Нормальная микрофлора

1.

Нормальная
микрофлора

2.

Нормальная микрофлора – это качественное и
количественное соотношение разнообразных
микробов отдельных органов и систем,
поддерживающих
биохимическое,
метаболическое
и
иммунное
равновесие
макроорганизма, необходимое для сохранения
здоровья человека.

3.

Микробиом человека состоит из бактерий,
простейших, грибов и вирусов. В настоящее время
идентифицировано
более
5000
видов
микроорганизмов, из них 90% не культивируются в
условиях
лаборатории.
Человек
и
его
микрофлора
–
единый
«суперорганизм»
с
организованной
работой
ферментов,
кодируемых
геномами
всех
симбиотических микроорганизмов.

4.

Нормальная микрофлора
Постоянная
(резидентная)
Представлена
стабильным
составом
микроорганизмов
Транзиторная
(временная)
Попадает из
окружающей среды, не
обитает постоянно на
поверхности тела
человека

5.

Состав микрофлоры контролируется
макроорганизмом при помощи факторов:
Механических (десквамация эпителия,
перистальтика кишечника, удаление секретами,
мочой)
Химических (соляная кислота, щелочной секрет
тонкого кишечника, желчные кислоты)
Иммунных (секреторные иммуноглобулины
класса А)

6.

Функции нормальной микрофлоры
Колонизационная резистентность
Регуляция газового состава, редокс-потенциала кишечника
Участие в водно-солевом обмене
Детоксикация
Продукция биологически активных соединений
Имуногенная
Поддержание морфологического и функционального состояния
желез, эпителиальных клеток
Влияние на структуру слизистой оболочки кишечника

7.

Методы исследования микробиоты
1.Культуральный метод
Описание
Преимущества
Недостатки
Используют различные Высокая
селективные среды для распространенность
выделения бактерий из Большой опыт работы
клинического
Возможность
материала
обнаружения
основных патогенных
микроорганизмов
Трудоемкость
Долговременность
Незначительная часть
культивируемых
бактерий

8.

Методы исследования микробиоты
2.Молекулярно-генетические методы
Метод
ПЦР
RT-Q-PCR
Описание
Недостатки
Репликация ДНК-полимеразой
нуклеотидной последовательности,
характерной для определенного вида
микроорганизмов
Высокая специфичность
Быстрота
Констатация только
присутствия / отсутствия
микробов
Флуоресцирующие
ДНК-зонды
соединяются с цепочкой НК, вызывая
свечение, интенсивность которого прямо
пропорциональна концентрации продукта
ПЦР
Высокая точность
Высокая скорость
Исключение
ложноположительных
результатов
-
Секвенирование
Определение последовательности
генов 16S
азотистых оснований в генах 16S рРНК
рибосомальной РНК (есть во всех геномах прокариот и мало
подвержена мутациям)
Полногеномное
секвенирование
Преимущества
Изучение «кусочков» всех ДНК от
некультивированной микрофлоры
Простота
Наличие компьютерных баз
данных
Неспособность оценить
функции изучаемых
микроорганизмов
Идентификация микроба
Определение его
биологических функций
Сложность анализа

9.

Методы исследования микробиоты
3.Масс-спектрометрия
Описание
Оценивает время
пролета частицы
вещества через
матрицу анализатора
и создает
«метаболический
отпечаток» по
которому происходит
идентификация
Преимущества
Высокая
чувствительность
Быстрота анализа
Недостатки
Идентификация
микробов
ограничивается теми
белками, которые
были определены у
ранее
секвенированных
микробов

10.

Кишечная микробиота - это более 50 родов и более 500
видов бактерий, количество которых в ЖКТ человека
превышает 1014. Микроорганизмов в человеческом теле
примерно столько же, сколько и клеток (3,9×1013 и
3,0×1013 соответственно). Численность микробиоты
постепенно увеличивается по ходу кишечника, составляя
в тонкой кишке 102–107 КОЕ/г и достигая максимального
значения в толстой кишке – до 1011 КОЕ/г.
Преобладающих в тонкой кишке аэробов по мере
движения вниз по ЖКТ сменяют факультативные, а затем
облигатные анаэробы. Это связано со снижением
парциального давления кислорода в дистальных отделах
ЖКТ.

11.

Микрофлора кишечника
Различают:
мукозную флору - взаимодействует
со слизистой оболочкой ЖКТ,
просветную флору - находиться в
просвете
желудочно-кишечного
тракта.
Субстратом
для
её
жизнедеятельности
являются
пищевые волокна, на которых она
фиксируется.

12.

13.

Индигенная микрофлора толстого кишечника
Бифидобактерии (Грам (+) анаэробные палочки)
норма -109-1011 КОЕ/г
Лактобактерии (Грам (+) аэротолерантные палочки)
норма -106–108 КОЕ/г
Энтерококки (фекальные стрептококки – Грам(+),
факультативно-анаэробные) норма -105–108КОЕ/г
Бактероиды (Грам(-) анаэробные палочки) норма 106–109КОЕ/г
Эшерихии
(Грам(-)
факультативно-анаэробные
палочки) норма -106–108КОЕ/г

14.

Бактероиды
Лактобактерии
Бифидобактерии

15.

Кишечная палочка
Энтерококки

16.

17.

Энтеротип Бактероиды (Bacteroides)
Основные бактероиды расщепляют преимущественно
сахара (сахарозу, мальтозу, лактозу), а также белки.
Этот энтеротип соответствует типичной западной диете
и является распространенным среди европейцев и
североамериканцев.
Бактероиды:
•Подавляют рост патогенной микрофлоры;
•Синтезируют витамины группы В;
•Частично ферментируют пищу.
Энтеротип ассоциируется с риском развития сахарного
диабета 2 типа.

18.

Энтеротип Превотелла (Prevotella)
Эти бактерии обитают в полости рта, кишечника и
желудка, в т.ч. у людей инфицированных Helicobacter
pylori.
Питаются преимущественно клетчаткой. Характерны
для людей, предпочитающих растительную пищу,
особенно вегетарианцев. Синтезируют витамины В1 и
В9.
Этот энтеротип более других склонен к заболеваниям
пищеварительной системы, из-за способности превотелл
повреждать слизистую оболочку кишечника, вызывая
колиты.

19.

Энтеротип руминококки (Ruminococcus)
Предпочитают
растительные
полисахариды:
крахмалы, целлюлозу, могут поглощать сахар.
Руминококки выделяют масляную кислоту,
защищающую ворсинки кишечника и снижают
риск таких заболеваний как колиты и рак
кишечника. Этот энтеротип связан с риском
развития ожирения.

20.

21.

Функции кишечной микробиоты
Основные функции
Пищеварение
Защита
Синтетическая
Дезинтоксикация
Регуляция
Описание
Расщепление пищевых волокон, участие в
синтезе пищевых ферментов
Стимуляция лимфоидного аппарата кишечника,
формирование колонизационной резистентности
Синтез витаминов группы В, К, аминокислот
Нейтрализация ксенобиотиков, холестерина,
билирубина
Регуляция иммунной, эндокринной и нервной
систем

22.

Урогенитальный тракт
«Золотой стандарт» анализа микробиоты урологического
тракта – секвенирование.
В пробах мочи здоровых добровольцев обнаружено
преобладание рода Lactobacillus. Реже обнаруживаются
Gardnerella,
Streptococcus,
Staphylococcus,
Corynebacterium.
Функции данной микрофлоры – защита от уропатогенов
путем продуцирования антимикробных пептидов или
ингибирование уропатогенов путем их компроментации
для рецепторов хозяина.

23.

Биоценоз нижних отделов мочеполового тракта
У мужчин – продолжает микрофлору кожи,
микробы населяют только передний отрезок
уретры (начальную треть мочеиспускательного
канала)
У женщин –в уретре и мочевом пузыре могут
присутствовать эпидермальные кокки до 103
КОЕ/мл и единичные энтеробактерии

24.

Вагинальная микрофлора
Лактобактерии: количество их у женщин репродуктивного
возраста 107-108; типичные представители: L. acidophilus,
L. fermentum, L. plantarum, L. casei
Бифидобактерии
Пептострептококки
Пропионобактерии
Превотеллы
Вейлонеллы

25.

Респираторный тракт
Секвенирование показало, что у здоровых людей верхние и нижние
дыхательные пути в норме содержат различные сообщества
микроорганизмов.
В дыхательных путях мало слизи, тонкий бактериостатический слой
липидов. При открытой гортани нет дополнительных физиологических
барьеров разделяющих альвеолы от микробной экосистемы глотки.
Устранение микробов из легких происходи постоянно (мукоцилиарный
эскалатор, кашель, врожденная и адаптивная иммунная защита).
В пределах здоровых легких количественная и качественная вариация
микроорганизмов незначительна. При патологических состояниях
степень разнообразия микрофлоры увеличивается

26.

Биоценоз носоглотки
Постоянная (облигатная) микрофлора носоглотки в
основном представлена зеленящими и
негемолитическими стрептококками (105–106 КОЕ) и
нейссериями (102–104КОЕ).
Добавочную группу составляют непатогенные
стафилококки, дифтероиды и гемофильные палочки,
выделяемые в среднем у 30% здоровых людей в
количестве, не превышающем 103–104 КОЕ.

27.

Нормальными значениями микрофлоры ВДП
принято считать:
зеленящие и негемолитические стрептококки (105–106 КОЕ)
катаральные нейссерии(102–104 КОЕ)
-лакто –и бифидобактерии, дифтероиды, дрожжи и
дрожжеподобные грибы (101–103 КОЕ)
непатогенные стафилококки (101–104 КОЕ)
гемофильные бактерии (101–102 КОЕ)
Патогенные стафилококки и гемолитические стрептококки
отсутствуют.

28.

Глаза
Использование метода секвенирования выявило до 221 вида
бактерий
87% составляют представители Proteobacteria, Actinobacteria,
Firmicutes
Микробиота окулярной поверхности зависит от состояния
организма хозяина, факторов внешней среды,
офтальмологических заболеваний.
Увеличение количества бактерий на окулярной поверхности
коррелирует с уменьшением количества бокаловидных клеток,
которые продуцируют муцин.

29.

Микрофлора конъюнктивы
Дифтероиды
Нейссерии
Стафилококки
Негемолитические стрептококки

30.

Кожа
На коже обитает не менее 12 видов микроорганизмов, которые
связаны сложными взаимоотношениями между собой, с
окружающей средой и организмом человека
Большинство идентифицированных родов – Corynebacterium,
Propionibacterium, Staphylococcus.
Традиционные кожный барьер – внешний слой эпидермиса
Над эпидермисом есть водный и липидный слои,
способствующие формированию бактериальных сообществ
Все слои кожи должны предотвращать инфицирование.

31.

32.

33.

34.

35.

Микробиота полости рта
Важная часть микробиома человека
Включает от нескольких сотен до
нескольких тысяч видов (примерно 700)
Около 50% этих видов еще не
культивировались

36.

Особенности микробиоты полости рта
Разнообразие
Различное местоположение
Внутриротовое смещение
Возрастные микробиологические изменения
Цикличные изменения
Структура биопленки

37.

Представители нормальной
микрофлоры полости рта
количество бактерий измеряется в 105-108 КОЕ/мл. К
этой категории относятся стрептококки, нейссерии,
вейлонеллы;
количество бактерий измеряется в 103-104 КОЕ/мл. К
этой категории относятся стафилококки, лактобактерии,
нитевидные бактерии;
количество бактерий составляет в 10-102 КОЕ/мл. К
этой категории относятся дрожжеподобные грибы.

38.

Протоки слюнных желез
у здорового
человека обычно стерильны либо содержат
незначительное количество анаэробных
бактерий.
Десневая жидкость
— среди микробов
доминируют строгие
анаэробы —
бактероиды,
актиномицеты,
спирохеты.

39.

Микробная флора полости рта в норме
Резидентная флора
Доминирующее
положение занимают
стрептококки.
Значительную
группу составляют
грамположительные
палочки:
коринебактерии,
лактобактерии.

40.

41.

Бактерии зубного налета

42.

43.

44.

45.

Дисбиоз – патологический процесс,
вызванный изменением в
качественном и количественном
составе микрофлоры тела человека

46.

Причины нарушения микробиоценоза
1. Ятрогенные воздействия (антибактериальная
терапия,
гормонотерапия,
применение
цитостатиков, лучевая терапия, оперативные
вмешательства),
2. Фактор питания (дефицит пищевых волокон;
потребление
пищи,
содержащей
антибактериальные компоненты, консерванты,
красители и др. ксенобиотики)

47.

Причины нарушения микробиоценоза
3. Острые инфекционные заболевания ЖКТ;
4. Снижение иммунного статуса различного генеза;
5. Ксенобиотики различного происхождения;
6.Функциональные
нарушения
моторики
кишечника.

48.

49.

Диагностика дисбиоза

50.

Диагностика дисбиоза
Бифидобактерии Лактобактерии

51.

Диагностика дисбиоза
Энтерококки
Бактероиды

52.

Диагностика дисбиоза
Кишечная палочка

53.

Коррекция дисбиоза
пробиотики — живые микроорганизмы, использование которых в
необходимом количестве оказывает лечебно-профилактическое воздействие
на организм человека;
пребиотики — специальные ингредиенты немикробного состава, которые
избирательно стимулируют рост и развитие нормальной микро- флоры
кишечника (инулин, лактулоза);
синбиотики — продукты, представляющие собой комбинацию
пробиотиков и пребиотиков, которые оказывают взаимноусиливающее
воздействие на функции желудочно-кишечного тракта и обмен веществ в
организме человека;
трансплантация фекальной микробиоты (ТФМ) — введение фекальной суспензии, полученной от здорового человека, в ЖКТ другого
человека с целью восстановления стабильной кишечной микробиоты.

54.

Механизмы взаимодействия
пробиотиков и организма человека
Активация локальных макрофагов и стимуляция продукции IgA
Индукция толерантности к пищевым антигенам
Участие в переваривании пищи и конкуренция за питательные вещества с патогенными
бактериями
Изменение местного уровня кислотности (pH) с созданием неблагоприятной среды для
патогенных микроорганизмов
Продукция бактериоцинов для подавления роста патогенных бактерий
Удаление супероксидных радикалов
Стимуляция продукции эпителиальных муцинов
Повышение функции кишечного барьера
Конкуренция с патогенными микробами за рецепторы адгезии
Модификация токсинов, продуцируемых патогенными микроорганизмами

55.

56.

Препараты для коррекции дисбиоза монокомпонентные
Escherichia coli М-17
Bifidobacterium
bifidum
прополис,
экстракты сои и
овощей

57.

Препараты для коррекции дисбиоза
– поликомпонентные (симбиотики)
Bifidumbacterium bifidum
Escherichia coli М-17
Bifidobacterium
infantis,
Lactobacillus acidophilus,
Enterococcus faecium

58.

Препарты для коррекции дисбиоза –
комбинированные (синбиотики)
Максилак - это 9 культур
полезных
пробиотических
бактерий, каждая из которых
представлена в оптимальной
концентрации

59.

Препараты для коррекции дисбиоза –
самоэлиминирующиеся микроорганизмы
Bacillus subtilis
Споры Bacillus cereus

60.

Препараты для коррекции дисбиоза рекомбинантные
Bacillus subtilis УКМ B-5020

61.

Препараты для коррекции дисбиоза сорбированные

62.

Препараты для коррекции дисбиоза мультипробиотики
Lactobacillus acidophilus — 2,0 × 109 КОЕ,
Lactobacillus rhamnosus — 2,0 × 109 КОЕ,
Lactobacillus casei — 1,0 × 109 КОЕ,
Lactobacillus reuteri — 2,0 × 109 КОЕ,
Lactobacillus plantarum — 1 ,0 × 109 КОЕ,
Lactobacillus fermentum — 1,0 × 109 КОЕ,
Bifidobacterium bifidum — 1,0 × 109 КОЕ.

63.

Препараты для коррекции
дисбиоза - метаболиты
Содержит
продукты
обмена
веществ
кишечной
палочки,
фекального
стрептококка,
лактобактерий

64.

Пребиотики
Содержит инулин и олигофруктозу –
питание для бифидобактерий. При
сочетании
с
пробиотиками
наблюдается синергический эффект

65.

Пребиотики
Активное вещество дюфалака —
лактулоза
расщепляется
бактериями толстого кишечника на
низкомолекулярные
органические
кислоты,
что
приводит
к
понижению кислотности кишечного
содержимого

66.

АKKERMANSIA MUCINIPHILA — НОВЫЙ
УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ПРОБИОТИК НА ОСНОВЕ
ЖИВЫХ КОММЕНСАЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ КИШЕЧНИКА ЧЕЛОВЕКА

67.

У ребенка A. muciniphila обнаруживаются уже на первом
месяце жизни; их количество быстро возрастает к 6-12
месяцам и достигает уровня взрослого человека к 3 годам
жизни. Содержание этих бактерий более высокое в
дистальных отделах толстой кишки; в нижних отделах их
количество уменьшается. У здоровых взрослых людей
уровень A. muciniphila может достигать 0,5-4% всех
микроорганизмов, присутствующих в толстой кишке. В
процессе деградации и метаболизации муцина A. muciniphila
образуют различные низкомолекулярные соединения, которые
способны выступать в качестве источника энергии как для
кишечных микроорганизмов, так и для клеток хозяина. A.
muciniphila активно участвуют в регуляции иммунитета и
барьерной функции кишечника.

68.

69.

САНИТАРНОМИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ
C
ОБСЛЕДОВАНИЕ
ЛЕЧЕБНОПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ УЧРЕЖДЕНИЙ

70.

САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
ИЗУЧАЕТ МИКРОФЛОРУ
C
ОКРУЖАЮЩЕЙ
СРЕДЫ И ЕЕ
ВОЗДЕЙСТВИЕ НА ОРГАНИЗМ
ЧЕЛОВЕКА

71.

Задачи санитарной микробиологии
• Гигиеническая и эпидемиологическая оценка внешней среды
по микробиологическим показателям
• Разработка гигиенических нормативов микрофлоры
исследуемых объектов
• Разработка методов микробиологических исследований
объектов внешней среды для оценки их санитарногигиенического состояния
• Разработка рекомендаций по оздоровлению объектов внешней
среды путем воздействия на их микрофлору

72.

Методы санитарной микробиологии
•Прямое обнаружение патогенных микробов
во внешней среде
•Косвенная индикация, основанная на
выявлении в объектах санитарнопоказательных микроорганизмов

73.

Санитарно-показательные
микроорганизмы (СПМО) Это микроорганизмы, которые постоянно
обитают в естественных полостях тела
человека и постоянно выделяются во
внешнюю среду.
Чем выше концентрация СПМО, тем больше
вероятность присутствия патогенных
микробов.

74.

Требования к СПМО:
•Постоянное обитание в естественных
полостях тела человека и постоянное
выделение во внешнюю среду.
•Отсутствие размножения во внешней среде
•Длительность выживания и устойчивость
во внешней среде не меньше, чем у
патогенных микроорганизмов

75.

Требования к СПМО:
•Отсутствие «двойников», с которыми
СПМО можно перепутать.
•Относительно низкая изменчивость во
внешней среде
•Наличие простых и надежных методов
индикации.

76.

Группировка СПМО
1 группа СПМО:
Индикаторы фекального загрязнения – представители микрофлоры
кишечника человека
2 группа СПМО:
Индикаторы воздушно –капельного загрязнения – комменсалы
верхних дыхательных путей
3 группа СПМО:
Индикаторы процессов самоочищения – обитатели внешней среды.

77.

ОБЪЕКТАМИ САНИТАРНОМИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ
ИССЛЕДОВАНИЙ CВ ЛПУ ЯВЛЯЮТСЯ
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫЕ
ОБЪЕКТЫ ГОСПИТАЛЬНОЙ СРЕДЫ

78.

Инфекции, связанные с оказанием
медицинской помощи (ИСМП)
Развиваются у 6-12% всех госпитализированных, особенно
после операционных вмешательств
Являются причиной смерти 4-7% госпитализированных
больных
Увеличивают затраты на лечение и продолжительность
пребывания больного в стационаре
В основном ИСМП характеризуются продолжительным
течением и склонностью к хронизации патологического
процесса

79.

Факторы, имеющие особое значение в
развитии ИСМП в настоящее время
Селекция полирезистентной микрофлоры
Активация
искусственных
механизмов
передачи
ИСМП
(диагностические манипуляции, трансплантация органов и тканей)
Увеличение количества пациентов с иммунодефицитными состояниями
Неправильные архитектурно-планировочные решения
Низкая эффективность медико-технического оснащения ЛПУ
Неудовлетворительная подготовка персонала ЛПУ по вопросам
профилактики ИСМП, невыполнение правил госпитальной и личной
гигиены

80.

Санитарный режим ЛПУ включает:
• Организационные меры
•Медицинские осмотры и обследование персонала
• Работу только в спецодежде
•Соблюдение правил личной гигиены
• Дезинфекцию и стерилизацию
• Проведение санитарно-микробиологических
исследований

81.

Санитарно-микробиологические
исследования проводят
•лаборатории ЛПУ в плане самоконтроля
•2-4 раза в год - лаборатории центров
Роспотребнадзора
•Внепланово по эпидемическим показаниям

82.

Объекты обследования в ЛПУ:
•Воздушная среда
•Вода из разводящей сети
•Изделия медицинского назначения
•Руки и спецодежда медицинского
персонала

83.

Микробиологическая чистота воздуха
помещений лечебно-профилактических
учреждений напрямую связана с
эпидемиологической обстановкой

84.

Микрофлора воздуха
Относительно
постоянно в
воздухе
присутствуют:
микрококки,
сарцины,
бациллы.

85.

Исследование бактериальной
обсемененности воздушной среды
Проводится в зависимости от функционального назначения
помещений. В воздухе определяют:
• Общее количество микроорганизмов (ОМЧ) в 1 куб. м
воздуха (КОЕ/куб.м)
• Количество колоний S. aureus в 1 куб. м воздуха (КОЕ/куб.м)

86.

В зависимости от назначения
к помещениям ЛПУ предъявляются различные требования,
в том числе по санитарно-микробиологическим
показателям.
Исходя из этого помещения принято классифицировать
на классы чистоты.

87.

Санитарно-микробиологические показатели
Класс чистоты
1
Особо чистые (А)
общее количество микроорганизмов
количество колоний Staphylococcus aureus
в 1 м3воздуха (КОЕ/м3)
в 1 м3 воздуха (КОЕ/м3)
Название помещения
2
Операционные, родильные
залы, асептические боксы для
гематологических, ожоговых
пациентов, палаты для
недоношенных детей,
асептический блок аптек,
стерилизационная (чистая
половина), боксы
бактериологических
лабораторий
до начала работы
во время работы
до начала работы
во время работы
3
4
5
6
не более 200
не более 500
не должно быть
не должно быть

88.

Санитарно-микробиологические показатели
Класс чистоты
1
Чистые (Б)
общее количество микроорганизмов
количество колоний Staphylococcus aureus
в 1 м3воздуха (КОЕ/м3)
в 1 м3 воздуха (КОЕ/м3)
Название помещения
2
Процедурные, перевязочные,
предоперационные, палаты и
залы реанимации, детские
палаты, комнаты сбора и
пастеризации грудного молока,
ассистентские и фасовочные
аптек, помещения
бактериологических и
клинических лабораторий,
предназначенные для
проведения исследований
до начала работы
во время работы
до начала работы
во время работы
3
4
5
6
не более 500
не более 750
не должно быть
не должно быть

89.

Санитарно-микробиологические показатели
Класс чистоты
количество колоний Staphylococcus aureus
в 1 м3воздуха (КОЕ/м3)
в 1 м3 воздуха (КОЕ/м3)
Название помещения
2
Палаты хирургических
отделений, коридоры,
примыкающие к операционным,
родильным залам, смотровые,
Условно-чистые боксы и палаты инфекционных
(В)
отделений, ординаторские,
материальные, кладовые
чистого белья
1
общее количество микроорганизмов
до начала работы
во время работы
до начала работы
во время работы
3
4
5
6
не нормируется
не нормируется
не нормируется
не нормируется

90.

Санитарно-микробиологические показатели
Класс чистоты
1
Грязные (Г)
общее количество микроорганизмов
количество колоний Staphylococcus aureus
в 1 м3воздуха (КОЕ/м3)
в 1 м3 воздуха (КОЕ/м3)
Название помещения
2
Коридоры и помещения
административных зданий,
лестничные марши лечебнодиагностических корпусов,
санитарные комнаты, туалеты,
комнаты для грязного белья и
временного хранения отходов
до начала работы
во время работы
до начала работы
во время работы
3
4
5
6
не нормируется
не нормируется
не нормируется
не нормируется

91.

92.

Отбор проб воздуха
аспирационным методом
• Для отбора проб воздуха
используется аппарат Кротова,
пробоотборник аэрозольный
бактериологический (ПАБ-1)
• Для определения ОМЧ,
дрожжевых и плесневых грибов
отбирают 100 куб. дм воздуха.
Для определения S. аureus – 250
куб. дм.

93.

Исследование воздуха
• Для определения ОМЧ забор проб проводят на
питательный агар типа МПА, ГРМ.
• Для определения S. аureus забор проводят на
желточно-солевые среды: ЖСА, стафилококк-агар,
маннитол-агар.

94.

Исследование воздуха
Посевы
инкубируют
в
термостате при температуре
37 градусов в течение 48
часов.
Подсчитывают
количество
колоний
и
пересчитывают на 1 куб. м
воздуха.

95.

Исследование воздуха
Подсчитывают
количество
колоний
стафилококка
с
зоной
лецитиназной
активности и пересчитывают
на 1 куб. м воздуха.

96.

Требования к микробиологической чистоте
воды
(СанПиН 1.2.3685-21)
Показатели
Общее микробное число (ОМЧ) (37±1,0)°C
Единицы измерения
Нормативы
КОЕ/см3
Не более 50
Обобщенные колиформные бактерии
КОЕ/100см3
-
Escherichia coli (E.coli)
Энтерококки
Колифаги
Споры сульфитредуцирующих
клостридий
КОЕ/100см3
КОЕ/100см3
БОЕ/100см3
-
Число спор в 20см3
-
Определение в 50дм3
-
Цисты и ооцисты патогенных
простейших, яйца и личинки гельминтов

97.

Дополнительные показатели
Возбудители кишечных
инфекций бактериальной
природы
Определение в 1дм3
-
Pseudomonas aeruginosa
Определение в 1дм3
-
Возбудители кишечных
инфекций вирусной природы
Определение в 10дм3
-
Legionella pneumophila
КОЕ/1дм3
Не более 100

98.

Отбор пробы воды из водопроводного крана

99.

Определение ОМЧ воды
•Определяют методом глубинного посева 1
мл воды в питательный агар
•Подсчитывают число колоний, выражают в
КОЕ/мл

100.

Определение ОМЧ воды методом
глубинного посева

101.

Для определения ОМЧ воды подсчитывают
колонии в глубине и на поверхности агара

102.

Обобщенные колиформные бактерии
Это
—
условно
выделяемая
по
морфологическим
и
культуральным
признакам группа бактерий семейства
энтеробактерий.
Обобщенные колиформные бактерии представители родов Escherichia (в том
числе и Е. coli), Citrobacter , Enterobacter.
Это Грам – палочки без спор,
ферментирующие
лактозу
и
не
образующие фермент оксидазу.

103.

Определение обобщенных
колиформных бактерий воды
• Проводят фильтрование пробы воды через мембранные
фильтры
• Накладывают их на поверхность среды Эндо
• Отмечают на фильтрах лактозоположительные
колонии, оценивают морфологию бактерий,
оксидазную активность, биохимические свойства

104.

C

105.

C

106.

Метод определения E.coli с
использованием мембранных фильтров
• Проводят фильтрование пробы воды через мембранный
фильтр
• Накладывают их на поверхность среды Эндо, инкубируют
при температуре (44 ± 0,5) °C 24 часа.
• Отмечают на фильтрах лактозоположительные колонии,
оценивают морфологию бактерий, оксидазную активность,
биохимические свойства

107.

Подтверждением наличия
E.coli является помутнение
и газообразование в среде
лактоза с борной кислотой.

108.

•Определение колиформных бактерий и
E.coli в пробе анализируемой воды
проводят с использованием
мембранной фильтрации, применяя
хромогенные среды
(например, Chromocult Coliform Agar).
•Колонии от красного цвета до
оранжевого и розового
•E.coli: от темно-синего до фиолетового
цвета

109.

Энтерококки
• Грамположительные бактерии,
не образующие споры,
облигатно ферментативные
хемоорганотрофы. Это
сферические или овальные
клетки, расположенные парами
или цепочками,
каталазоотрицательные,
продуцирующие молочную
кислоту.

110.

Определение энтерококков
•Проводят фильтрование пробы воды через мембранный
фильтр.
•Фильтры переносят на одну из дифференциальнодиагностических сред (Сланец-Бартли, энтерококковый
агар Chromocult, селективную среду для выделения
кишечных энтерококков, энтерококковый (азидный) агар).
•Подсчитывают колонии, характерные для кишечных
энтерококков в зависимости от используемой среды.

111.

Среда Сланец-Бартли
• Темно-малиновые выпуклые с
ровными краями,
равномерно окрашенные
(Enterococcus faecalis).
Розовые равномерно окрашенные
или с темно-красным
центром нечетко оформленным
(Enterococcus faecium).

112.

Энтерококковый агар
Chromocult
•Красные,
темнобордовые,
диаметром 0,5—2 мм

113.

Основа хромогенного агара для
энтерококков (m-EI Chromogenic Agar Base)
•Колонии
энтерококков
синие

114.

Определение спор
сульфитредуцирующих клостридий в
воде
• Проводят посев воды в железо-сульфитный агар
• Культивируют в анаэробных условиях
• Подсчитывают количество черных колоний клостридий,
результат выражают в числе спор на 20 мл воды

115.

Рост сульфитредуцирующих клостридий
на железо-сульфитном агаре

116.

Определение колифагов в воде

117.

Определение колифагов в воде
•Определяют методом
агаровых слоев
•Учитывают количество
зон лизиса (бляшек)
•Выражают в БОЕ в 100 мл
воды

118.

Исследование микробной
обсемененности объектов внешней
среды предусматривает определение:
•Стафилококков
•Колиформных бактерий - бактерий
группы кишечных палочек (БГКП)
•Синегнойной палочки

119.

Исследование микробной обсемененности
объектов внешней среды
• Отбор проб с поверхностей
проводят методом смывов
стерильными ватными
тампонами,
вмонтированными в
пробирки с 2 мл
стерильной 0,1%
пептонной воды.

120.

Объекты в ЛПУ, подлежащие санитарнобактериологическому контролю методом
смывов:
•Операционный блок
•Послеоперационные палаты,
отделения, палаты реанимации и
интенсивной терапии
•Перевязочные, процедурные

121.

Операционный блок
• Интубационная трубка
• Мазка наркозного аппарата
• Ларингоскоп
• Операционный стол
• Руки персонала, участвующего в
операции
• Рабочие столы
• Шланг вакуум-отсоса
• Стойки для введения
лекарственных средств

122.

Послеоперационные палаты,
отделения, палаты реанимации и
интенсивной терапии
• Кровать и постельное белье для
больного
• Полотенца и приспособления для рук
персонала
• Руки персонала
• Шланг вакуум отсоса
• Внутренняя поверхность шкафов и
холодильников для лекарств и
градусников

123.

Перевязочные, процедурные
•Кушетка для перевязок
•Руки персонала
•Спецодежда персонала
•Медицинские столы и
тумбочки

124.

Бактериологический контроль
эффективности обработки рук персонала
На обеих руках протирают:
• Ладони
• Межпальцевые промежутки
• Ногтевые ложа
• Подногтевые поверхности
На стерильность проверяют
руки хирурга и операционное
поле. Смывы засевают на МПА
и сахарный бульон.

125.

Для обнаружения в смывах
стафилококков:
• 0,2 мл смывной жидкости засевают в пробирку с 5 мл солевого бульона.
• Инкубируют 24 часа в термостате
При обнаружении признаков роста делают пересев на желточно-солевые
среды

126.

127.

Для обнаружения в смывах
колиформных бактерий:
• Проводят высев 0,2 мл смывной жидкости в пробирку с 5 мл
среды Кесслера
• Инкубируют в термостате 24 часа
• При обнаружении признаков роста делают пересев на среду Эндо
• Выросшие на среде Эндо колонии изучают для установления их
возможной принадлежности к патогенным энтеробактериям

128.

129.

Для обнаружения в смывах
синегнойной палочки:
• Проводят высев смывной жидкости в среду №8 и среду №9
• Инкубируют в термостате 24 часа
• Отмечают колонии с ровными или волнистыми краями, гладкой
поверхностью с характерным пигментом и выделяют чистую культуру
• Проводят идентификацию культуры

130.

Обследование медицинского персонала
на носительство S. aureus
•Берут мазки из носа стерильным тампоном
•Проводят посев на желточно-солевой агар
•Подсчитывают число колоний стафилококка
после инкубации в течение 48 часов.
•Норма - менее 103 клеток стафилококка на
тампон.

131.

132.

Оценка качества проведения
стерилизационных мероприятий
•Контроль условий стерилизации
•Контроль стерильности
медицинских изделий
•Контроль воздушной среды в ЦСО

133.

Контроль стерильности изделий
медицинского назначения в ЛПУ
Контролю подлежат изделия, материалы и
медицинские инструменты, соприкасающиеся:
•С кровью
•Слизистыми оболочками
•Раневой поверхностью
•Инъекционными растворами

134.

Контроль стерильности изделий
медицинского назначения в ЛПУ
• Для контроля стерильности проводят посев в
питательные среды: тиогликолевую, бульон Сабуро.
• Контролируемые изделия полностью погружают в
питательную среду или в среду помещаются
отдельные детали и фрагменты.
• При проверке стерильности крупных объектов,
отбор проб проводят методом смывов.

135.

Контроль стерильности изделий
медицинского назначения в ЛПУ
• Посевы в тиогликолевой среде инкубируют в термостате
при температуре 32 градуса, в бульоне Сабуро – при
температуре 20-22 градуса в течение 14 суток при контроле
изделий, простерилизованных химическим методом и в
течение 7 суток при контроле изделий,
простерилизованных физическим методом.

136.

137.

Контроль стерильности изделий
медицинского назначения в ЛПУ
•Посевы на контроль стерильности
проводят в боксах с ламинарным
потоком воздуха или боксированных
помещениях (бокс с предбоксником).

138.

Контроль стерильности изделий
медицинского назначения в ЛПУ
• Перед исследованием поверхности в боксе и предбокснике
обрабатывают дезинфектантом
• Включают бактерицидные облучатели
• Перед входом в бокс сотрудники лаборатории обрабатывают
руки, надевают стерильную спецодежду, маску, перчатки
• В процессе посева в боксе оценивают обсемененность
воздуха. Допускается рост не более 3 колоний
неспорообразующих сапрофитов.

139.

Оценка качества влажной
дезинфекции в ЛПУ
• Спустя 30-45 минут после окончания
дезинфекции проводят смывы с
обработанных объектов, играющих
значимую роль в передаче инфекции
• В смывах определяют: БГКП, S. aureus, M.
tuberculosis (в очагах туберкулеза)
• Дезинфекция считается
удовлетворительной при обнаружении
санитарно-показательных микробов из не
более 0,5% смывов

140.

СПАСИБО ЗА
ВНИМАНИЕ
C