Иммунные реакции

1.

Федеральное государственное бюджетное образовательное
учреждение высшего образования
«Ульяновский государственный университет»
Иммунные
реакции
Лектор:
профессор Н.И.Потатуркина-Нестерова

2.

План лекции
Иммуннодиагностические реакции – понятие. свойства, применени
е.
2. Реакция агглютинации – компоненты, механизм, способы постановк
и.
3. Варианты реакции агглютинации, титр реакции агглютинации.
4. Реакция преципитации – компоненты, механизм, применение.
5. Варианты реакции преципитации.
6. Реакция связывания комплемента – компоненты, фазы, механизм, п
рименение.
7. Реакция Кумбса – механизм, применение.
8. Реакция нейтрализации токсина антитоксином (in vivo, in vitro).
9. Реакции с мечеными антителами и антигенами.
10. Иммунноблотинг.
11. Проточная цитометрия.
12. Иммунная электронная микроскопия.
1.

3.

ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ (ИР)
Это реакции, в которых участвуют а/г и а/т in v
itro. А/т содержатся в сыворотке (сыворотка-ser
um), поэтому часто эти реакции называют серолог
ическими.
При помощи ИР по известному а/г определяю
т неизвестные а/т или, наоборот, по известны
м а/т неизвестные а/г.
Эти реакции строго специфичны и высоко чув
ствительны.

4.

Иммунодиагностические реакции
Применяют:
1) для диагностики бактериальных и вирусных
заболеваний – обнаружение в сыворотке крови
больного а/т против а/г возбудителя позволяет
поставить диагноз;
2) для идентификации а/г возбудителя с помощью
иммунных сывороток (серологическая
идентификация)

5.

Серологические реакции делят на:
простые – участвуют два компонента (а/г и а/т)
- агглютинации
- преципитации
2) сложные – участвуют три компонента
и более (антиген, антитело,
комплемент и т. д.).
- реакция связывания комплемента и др.
3). С использованием метки:
– реакция иммунофлюоресценции (РИФ) ;
– иммуноферментный анализ (ИФА);
– радиоиммунный анализ (РИА);
1)

6.

Реакция агглютинации
(от лат. agglutinatio – склеивание)
Это склеивание антигенов под действием антител
в присутствии электролита
А/г имеет корпускулярную природу
Антиген называют агглютиногеном,
Антитело – агглютинином,
Образовавшийся иммунный
комплекс – агглютинатом

7.

Реакцию агглютинации используют
для:
определения а/т в сыворотке крови больных;
определения возбудителя, выделенного от бол
ьного (а/г);
определения групп крови

8.

Стадии РА
специфическая (невидимая) –
связывание активного центра а/т с
детерминантой а/г.
неспецифическая (видимая) – выпадение обра
зовавшегося комплекса в осадок
Способы постановки РА
1) Ориентировочная
2) Развернутая

9.

ОРИЕНТИРОВОЧНАЯ РА
Чаще используют для идентификации антигена (се
ротипирование возбудителя).
Для этого на предметном стекле к капле агглютини
на в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую куль
туру возбудителя, выделенного от больного.
Результат учитывают через 2-3 мин. Контроль – вме
сто сыворотки капля физраствора.

10.

11.

12.

Развернутая реакция агглютинации
(Реакция Видаля, Грубера)
Выполняют в пробирках, объемная РА. Чаще ис
пользуется для обнаружения антител и определ
ения их количества (титра).
Титр реакции агглютинации – наибольшее разв
едение сыворотки, вызвавшее положительную
реакцию агглютинации.

13.

Техника выполнения РА
К последовательным разведениям сыворотки
крови больного в ряду пробирок добавляют д
иагностикум (а/г), затем 2-3 часа инкубации
при 37оС и сутки при комнатной температуре
. После этого определяют титр реакции.
Повторение РА через 5-7 дней позволяет выяв
ить нарастание титра антител у больного чел
овека (метод парных сывороток)

14.

Схема постановки развернутой реакции
агглютинации

15.

16.

Внешние проявления РА
О-агглютинация - мелкодисперсная агглютин
ация иногда видимая только в агглютиноскоп и
ли даже микроскоп – реакция микроагглютина
ции
Н-агглютинация - крупнохлопчатая агглютин
ация при агглютинации бактерий, имеющих
жгутики.

17.

Варианты реакции гемагглютинации
(склеивание эритроцитов)
Прямая реакция гемагглютинации – не сероло
гическая, т.к. сыворотка (а/т) не участвует
Непрямая (пассивной) реакция гемагглютина
ции (РНГА, РПГА)
Реакция торможения агглютинации (РТГА)

18.

Виды реакции агглютинации.
Реакция прямой гемагглютинации
(не серологическая)
Склеивание эритроцитов при адсорбции на них
определенных АГ, например вирусов
При положительном результате эритроциты рав
номерно покрывают все дно пробирки в виде «з
онтика»
При отрицательной реакции эритроциты в виде
маленького диска или «пуговки» располагаются
в центре дна пробирки.

19.

20.

21.

Реакция непрямой (пассивной)
гемагглютинации (РНГА, РПГА)
Выявляют а/т с помощью антигенного эритроцита
рного диагностикума – эритроциты с адсорбирова
нными на них а/г или а/т.

22.

Реакция торможения гемагглютинации
(РТГА)
Основана на подавлении а/г вирусов антителами иммунно
й сыворотки
В результате вирусы теряют способность агглютинировать
эритроциты
Используют для диагностики вирусных инфекций, возбуд
ители которых способны агглютинировать эритроциты (гр
ипп, корь краснуха, клещевой энцефалит и др.).

23.

Реакция гемаггютинации и РТГА

24.

25.

26.

Реакция коагглютинации
Возбудителя определяют с помощью стафилокок
ков, на которые неспецифически адсорбируют а
нтимикробные антитела, затем взаимодейству
ющие затем с соответствующими микробами, вы
деленными от больного
Образуются хлопья, состоящие из стафилококко
в, а/т и определяемого микроба

27.

Реакция латекс-агглютинации
(РЛА)
Частицы полистерольного латекса служат носи
телями а/г
Латексные частицы выполняют роль как бы иск
усственных эритроцитов, но более устойчивы к
внешним воздействиям.

28.

Реакция Кумбса
Для выявления неполных (однов
алентных) антител, например, ан
тирезусных (Rh+)
В систему вносят антирезусные а
/т + Rh-положительные эритроци
ты + антиглобулиновую сыворот
ку
Это вызывает агглютинацию эрит
роцитов
Используют при гемолитической
болезни новорожденных

29.

30.

Реакция преципитации
(от лат. рrecipito – осаждать)
Осаждение (преципитация) антигена, под возде
йствием специфических антител в растворе эле
ктролита.
Преципитин – антитело, участвующее в РП
Преципитиноген – антиген, участвующий в РП.
Преципитат – иммунный комплекс (осадок), об
разующийся в результате РП.

31.

Способы постановки РП
Кольцепреципитация ( в пробирке).
Преципитация в геле.
Реакция флоккуляции.

32.

Реакция кольцепреципитации
На преципитин наслаивают растворимый а/г
При положительной реакции на границе этих р
астворов образуется непрозрачное кольцо прец
ипитата

33.

Реакция флоккуляции
В качестве а/г участвует токсин или анатоксин.
На границе между а/г и а/т помутнение в виде «облака».
Применяют для опре-
деления активности
антитоксической сыворотки или анатоксина.
Реакция термопреципитации
А/г получают кипячением водного
экстракта органов или тканей
(реакция Асколи – сибирская язва)

34.

РП в геле
Радиальная иммунодиффузия по Манчини
В агаровом геле с иммунной сывороткой делают лунк
и, в них помещают а/г, он диффундирует в гель
А/г в геле образует с а/т кольца преципитации вокруг
лунок.
Встречная иммунодиффузия по Оухтерлони. В лунки
раздельно помещают а/г и а/т. Они диффундируют в
агар. Между ними образуются полосы - «усы» прецип
итации.

35.

Реакция преципитации

36.

Применение РП
Диагностика инфекционных заболеваний
Судебная-медицинская экспертиза определен
ие видовой принадлежности белков – при ана
лизе кровяных пятен, спермы и т.д.
Санитарная практика
Выявление фальсификации рыбных и мясных
изделий.

37.

Реакция связывания комплемента
Основана на активации комплемента комплексом а/г
-а/т.
При соответствии антитела антигену образуется ком
плекс, взаимодействующий с Fc-фрагментом компле
мента.
В этом случае комплемент лизирует а/г.
Применяют для диагностики многих инфекционных
заболеваний.

38.

Компоненты реакции
1 фаза: инкубация смеси трех компонентов
антиген+антитело+комплемент
2 фаза (индикаторная): добавление
гемосистемы – эритроциты барана +
3. гемолитическая сыворотка
Результаты реакции
+ реакция при отсутствии гемолиза
- реакция проявляется гемолизом

39.

40.

Реакции с использованием метки
Это реакции, в которых для детекции
образовавшегося комплекса «антиген-антитело»
применяют химические или физические метки, что
повышает чувствительность реакции по сравнению с
серологическими.
К ним относятся:
1) реакция иммунофлюоресценции (РИФ),
2) иммуноферментный анализ (ИФА),
3) радиоиммунный анализ (РИА),
4) иммунный блотинг (ИБ).

41.

Реакции с мечеными антителами или
антигенами
Реакция имунофлюоресценции (РИФ)
Для выявления а/г или а/т.
Три разновидност
и: прямая, непрямая, с комплементом.
Прямая основана на способности светиться в У
Ф-лучах люминесцентного микроскопа антигено
в, обработанных сыворотками с антителами, меч
еными флюорохромами. Свечение зеленого цвет
а по переферии клетки.

42.

43.

Иммуноферментный анализ (ИФА)
Выявление а/г с помощью комплементарных а/
т, конъюгированных с ферментом-меткой (щел
очная фосфатаза)
После соединения а/г с меченными а/т добавля
ют субстрат, который расщепляется ферменто
м
В результате изменяется цвет продукта реакци
и
Применяется для диагностики вирусных, бакте
риальных, паразитарных болезней (ВИЧ, гепат
ит В)

44.

45.

Радиоиммунный метод
Реакция а/г-а/т, меченых радионуклидами: 125J, 14C, 3Н,
51Сr и др.
После образования иммунного комплекса определяют его р
адиоактивность (β- и γ-излучение) счетчиком.
Интенсивность излучения прямо пропорционально количе
ству связавшихся молекул а/г и а/т.

46.

47.

Благодарю за внимание!