Т-лимфоциты - регуляторные

1.

Лекция
Степановой Е.Н.

2.

У взрослого человека имеется приблизительно
12
2х10 лимфоцитов, ~ поровну Т- и В- клеток;
• В крови содержится лишь 2-3% общего
количества лимфоцитов;
• Продолжительность жизни лимфоцитов: 20%
клеток - 2-3 дня,
80% клеток долгожители ( от нескольких месяцев до
нескольких лет
• Среди общего пула лимфоцитов удается
7-8
различать 10 клонов клеток, причем клетки
каждого клона могут отвечать лишь на какойнибудь один антиген
• C возрастом клональное разнообразие падает

3.

4.

5.

Как происходит развитие Т-клеток из тимоцитов в Тимусе.
1.Тимус закладывается в раннем эмбр.периоде, на 4 нед.внутриутробного развития и состоит из 2х долей. Тимус-эпителиальный орган Структурно-функц.ед.тимуса явл.тимическая долька.
Которая состоит из субкапс.,кортикальной и медуллярной зоны. В субкапс.зоне-незрелые
тимоциты,а в медуллярной уже зрелые Т-лимфоциты с антиген распознающим рецептором. В
кортикальной зоне происходят процессы позитивной и негативной селекции-это формирование
антигенраспозн.рецепторов(АРР),образование различных клонов лимфоцитов.
Этот рецептор состоит из 2 цепей- альфа и бетта.В кортикальной зоне тимуса происходит
реаранжировка вариабельных генов АРР,отвечающих за антиген спец.разнообразие АРР, которая
происходит при участии ферментов RAG1\RAG2(вырезаются «ненужные гены).Поэтому при
мутациях в них формируется Т-клеточный иммунодефицит(тяжелый комбинированный
иммунодефицит). Процесс оценки сформировавшейся бета цепи АРР происходит на собственной
строме тимуса и называется позитивной селекцией,в ходе которой выживают только тимоциты со
сформир.АРР:-это тимоциты, которые провзаимодействовали с МНС 1 и 2 класса
гистосовместимости на эпит.клетках стромы тимуса. Те,которые на сформировали подходящий
рецептор погибают апоптозом. После позитивной селекции тимоциты перемещаются в
медуллярную зону тимуса,где претерпевают негативную селекцию на
аутоантигеннах(аутоантигены организма-инсулин,др.пептидные гормоны,
др.аутоантигены),экспрессируемых на медуллярных эпителиальных клетках стромы тимуса.Эта
экспрессия происходит благодаря активации гена AIRE(аутоиммунный регулятор). Поэтому, если в
нем происходят мутации ,при которых нет экспрессии на строме каких-то аутоантигенов-у
человека наблюдается тяжелый первичный иммунодефицит,связанный с сочетанной
аутоиммунной патологией.

6.

Например синдром APECED(аутоиммунная полиэндокринопатия,кандидоз,эктодермальная
дисплазия).
Фенотипические маркеры Т-клеток тимуса.В субкапс.зоне-дубль отриц.CD4-CD8-CD3—нет
антигенрасп.рецептораАРР(не зрелые). В кортик.зоне-дубль положит.CD4+CD8+CD3---не зрелые,но
АРР формируется, и наконец в медуллярной зоне тимуса-зрелые имеюттАРР CD3+CD4+ -Тх и
CD3+CD8+Т-цитотокс. Они поступают в кровоток и расселяются по вторичным органам иммунной
системы.Их мы и оцениваем в иммунограмме.
Функции молекул CD3+,CD4+,CD8+. Молекулы CD3+-маркеры всех зрелых Т-лимфоцитов,т.к.после
распознавания АГ(антигена),информация в ядро Т-лц.передается через CD3 молекулы.Эта
информ.нужна для того,чтобу Т-лц.начал отвечать на АГ распознавание пролиф.клона(все это
происходит уже в ЛУ-это запуск имм.ответа), и дальнейшей его дифференцировкой,надо чтобы
клеток данного клона стало много. CD4 молекулы также входят в состав АРР. Т.к. при распознавании
АГ,представл.дендритной клеткой (ДК)в комплексе с собств.молекулами HLA2класса(белки
иммунного ответа)- АРР взаимодействует с чужер.АГ, а мол.CD4 с HLA2класса(экспрессир.только на
клетках иммунного ответа,презентирующих АГ-макроф.,ДК,В-лц). Если на ДК не экспресс. мол.
HLA2класса-антиген не сможет запустить активацию данного клона Т-лц. Это необходимое условие
для активации Тхелперов,запускающих иммунный ответ в Л.У. Соматические клетки организма на
своей поверхности несут только HLA1-класса(трансплантац.антигены). При аутоимм.заболеваниях
на них могут появляться доп. и HLA2класса-это признак иммунопатологии,т.е.они могут
представлять аутоантигены Т-лимфоцитов-это аутоиммунные процессы!!
Иммуногистох.определения для верификации диагноза-аутоиммунное заболевание.

7.

Т-цитотоксич.CD3+CD8+. CD8+ также входят в состав антигенраспозн.комплекса. Но это клеткиэффекторные-на периферии должны уничтожить «измененное свое». Там на измененной клетке
АРР взаимод. С мол.чужого,которая находится в комплексе со своим -HLA1 класса. В случае
отсутствия этих меток своего –измененная клетка не будет убита и клон Т-цитотоксических лц. Будет
анергичен. М.б. при опухолевом росте,злок.клетки сбрасывают все «свое». После распознавания
измененного своего Тцитотоксические лц.моментально активир.и убивают апоптозом клеткумишень.
В иммунограмме мы всегда оцениваем абсолютное содержание Т-лимфоцитов-CD3+абсолютное
содержание всех зрелых Т-лц.; CD3+CD4+-абс.содержание Т-хелперов; CD3+CD8+-абс.содержание Тцитотоксических. При снижении абс. содержания – как общих Т-лц,так и Т-хелп. И Т-цитотокс.-мы
говорим о тяжелом воспалительном процессе, а также о Т-клеточном иммунодефиците.
На фоне любого воспалит.заболевания могут незначительно снижаться только Т-хелперы,которые
возвращаются к норме после выздоровления. Поэтому иммунограмму лучше назначать по
выздоровлению. У окончательно выздоровевшего человека-все будет в норме, а при Тклет.иммунодефиците – показатели всегда снижены.

8.

Активация Т-хелперов в лимфатических узлах

9.

10.

Субпопуляции Тлимфоцитов,созревших в Тимусе
• Все зрелые Т-лимфоциты - CD3+,CD45Ra+:
• 1.CD3+\CD4-Т-хелперы
• 2.CD3+\CD4,CD25,FoxP3-Трегуляторные\супрессоры
• 3.CD3+\CD8-Т-цитотоксические
• 4.NCT(-НКТ)

11.

12.

Естественные nТ-reg- регуляторные клетки(FOXP3)
Образуются в тимусе.Основная ф-ция-сдерживание аутоиммунных
процессов на периферии.
Не проходят негативной селекции,т.е.могут взаимодействовать с аутоантигенами в очаге воспаления. При этом они
моментально активир.,выделяя супрессорные интерлейкины-Ил-10 и ТФР(трансформирующий фактор роста),
которые тормозят, как Т- и В-лимфоциты(адаптивный иммунитет), так и врожденный иммунитет.
Основная функция-предотвращение аутоиммунных процессов-т.е.супрессоры
Супрессорная активность связана с геном FoxP3(транскриптац.фактор-белок скуфрин)
Фенотип-CD3+\CD4+,CD25hi+,CTLA-4+ и др.
Основные интерлейкины продуцир.-Ил-10,TGFбетта(супрессорные)
Ростовые факторы-ИЛ-2,TGF-бетта
CD3+\CD4+CD25+h FoxP3+(естественныеТ-рег)-эмигрируют из тимуса в составе зрелых Т-лимфоцитов.
Составляют-5%тимоцитов
3-5%периф.Т-лимфоцитов
5-7%CD4+Т-лимфоцитов
CD3+\CD4+CD25+CD127-(CD3+\CD4+CD25+FOXP3+).
При мутациях в гене FOXP3-развивается первичный иммунодефицит-Х-сцепленный синдром
иммунодисрегуляции,полиэндокринопатии и энтеропатии(IPEX-синдром),сопровожд.нарушением обр. nТ-reg в
тимусе и появлению аутоагресс.лимфоцитов, привод.к указанным клиническим проявлениям. Основным
методом иммунодиагностики при этом,явл.определение в цитоплазме CD4+CD25+Т-лц. Транскриптационного
фактора FOXP3

13.

NKT-(Т-естественные киллеры НК)- CD3+\CD16+CD56
+
Образуются в тимусе(проходят позитивную и негативную селекцию)
Распознают антигены-гликолипиды в комплексе с MHC-CD1d
Фенотип-CD3+,CD4+,(CD4-),CD8+,CD69+,CD16+,CD56+ вырабатывают гаммаIFN+ИЛ-4
По функциям относятся к клеткам врожденного иммунитета-цитотоксическим, продуц.гамма IFN
CD3+\CD16+CD56+ являются регуляторными-сдерживают аутоагрессию
Выполняют свои функции в тканях:
рецепторы для хемокинов
CXCR6-синусоиды печени
CCR2(MCP-1,CCL2)-селезенка
CCR7-Т-зоны лимф.узлов
Ростовые факторы – Ил-15
В крови их очень мало-до 10%. Если в иммунограмме их относительное и абс.содержание
повышено, можем говорить о том, что у обследуемого тяжелый воспалительный процесс.

14.

CD3+TCR гамма\дельта Т-лимфоциты,также формируются В тимусе из CD4-CD8-предшественников,по
выходу из тимуса в основном находятся в слизистой кишечника.

15.

Содержание (в %) различных Тлифоцитов в слизистой кишечника
Зона
α/β
γ/δ
CD4
CD8
CD45 CD45Ro
Ra
Пейер.
бляшки
9598%
мало
35%
10%
~50% ~50%
Lam.
propr.
98%
2%
50-70% 24%
Эпителий 90%
10%
10-20
%
80-90
%
5%
80%

16.

Интра-эпителиальные лимфоциты (IEL) слизистой кишечника
Среди IEL доля γ/δ Т-клеток относительно высока (10-15%);в составе популяции γ/δ IEL часто
выявляются CD4-CD8- T-клетки и CD4-CD8+ Т-лимфоциты; цитотоксические, не требуют
презентации АГ. Могут убивать мишени через рецепторы для апоптоза, а также
перфорин\гранзимовым механизмом.
В тоже время-могут быть антиген представляющими клетками и презентировать антиген
альфа\бета Т-лимфоцитам
γ/δ IEL отличаются ограниченным репертуаром TCR-рецепторов; большинство TCR построены с
использованием Vδ1 варианта генного сегмента;
В клинической иммунограмме не определяем в крови по отдельности альфа\бета и гамма\дельтаТ-лимфоциты. Обычно – это CD3+суммарные,по преимуществу-альфа\бетаТ-лц.

17.

Зрелые Т-лимфоциты, только что покинувшие тимус и содержащие антиген распознающий рецептор
и необходимые ко-рецепторы, но никогда не контактировавшие с антигеном называются наивными Тлимфоцитами
Наивные Т-лимфоциты CD3+CD4+ и CD3+CD8+ обладают фенотипом зрелых Т-лимфоцитов, но в
цитоплазме несут кольцевую ДНК(TRECs), которая представляет собой «остатки ДНК»после
рекомбинации генов в ходе формирования антиген распозн.рецепторов. Определяются такие
клетки методом ПЦР-диагностики. У новорожденных их много, а у взрослых мало,т.к. у них много
клеток памяти, не имеющих TRECs.
По этой молекуле осуществляют скрининг на Т-клеточный иммунодефицит(ТКИН), когда такие
клетки отсутствуют.!!
У ВИЧ-инфицированных на фоне успешной ААРТ-CD3+CD4+ восстанавливаются и у них появляются
эти клетки с маркером TRECs, что свидетельствует о тимопоэзе и о том , что у них еще не развился
СПИД.

18.

Основная клеточная характеристика ТИМОПОЭЗА
• CD4
• CD45RA
• CD62L
+
TRECs

19.

Контактные межклеточные взаимодействия в ходе иммунного ответа
При запуске иммунного ответа в лимфатических узлах происходит межклеточная
кооперация, с образованием синапса между антиген представляющей дендритной
клеткой и антиген распознающим рецептором Т-лимфоцитов соответствующего
клона, при этом:
1.Антигенспецифическое распознавание через АРР (антиген распозн.рецептор)
должно сопровождаться Ко-стимуляторным взаимодействием.
2.Костимуляция-дополнительный вклад в генерацию внутриклеточного сигнала
CD28/CTLA4xCD80/CD86
3.При этом клетки «слипаются». Стабилизация межклеточных взаимодействий
Осуществляется Факторами адгезии-CD2(LFA-2);CD58(LFA-3) и др.
В начале, Тх получает стимуляцию цитокинового пути черезCD28xCD80 и продуцируют
ИЛ-2(гл.ростовой фактор Т-лимфоцитов) после чего начинается их пролиферация,
клеток клона должно стать много! При различных Т-клеточных иммунодефицитах
этот путь не работает,при антигенспец.Т-клет.стимуляции Ил-2-не вырабатывается,
что используется в иммунодиагностики этих заболеваний.
После пролиферации клона начинается его дифференцировка

20.

21.

22.

МАРКЕРЫ АКТИВАЦИИ Т-лимфоцитов
РАННИЕ МАРКЕРЫ-CD69,HLA-DR,DP,DQ(CD3+HLA-DR+)
CD25-рецептор для ИЛ-2, молекулы межклеточных взаимодействийCD154(CD40L)\CD152(CTLA-4),молекулы адгезии-CD54(ICAM1)
CD45RA-наивные Т-лимфоциты
ПОЗДНИЕ МАРКЕРЫ-CD45RO-Т-клетки памяти,маркер пролиферацииCD71,маркер апоптоза-CD95
При подозрении на иммунодефицитное состояние,надо определять
активационные маркеры,методом проточной цитометрии. Например,
CD154(CD40L)-молекулы необходимые для активации Т-хелперами Влимфоцитов(запуск гуморального ответа и переключения синтеза антител с
ИгМ на ИгG).При их отсутствии диагностируется гипер –ИгМсиндромпервичный иммунодефицит,характеризующийся рецидивирующими
гнойными инфекциями на фоне пониженного ИгG,при нормальном или
повышенном ИгМ.

23.

После клональной экспансии, активация Т-лимфоцитов подавляется через CTLA4xCDCD86.
При опухолевом росте иммунный ответ не развивается из-за доминирования CTLA4xCDCD86. При
аутоиммунных заболеваниях- напротив регуляция отсутствует и доминирует CD28xCD80.!!
Моноклональные антитела в терапии опухолей-блокируют в Л.У. взаимодействие
CTLA4xCDCD86.при этом актив.противоопух.иммунный ответ через CD28xCD80.!!
На периферии Т-цитотоксич. экспрессируют PD1 служащий в норме для остановки Т-цитотокс.,
после того , как они справились с мишенями. В условиях опух.роста микроокружение в
опухолевой ткани призвано сразу же тормозить функцию CD3+CD8+Т-лимфоцитов за счет
экспрессии PDL1,взаимодействующих с Т-цитотокс. и блокирующими их функцию.
На рис. Показано, как моноклональные лечебные антитела блокируют эти механизмы и
запускают противоопухолевый иммунитет.

24.

25.

26.

27.

28.

Т-хелперы1(Th1)

29.

Антагонистические отношения(взаиморегуляция)
между Th1 и Th2

30.

31.

CD3+CD4+Т-регуляторные клетки
Описано 2 типа Т-регуляторных клеток: 1.естественные Трегуляторные(nTreg)для собственных эпитопов, генерированные в тимусе
высокоавидной селекцией и 2.индуцированные Т-регуляторные(iTreg),
которые происходят из CD4+,FoxP3-Т-клеток после стимуляции на
периферии. nTreg(Естественные Т-регуляторные клетки) индуцируют
конверсию Т-клеток в индуцированные iTreg посредством цитокинзависимого и цитокин-независимого механизмов, как при развитии
инфекционной толерантности

32.

33.

Тхелперы1. ИНФ-гамма важный маркер противовирусного и
противоопухолевого иммунитета

34.

Когда можно заподозрить Т-клеточный иммунодефицит и как подойти к его
диагностике.
1.Инфекционный синдром(.Рецидивирующие инфекции.)
Бактериальные инфекции
Вирусные
Грибковые
Оппортунистические
2.Анализ крови.
Лейкопения, лимфопения
Необходимо провести следующее Иммунологическое обследование.
1.Субпопуляции лимфоцитов проточной цитометрией
2.ТРЕК(ПЦР)
2.+ИгМ,А,G(ИФА ,РИД и др.)
3.бурст-тест нейтрофилов или тест НСТ при подозрении на хроническую грануломатозную
болезнь(ХГБ)
4.Расширенный анализ при подозрении на ИДС:
Функциональной активности лимфоцитов
Использование Т-клеточных тестов для функциональной диагностики инфекционных
заболеваний

35.

36.

37.

38.

Значение функционального исследования Тклеточного иммунитета при ВИЧ-инфекции
.In vitro
Исследования Т-клеточной пролиферации методом РБТЛ на поликлональные Т-клеточные
митогены(ФГА), а также на специфические антигены(например-р24,env gp120 при ВИЧ-инф)
Исследования функции отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов по продукции внутриклеточных
интерлейкинов методами проточной цитометрии,
Оценка выработки Т-лимфоцитами Ил-2, гамма ИНФ после их стимуляции в культуре клеток in
vitro ФГА, или специфическими для возбудителя антигенами, методами ИФА ,ELISEPOT, ОТ-ПЦР
или ПЦР
ПРИМЕРЫ:
В случае выделения лимфоцитами – ИНФ-гамма и ИЛ-2
Выделение Ил-2 на ФГА и специфические возбудители свидетельствует об отсутствии Т-клеточного
иммунодефицита
Одновременное выделение ИНФ-гамма на ФГА и специфические возбудители ,свидетельствует
об активации Т-клеточного иммунитета(Тх1)-противовирусный или протвоопухолевый иммунный
ответ есть!!!, но при этом-воспаление!
Одновременное выделение Ил-4 на ФГА и специфические возбудители ,свидетельствует об
активации Т-клеточного иммунитета(Тх2)-противобактериальный ответ, а противовирусный
может быть заблокирован, воспаление 2 типа-эозинофильное.
В случае выделения –ИЛ-10 и ТФРбета-говорим об иммуносупрессии и отсутствии иммунной
защиты!!

39.

ВИЧ-инфекция
• 1.После антиретровирусной терапии: При исчезновении вируса
должны снижаться и исчезать показатели активации
иммунокомпетентных клеток.
• 1.Снижается Т-клеточная активация(снижается экспрессия
• Кi 67-маркер пролиферации в ядре), но не возвращается к норме!
• 2.Падает активация и пролиферация CD8+Т-лимфоцитов,но
показатели этих клеток остаются повышенными.
• Все это свидетельствует о присутствии в крови вирусных частиц

40.

Квантиферон и Т-спот ТБ-иммунологические тесты
для диагностики туберкулеза ин витро.
ДИАСКИНТЕСТ-ин виво.
У больного туберкулезом Эффекторные Т-клетки памяти CD3+CD4+ и
CD3+CD8+ после культивирования со специфическими антигенами
M.tuberculosis начинают выделять ИНТЕРФЕРОН гамма, который
определяется методом твердофазного ИФА.
ESAT6 и CFP10 Антигены специфичны для комплекса M/tubtrculosis и
отсутствуют в БЦЖ, а также в других не вирулентных для человека
микобактериях внешней среды.
Положительный результат на возбудитель,т.е.выделение ИНТЕРФЕРОНа
гамма является свидетельством наличия в организме обследуемого
активированных специфических к данному возбудителю Т-клеток
памяти(CD3+CD4+ и CD3+CD8+ ),что свидетельствует об инфицировании
обследуемого. У здорового-результаты будут отрицательными.

41.

Диагностика туберкулеза

42.

Иммунореконструктивный
синдром(заболевание) у ВИЧ-инфицированных
• Т-рег.клетки(Т-супрессоры) дифференцируются и активируются
только в присутствии Ил-2,маркера активации Т-клеточного
иммунитета. При Т-клеточном иммунодефиците Ил-2 не
вырабатывается и образование\активация Трег.нарушено, что
является причиной тяжелого хронического воспаления,что описано
при ВИЧ-инфекции
После начала АРТ-через недели или месяц после старта терапии
начинается интенсивный воспалительный ответ(ИРЗ или IRD):1.не
маскируемый-не было лечения против патогенов;2.парадоксальное ИРЗлечение проводилось.
ИРЗ ассоциировано с микобактериальными,вирусными,грибковыми и
паразитарными патогенами.При всех перечисленных заболеваниях защита
осуществляется Т-клеточным иммунитетом

43.

Иммунореконструктивные заболевания при ВИЧ-инфекции
1.Mycobacterium tuberculosis ИРЗ-(ТБ-ИРЗ)-развивается в первые 3 мес.ААРТ,и
может быть как не маскируемое.так и парадоксальное. Связано с
восстановлением Т-клеток памяти. У пациентов с ТБ-ИРЗ-положительные
кожные тесты и увеличенное количество специфических CD4+Тлимфоцитов.Т.е.Т-х1 не только важны в протекции и в образовании ТБгранулом, но также в ТБ-ИРЗ.
2.Тх1 могут также вовлекаться в нетуберкулезную микобактериальную
инфекцию(M.avium)
3.Вирусные иммунореконструктивные заболевания
Наблюдается-ЦМВ(CMV),Герпес симплекс(HSV),герпес вирус человека 8
типа(HHV-8),герпес зостер(VZV),вирусные гепатиты(HBV и HCV)-ИРЗ. В
патогенезе заболеваний активация специфических клонов CD4+и CD8+Тлимфоцитов
4.Криптококковые(грибы) ИРЗ.-Cryptococcus neoformans ассоциируется с
ИРЗ.Протекция осуществляется CD4+Т-лимфоцитами, которые
продуцируют ИНФ-гамма и активируют фагоцитоз макрофагами
C.neoformans. Кроме того CD4+осуществляют прямой цитотоксический
эффект на этих патогенов.

44.

Иммунореконструктивные заболевания
5.Pneumocystis pneumonia(PCP)-ИРЗ.
Эффекторные клетки,отвечающие за воспалительное повреждение при
PCP-1.CD8+,CD4+и альвеолярные макрофаги;2.CD4+Тхелперы 2(ИЛ-4,ИЛ5,ИЛ-6)- и альвеолярные макрофаги.
6.Описаны случаи ИРЗ, ассоциированные с паразитарными гельминтамиShistosoma mansoni. У пациентов на фоне ААРТ развивалась
эозинофилия, энтериты или колиты, воспалительный полипоз.
Иммунопатология шистомиазиса связана с грануломатозным иммунным
ответом вокруг яиц в слизистой кишечника. При ВИЧ-инфекции снижается
экскреция яиц гельминтов, что является следствием снижения
образования гранулем из CD4+Т-лимфоцитов.ААРТ может восстановить
образование гранулем, что приводит к развитию ИРЗ.
7.Другие паразитарные заболевания такие,как
лейшманиоз,стронгилоидоз,криптоспоридиоз и токсоплазмоз,могут быть
ассоциированы с ИРЗ.

45.

Предикторы ИРЗ
• Перед началом ААРТ:
• 1.СД4+-снижены менее 100кл.\мкл(снижена
выработка Ил-2!) + Высокая Аг нагрузка(не только
ВИЧ, но и др.оппортунистов); 2.Генетическая
предрасположенность к более высокому
воспалительному ответу.

46.

Вопросы по теме
1.Клинические проявления Т-клеточного иммунодефицита
2.Охарактеризуйте Тимус.Какие процессы в нем происходят. Сравните клетки,поступающие туда из
костного мозга и выходящие из него.
3.Когда происходит развитие тимуса и процессы дифференцировки в нем Т-лимфоцитов.
4.Основные субпопуляции Т-лимфоцитов покидающих тимус.
5.Что такое белок AIRE? Его основная функция
6.Какие отличия внутритимической дифференцировки естественных Т-регуляторных клеток(FOXP3+),
по сравнению с другими субпопуляциями. Их Главная функция в иммунной защите. Какой фенотип
этих клеток. При каких заболеваниях имеется недостаточность данных клеток., а при какихизбыточность
7.Как осуществляется межклеточная кооперация в ходе иммунного ответа.Что такое
иммунологический синапс.
8. Как действуют костимулирующие молекулы на поверхности Т-лимфоцитов и дендритных клеток
в норме и при патологии.
9.Перечислите основные субпопуляции CD3+CD4+Т-лимфоцитов хелперов,по каким интерлейкинам
они различаются.
10.Какие исследования необходимо выполнить для диагностики Т-клеточного иммунодефицита