Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии ОмГМУ Темникова Наталья Владимировна к.м.н., доцент ЛЕКЦИЯ 2017г.

Иммунный статус человека, методы оценки
Основные вопросы
1.Иммунный статус и его нарушения.
2.Иммунопатологические синдромы.
3.Иммунологические тесты 1 и 2 уровней.
4.Правила оценки иммунограмм.
5.Методы оценки лимфоцитов.
1

2. Иммунный статус

Иммунный статус — это количественная и
качественная характеристика состояния
функциональной активности органов
иммунной системы и некоторых
неспецифических механизмов
противомикробной защиты.
2

3. Причины нарушений в иммунной системе

• неправильное распознавание чужих и
своих антигенов, что ведет к развитию
аутоиммунных процессов;
• гиперергический или извращенный
иммунный ответ, что ведет к развитию
аллергических заболеваний;
• неспособность развивать нормальный
иммунный ответ, что ведет к развитию
иммунодефицитов
• Гиперплазия клеток - опухоли
3

4. Алгоритм диагностики

Анамнез
Заключительный
диагноз
Молекулярногенетическое
обследование
осмотр
Лабораторный
диагноз
4

5. Сбор анамнеза

При опросе определяют вероятный
иммунопатологический синдром, основными являются:
- инфекционный синдром;
- аллергический и аутоиммунный синдромы;
- первичный иммунодефицит;
- вторичный иммунодефицит;
- иммунопролиферативный синдром.
-Проводят учет возможных индивидуальных особенностей
(возраст, сопутствующие заболевания) и колебаний
показателей (физиологических и патологических- прием
пищи, физические нагрузки, время суток, действие
стрессоров и т.д.);
- учет региональных норм;
5

6. Инфекционный синдром:

• Длительная лихорадка неясного генеза
• ЧБ дети и взрослые 4 раза в год
• Хронические инфекции ЛОР органов
• Бактериальные и грибковые инф кожи,
слизистых и ногтей (рецидивирующие)
• Рецидивирующий герпес
• Сепсис
• Заболевания парадонта (в тч афтозные)
• Хронические урогенитальные инфекции
6

7.

Общие правила при оценке иммунограмм :
- комплексный анализ, а не оценка одного
показателя;
- анализ в комплексе с клиническими и
анамнестическими данными;
- оценка резких сдвигов показателей (не
менее 20% от нормы);
- анализ в динамике;
- анализ не только (и не столько)
абсолютных данных, а соотношений
показателей (особо- индекс Th/Ts);
7

8. МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ИС

• Методы, применяемые для оценки
функционирования этих систем, условно
разделены Петровым Р. В. с соавт. (1984) на
тесты 1-го и 2-го уровней.
• По данным этих авторов, тесты 1-го уровня
являются ориентировочными и направлены на
выявление грубых дефектов в иммунной
системе; тесты 2-го уровня являются
функциональными и направлены на
идентификацию конкретной “поломки” в
иммунной системе.
8

9.

• Тесты 1-го уровня методы, направленны на
идентификацию «поломки».
• Тесты 2-го уровня являются
дополнительными. Они существенно
обогащают информацию о
функционировании соответствующей
системы иммунитета.
9

10. Ключевые этапы иммунного ответа

С этой целью оценивают показатели,
характеризующие различные стадии
развития иммунного ответа, включая
распознавание, активацию,
пролиферацию, дифференцировку,
эффекторные механизмы, формирование
иммунной памяти, регуляцию и апоптоз.
10

11. Тесты первого уровня

К относят:
- определение кол-ва лимфоцитов в крови
(абс., отн.);
- определение кол-ва Т- и В- лимфоцитов;
- определение уровня Ig классов IgG, IgM,
IgA;
- определение фагоцитарной активности
лейкоцитов;
- определение титра комплемента.
С учетом анализа результатов определяют
дальнейшую тактику исследования.
11

12.

12

13. Тесты второго уровня

Это более глубокий анализ состояния иммунной системы
тесты для определения относительного и абсолютного количества
популяций и субпопуляций Т-, В-, NK-лимфоцитов;
активационные маркеры лимфоцитов;
функциональная активность различных субпопуляций лимфоцитов;
оценка активности Т- и В-лимфоцитов;
оценка различных этапов фагоцитоза и рецепторного аппарата
фагоцитарных клеток;
определение основных классов и подклассов иммуноглобулинов;
циркулирующие иммунные комплексы;
определение концентрации компонентов комплемента в сыворотке
крови (С3, С4, С5…..);
исследование интерферонового статуса;
кожные пробы и т.д.
13

14. Оценка системы фагоцитоза

14

15. Оценка системы фагоцитоза

Процесс фагоцитоза состоит из нескольких этапов: хемотаксиса, адгезии,
поглощения, дегрануляции, киллинга и разрушения объекта. Главным
итогом работы нейтрофила и моноцита является киллинг , т. е.
завершенный фагоцитоз.
Для оценки киллинга исследуют определение образования активных форм
кислорода в процессе фагоцитоза.
Метод исследования:
Хемолюминесценция
НСТ тест
Индекс Завершенности Ф,Ф Число и Ф Активность
Если нет возможности определять активные формы кислорода с помощью
хемолюминесценции, об образовании супероксидного радикала можно
судить по восстановлению нитросинего тетрозолия (НСТ-тест).
Но в данном случае следует помнить, что киллинг микробов в фагоците
осуществляется с помощью как кислородозависимых, так и
кислородонезависимых механизмов, т. е. определение активных форм
кислорода не дает полной информации об этом процессе.
15

16. Оценка системы фагоцитоза

К тестам 1-го уровня для оценки фагоцитоза относится
определение:
абсолютного числа нейтрофилов и моноцитов;
интенсивности поглощения микробов нейтрофилами и
моноцитами;
способности фагоцитов убивать микробы.
К тестам 2-го уровня оценки фагоцитоза можно отнести
определение:
интенсивности хемотаксиса фагоцитов;
экспрессии молекул адгезии (CD11a, CD11b, CD11c, CD18) на
поверхностной мембраны нейтрофила.
16

17. Оценка системы фагоцитоза

Норма НСТ-теста – 10–30 %. Фагоцитарная
активность лейкоцитов повышается при
острых бактериальных инфекциях,
снижается при врожденных
иммунодефицитах, хронических инфекциях.
Активность работы фагоцитов, оценивается
так называемым фагоцитарным числом (в
норме клетка поглощает 5-10 микробных
частиц), количеством активных фагоцитовФагоцитарная активность , индексом
завершенности фагоцитоза .
17

18. B-система иммунитета

К тестам 1-го уровня
оценки B-системы
иммунитета
• Определение иммуноглобулинов G, A, M
в сыворотке крови; иммуноглобулина E
в сыворотке крови;
определение процента и абсолютного
количества B-лимфоцитов (CD19, СD20) в
периферической крови.
К тестам 2-го уровня
оценки B-системы
иммунитета
•Определение субклассов
иммуноглобулинов, особенно IgG;
секреторного IgA;
•Способности лимфоцитов давать
пролиферативный ответ на митогены
• B-(стафилококк, липополисахарид
энтеробактерий) и T-B-(митоген
лаконоса.
•Определение специфических антител к
Микроорганизмам
18

19. B клеточная- система иммунитета

B клеточнаясистема иммунитета
19

20. B-система иммунитета (по данным Р. М. Хаитов)

B-система иммунитета
(по данным Р. М. Хаитов)
Есть данные, свидетельствующие о том, что развитие хронических
синуситов и отитов часто зависит от дефицита у больных IgG3антител к Moraxella catarrhalis.
Другим наглядным примером важности определения специфических
антител могут служить данные, доказывающие, что у лиц,
страдающих частыми инфекционными процессами дыхательных путей,
при нормальном уровне всех классов иммуноглобулинов существенно
понижен титр антител к Haemophiluls influlenzae.
Продукция низкоаффинных антител может вести к развитию
иммунодефицитного состояния.
У лиц, часто и длительно страдающих заболеваниями дыхательного
тракта, при нормальном уровне иммуноглобулинов, несколько
повышенном уровне антител к пептидогликану St.aureus,
Str.pneulmoniae, Br.catarrhalis, аффинность антител к этим микробам
существенно снижена.
Низкоаффинные антитела малоэффективны в элиминации возбудителя из
организма, и это может быть одной из причин хронизации инфекционного
20
процесса.

21. В-лимфоциты

Норма: относительное содержание – 10–
30 %, абсолютное – 0,1–0,9 в 109/л.
Повышенное содержание бывает при
инфекциях, аутоиммунных заболеваниях,
аллергиях, лимфолейкозах.
Снижение количества В-лимфоцитов
обнаруживается при иммунодефицитах,
опухолях.
21

22. Иммуноглобулины

• Иммуноглобулин А. Норма: 0,6–4,5 г/л.
• JgА повышается при острых инфекциях, аутоиммунных
заболеваниях (чаще в легких или в кишечнике).
• Снижение JgА бывает при хронических заболеваниях
(особенно дыхательной системы и желудочно-кишечного
тракта), гнойных процессах, туберкулезе, опухоли,
иммунодефицитах.
• Иммуноглобулин Е. Норма: 0-0,38 мг/л. Повышается
количество JgЕ при наследственно обусловленных
аллергических реакциях, глистной инвазии.
• Иммуноглобулин М. Норма: 0,6–3,4 г/л.
• Иммуноглобулин G. Норма: 6,0-17,6 г/л.
22

23. Иммуноглобулины

• Метод исследования
• Иммуноферментный анализ (ИФА). Часто используется
• Испол. редко (устарел). Определение иммуноглобулинов в реакции
радиальной иммунодиффузии по Манчини.
• Единицы измерения
• г/л
Принцип исследования по Манчини : Метод основан на феномене
преципитации, когда взаимодействие антигенов с антителами в
геле сопровождается образованием видимого осадка –
преципитата.
При постановке реакции используются моноспецифические сыворотки
против Ig G, М и А человека. Контрольная сыворотка представляет
собой смесь сывороток крови с известным содержанием
иммуноглобулинов.
Размер образующегося кольца преципитации вокруг лунки прямо
23
пропорционален концентрации исследуемого Ig, содержание

24. Определение аутоАТ

• Метод исследования -Иммуноферментный
анализ (ИФА).
• Цель исследования: дополнительный
диагностический тест при заболеваниях с
иммунным патогенезом.
• Например: выявление АТ к ДНК
диагностический критерий СКВ, РА,…
• Тиреодидные АТ- аутоимунн. тиреоидит, АТ
к инсулину – диабет 1 типа….
24

25. Т-клеточная система иммунитета

25

26. Т-лимфоциты

Норма: относительное содержание 50–90 %,
абсолютное – 0,8–2,5 109/л.
Количество Т-лимфоцитов повышается при
аллергических заболеваниях, в период
выздоровления, при туберкулезе.
Снижение содержания Т-лимфоцитов
происходит при хронических инфекциях,
иммунодефицитах, опухолях, стрессах,
травмах, ожогах, некоторых формах
аллергии, инфаркте.
26

27. Оценка T-системы иммунитета

• При оценке В- системы …. Мы пользовались схемой: клетка и ее
продукт (ИГ).
• Но в отношении T-системы иммунитета, главный конечный
продукт Т-лимфоцитов являются цитокины, а системы для их
определения пока еще мало доступны практическим лабораториям
клинической иммунологии.
• Тем не менее оценка функциональной активности T-системы
иммунитета представляет задачу исключительной важности,
так как она может быть понижена, иногда даже существенно, при
нормальном количестве T-клеток и их субпопуляций.
• Простейший метод - реакция бласттрансформации с применением Tмитогена: фитогемагглютинина. Ответ T-лимфоцитов на митогены
понижен практически при всех хронических инфекционновоспалительных процессах, злокачественных заболеваниях, особенно
кроветворной системы; при всех видах иммунодепрессивной терапии,
при СПИД и при всех первичных T-клеточных иммунодефицитах.
27

28. Оценка T-системы иммунитета

К тестам 1-го
уровня
оценки Tсистемы
иммунитета
• Определение общего числа лимфоцитов;
• процента и абсолютного числа зрелых Tлимфоцитов (CD3) и двух основных их
субпопуляций: хелперов (CD4) и
киллеров/супрессоров (CD8);
• пролиферативного ответа на основные
T- митогены (фитогемагглютинин)
К тестам 2-го
уровня для
оценки Tсистемы
иммунитета
• продукция цитокинов (интерлейкина-2, ИЛ-4,
ИЛ-5, ИЛ-6, гамма-интерферона, фактора
некроза опухоли (ФНО) и др.);
• активационных молекул на поверхностной
мембране T-лимфоцитов (CD25, HLA-DR);
• молекул адгезии (CD11, CD18);
• пролиферативного ответа на специфические
антигены, чаще всего на дифтерийный и
28
столбнячный анатоксины;

29. Т-система иммунитета (по данным Р. М. Хаитов)

Важным является и определение таких провоспалительных цитокинов, как
ФНО, ИЛ-1 и гамма-интерферон. Их повышенное образование является
главной причиной септического шока. При сепсисе уровень ФНО в крови
может достигать 1 нг/мл. Накапливаются данные о роли
провоспалительных цитокинов в этиопатогенезе неспецифического
язвенного колита, рассеянного склероза, ревматоидного артрита,
инсулинзависимого диабета и др.
Важно изучение экспрессии активационных молекул и молекул адгезии на
поверхности T-лимфоцитов.
Нарушения экспрессии рецептора для ИЛ-2 наблюдаются при многих
злокачественных заболеваниях крови — T-клеточной лейкемии,
волосатоклеточной лейкемии, лимфогрануломатозе и др. — и
аутоиммунных процессах: ревматоидном артрите, системной красной
волчанке, апластической анемии, склеродермии, болезни Крона, саркоидозе,
инсулинзависимом диабете и др.
29

30. Методы исследования лимфоцитов

1. методы
розеткообразования;
метод проточной
цитометрии;
иммуноферментном
анализе (ИФА)
30

31. Метод не современный!!! Но дешевый и точный! 1. Методы розеткообразования; Для определения количества Т- клеток используют

метод
розеткообразования с эритроцитами барана (Е- РОК)
Метод основан на родстве
рецептора CD2 с белками
мембраны эритроцитов
барана.
При смешивании
лимфоцитов с
эритроцитами барана
образуются фигуры в виде
розеток.
Количество
розеткообразующих клеток
(Е- РОК) соответствует
количеству Т- лимфоцитов
(CD2+ клеток).
31

32. 2.Современный метод - проточная цитометрия:

Меченная флюоресцентными МКА
исследуемая клетка проходит с
потоком жидкости по капилляру.
Поток пересекается лучом лазера.
Прибор фиксирует отраженный от
поверхности клетки сигнал по
принципу «да/нет».
По изменению проходящей
лазерной волны определяются
параметры и размеры клетки.
Лазерный луч индуцирует
флюоресценцию МКА на
поверхности клеток, что дает
информацию о наличии
определенных рецепторов.
В результате суммирования
информации по всей популяции
клеток прибор выдает точный
количественный и качественный
анализ состояния клеточных
популяций.
32

33.

• Стандартная панель МКА позволяет
определять следующие СД-маркеры:
СД3 (Т-клетки),
• СД4 (Т-хелперы),
• СД8 (Т-цитотоксические),
• СД20 (В-клетки),
• СД16 (NK-клетки), СД14
(моноциты/макрофаги),
• СД25 (рецептор ИЛ-2).
33

34.

Важнейшее значение имеет
вычисление иммунорегуляторного
индекса CD4/CD8 (хелперносупрессорного отношения).
CD8+ несут Т- супрессоры и Ткиллеры, часть NK- клеток.
CD4+ несут Т- хелперы и Тиндукторы, моноциты, Т- клетки ГЗТ.
34

35. Соотношение CD4/ CD8 (ИРИ)

• В норме иммунорегуляторный индекс (соотношение CD4/ CD8) = 12.0
Увеличение соотношения CD4/ CD8 может происходить за счет:
• 1) увеличения Т-хелперов (при нормальном количестве Т-киллеров),
• 2) снижения CD8 лимфоцитов;
• В первом случае это может быть следствием полярного иммунного
ответа на аутоантиген.
• Во втором случае - отражать миграцию Т-киллеров в патологический
очаг при инфекционной патологии, аутоиммунных и аллергических
заболеваниях.
Снижение соотношения CD4/ CD8 может происходить за счет:
• 1) увеличения Т-киллеров (при нормальном количестве Т-хелперов)
• 2) снижения CD4 лимфоцитов
В первом случае это может быть следствием поляризованного Thl ответа при вирусной
инфекции в тот период, когда нарастает число антигенспецифических цитотоксических
Т-клеток.
Снижение CD4 лимфоцитов может происходить по многим причинам, в частности, за
счет усиленного апоптоза Т-хелперов. Эти эффекты наблюдаются при ВИЧ-инфекции.
Существует представление, что прогрессивное снижение коэффициента CD4/ CD8
35
коррелирует с прогрессией ВИЧ-инфекции, достигая в терминальной стадии 0,1.

36. 3.Имуноферментный анализ разобрать самостоятельно!

36

37. Циркулирующие иммунные комплексы

37

38. Циркулирующие иммунные комплексы

• Метод исследования – ИФА
• Единицы измерения =-У. е. (условная единица).
• Цель исследования оценка ативности аутоимунных
заболеваний(СКВ;РА), прогноз течения опухолевых процессов.
• Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) образовываются при
взаимодействии растворимого антигена и антитела в крови.
• В норме они выводятся системой мононуклеарных фагоцитов.
Крупные иммунные комплексы разрушаются в селезенке и печени.
При чрезмерном количестве антигена, избыточном формировании
иммунных комплексов и их неэффективной элиминации может
возникнуть болезни иммунных комплексов. При этом мелкие
иммунные комплексы могут накапливаться в различных органах и
тканях, вызывать воспалительный процесс и повреждение
биологических структур.
38

39.

• Следует особо подчеркнуть, что полноценный анализ
иммунограммы возможен только в комплексе с
клиническим состоянием и анамнезом пациента.
• Отсутствие характерных сдвигов в иммунограмме при
выраженных клинических симптомах следует считать
атипичной реакцией иммунной системы, что является
отягощающим признаком заболевания.
• Полученные данные пациента сравниваются со
средними значениями для данного аналита,
полученными в регионе проживания пациента.
Среднестатистические показатели различаются в
зависимости от региона и подчиняются
климатогеографическим условиям, экологической
обстановке, условиям жизни.
• Необходимо также учитывать возраст.
39

40.

40

41.

Спасибо за внимание
41

42. Лейкоциты

Норма – 3,5–8,8 4 109/л. Повышение числа лейкоцитов –
это лейкоцитоз, снижение – лейкопения. Лейкоцитоз
делится на физиологический и патологический.
физиологического лейкоцитоза могут быть прием пищи,
физическая работа, прием горячих и холодных ванн,
беременность, роды, предменструальный период.
Патологический лейкоцитоз бывает при инфекционных
заболеваниях (пневмонии, менингите, общем сепсисе и
др.), инфекционных заболеваниях с поражением клеток
иммунной системы. Но имеются и исключения. Например,
некоторые инфекционные заболевания протекают с
лейкопенией (брюшной тиф, бруцеллез, малярия,
краснуха, корь, грипп, вирусный гепатит в острой фазе).
42

43. Т-хелперы

Норма: относительное содержание – 30–
50 %, абсолютное – 0,6–1,6 109/л.
Содержание Т-хелперов повышается при
инфекциях, аллергических заболеваниях,
аутоиммунных заболеваниях
(ревматоидном артрите и др.). Снижение
содержания Т-хелперов происходит при
иммунодефицитных состояниях, СПИДе,
цито-мегаловирусной инфекции.
43

44. Лимфоциты

Норма: абсолютное содержание – 1,2–3,0 109/л, но
чаще в клиническом анализе крови указывается
процентное содержание лимфоцитов.
Этот показатель составляет 19–37 %.
Лимфоцитоз обнаруживается при хроническом
лимфолейкозе, хронической лучевой болезни,
вирусных инфекциях, бронхиальной астме,
тиреотоксикозе, некоторых инфекционных
заболеваниях (коклюше, туберкулезе), при удалении
селезенки.
К лимфопении приводят аномалии развития
лимфоидной системы, ионизирующее излучение,
аутоиммунные заболевания,СПИД.
44