Соловьева, Нистратова КДЦ 2

1.

Государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение
Департамента здравоохранения города Москвы
«Медицинский колледж №1»
(ГБПОУ ДЗМ «МК №1»)
Техника посевов шпателем, петлёй,
тампоном на чашке Петри.
Подготовили:
Соловьева
Виталина,
Нистратова
Софья, Едунова Екатерина, Семенова Алёна, Качурка
Полина, Дробикова Елизавета, Кривошей Полина
Группа: Л111-3
Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика
Москва
2024

2.

Техника посевов на чашке Петри с помощью тампона
ПОСЕВ НА ПЛОТНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ С ПОМОЩЬЮ ТАМПОНА — позволяет
изолировать и идентифицировать микроорганизмы из различных образцов. Для начала
необходимо подготовить все необходимые материалы: стерильные тампоны,
питательные среды, инкубатор и инструменты для работы.
ЭТАПЫ ПОСЕВА:
1) Выбор образца. Затем
берём стерильный тампон
и аккуратно проводим им
по поверхности образца.
2) Тампон помещается на поверхность
плотной питательной среды.
Рекомендуется использовать метод
«зигзагообразного» посева.
Важно не касаться
окружающих предметов,
чтобы избежать
контаминации.
Сначала тампон проводим по одной
стороне среды, затем поворачиваем его
и продолжаем на другой стороне.
medcollege.ru
3) После
завершения
посева тампон
следует
утилизировать,
чтобы избежать
перекрестного
загрязнения.
2

3.

Техника посевов на чашке Петри с помощью тампона
После инкубации необходимо
проверить рост колоний на среде.
Колонии могут иметь различные
цвета, формы и размеры, что
помогает в их идентификации.
Важно
записывать
все
наблюдения для дальнейшего
анализа.
Если требуется, можно провести
доп. тесты для определения
характеристик микроорганизмов.

4.

Техника посевов на чашке Петри шпателем
Техника посева на среду шпателем используется в микробиологии для равномерного
распределения засеваемого материала по поверхности плотной питательной среды.
ПРОСТАЯ ТЕХНИКА ПОСЕВОВ ШПАТЕЛЕМ:
1. Перенесите небольшой объем суспензии
поверхность агара в чашке Петри.
материала
пипеткой
на
2. Распределите жидкость по поверхности агара с помощью шпателя,
одновременно поворачивая чашку, чтобы покрыть всю поверхность.
3. После посева стеклянный шпатель помещают в дезинфицирующий
раствор, металлический – прокаливают в пламени горелки.
4. Подпишите донышко чашки и поставьте в термостат.

5.

Метод Дригальского
Берут 3 чашки Петри с питательной средой.
На 1-ю чашку пипеткой наносят каплю исследуемого
материала и растирают шпателем по всей поверхности
питательного агара, вращая полуоткрытую чашку.
Затем шпатель переносят во 2-ю чашку и втирают оставшуюся
на шпателе культуру в поверхность питательной среды.
Далее шпатель переносят в 3-ю чашку и аналогичным образом
производят посев. После этого шпатель стерилизуют.
Засеянные чаши отправляют в термостат
При оценке результатов можно заметить, что в первой чашке
сплошной рост бактерий. В двух других – изолированные
колонии.
Этот метод применяется для получения изолированных
колоний и чистой культуры микроорганизма.

6.

Техника посевов на чашку Петри с помощью петли.
При посевах чаще всего пользуются бактериологической петлей. Например жидкий материал
для посева берут петлей. При взятии петлей жидкость должна образовать в кольце петли
тонкую прозрачную пленку – "зеркало”.
Бактериальную
петлю
перед
взятием
материала
прокаливают в пламени горелки, затем остужают.
Нельзя остужать петлю прикосновением к поверхности
питательной среды, даже свободной от микробного роста,
так как на ней могут находиться колонии, не видимые
простым глазом.
После окончания посева петлю прожигают повторно для
уничтожения находящейся в ней микробной культуры или
инфицированного микроорганизмами материала.

7.

Посев на питательные среды
ПОСЕВ МОЧИ НА ПЛОТНУЮ ПИТАТЕЛЬНУЮ СРЕДУ
Зоной сброса является вертикальный штрих вдоль
всей
чашки.
Разнос колоний происходит штрихами от края к
краю чашки,
проходя через
зону сброса
ПОСЕВ ШТРИХОМ НА ПИТАТЕЛЬНЫЕ
СРЕДЫ (все кроме мочи)
Зона
сброса
вдоль
края.
Поворачиваем на 90 градусов делам
зигзагом приблизительно 8 движений
Повторяем еще раз тоже самое
Повернув 3 раз на 90 градусов делаем
4 штриха для выделения чистых
колоний

8.

Государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение
Департамента здравоохранения города Москвы
«Медицинский колледж №1»
(ГБПОУ ДЗМ «МК №1»)
Приготовление жидких, полужидких и
плотных питательных сред
Подготовили:
Соловьева
Виталина,
Нистратова
Софья, Едунова Екатерина, Семенова Алёна, Качурка
Полина, Дробикова Елизавета, Кривошей Полина
Группа: Л111-3
Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика
Москва
2024

9.

Питательные среды
По консистенции ВЫДЕЛЯЮТ:
ЖИДКИЕ СРЕДЫ (среды без агара)
представляют
собой
настои,
отвары, бульоны, приготовленные
на основе мяса, рыбы, овощей, а
также композиции определенных
концентраций
химических
соединений.
Выращивание микроорганизмов производится на
субстратах – питательных средах.
ПОЛУЖИДКИЕ СРЕДЫ получают
путем добавления к жидким средам
0,5-0,9% агара или желатина (МПЖ)
ПЛОТНЫЕ СРЕДЫ, содержащие 1,53% агара (МПА)
medcollege.ru
9

10.

Приготовление жидких питательных сред
ЖИДКИЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ - бульон, применимый для
изучения
физиолого-биохимических
особенностей
микроорганизмов, а также для хранения микроорганизмов,
плохо развивающихся на плотных средах.
основные компоненты жидких питательных сред:
ПИТАТЕЛЬНЫЕ ВЕЩЕСТВА
Белки
Углеводы
Соли
ВОДА
БУФЕРНЫЕ СИСТЕМЫ
medcollege.ru
10

11.

Приготовление жидких питательных сред
ПОДГОТОВКА
ИНГРЕДИЕНТОВ
РАСТВОРЕНИЕ В
ДИСТИЛИРОВАННОЙ
ВОДЕ
КОРРЕКЦИЯ РН
(с помощью кислот или щелочей)
СТЕРИЛИЗАЦИЯ
(автоклавирование)
medcollege.ru
ОХЛАЖДЕНИЕ (до 50 - 60°C)
+ РАЗЛИВ
11

12.

Типы жидких питательных сред
ОБЩЕПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ:
- например, бульон (мясной или
сахарный) подходит для большинства
микроорганизмов.
СПЕЦИАЛЬНЫЕ СРЕДЫ:
Селективные среды: Для изоляции
определенных
микроорганизмов
(например,
среда
МакКонки
для
грамотрицательных бактерий).
Дифференциальные
среды:
Позволяют различать микроорганизмы
по их физиологическим свойствам
(например, среда Эндо).
рис. Бульон Макконки
рис. Питательный бульон
medcollege.ru
12

13.

Приготовление полужидких питательных сред
рис. Тиогликолевая среда
рис. Среда Эймса
ПОЛУЖИДКИЕ СРЕДЫ используются:
для хранения культур
для накопления биомассы
(например, анаэробов)
Полужидкая среда содержит агар в
концентрации 0,5% или менее, а рост
бактерий проявляется в виде линии в
среде.
ПРИМЕРЫ полужидких питательных сред:
тиогликолевая среда с агаром, МПЖ,
транспортная среда Эймса.
medcollege.ru
13

14.

Приготовление полужидких питательных сред
Для приготовления МПЖ:
1) к МПБ добавляют 10-15%
нарезанного желатина
мелко
2) После
его
набухания
смесь
нагревают до полного расплавления,
устанавливают рН на уровне 7,0-7,1 и
стерилизуют
текучим
паром
в
течение трех дней по 30 минут.
рис. Действие уже приготовленной среды МПЖ
medcollege.ru
14

15.

Приготовление полужидких питательных сред
СВЁРНУТАЯ СЫВОРОТКА:
Сыворотку разливают по пробиркам (4-5 мл) и в
наклонном положении свертывают в аппарате Коха.
Свертывание проводят при 80°
в течение полутора часов.
Среду
контролируют
на
стерильность в термостате в
течение суток.
рис. Среда Леффлера
Также полужидкий питательный агар можно приготовить
из сухого препарата промышленного производства.
medcollege.ru
15

16.

Приготовление плотных питательных сред
ПЛОТНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ используются
для
изучения
морфологии
колоний,
диагностических целей, для выделения чистых
культур микроорганизмов, для их хранения, а
также для количественного учета бактерий,
определения их антагонистических свойств.
рис. Агар МакКонки
рис. Шоколадный агар
ПРИМЕРЫ плотных питательных сред – Агар
МакКонки, Шоколадный агар, Среда Мюллера
с лошадиной кровью.
medcollege.ru
16

17.

Приготовление плотных питательных сред
ВЗВЕШИВАНИЕ
РАЗЛИВ
(по 15-20 мл)
СТЕРИЛИЗАЦИЯ
РАСТВОРЕНИЕ
КИПЯЧЕНИЕ
(на водяной бане,
2-3 минуты)
ОСВЕТЛЕНИЕ
(если в процессе приготовления
среда становится мутной)
УСТАНОВЛЕНИЕ pH
ФИЛЬТРОВАНИЕ (через
ватно-марлевый фильтр)
КОНТРОЛЬ
medcollege.ru
17

18.

Приготовление плотных питательных сред
МПА готовят путем добавления 2-3% агар-агара к МПБ. Смесь расплавляют на водяной бане,
фильтруют, разливают по колбам и пробиркам, стерилизуют в автоклаве.
Для приготовления «скошенного» МПА расплавленную среду разливают до ¼ высоты
пробирки и помещают на наклонную плоскость.
medcollege.ru
18

19.

Посев на питательные среды
Посев мочи на плотную питательную среду
Посев штрихом на питательные среды (все
кроме мочи)
Зоной сброса является вертикальный штрих вдоль
всей чашки.
Разнос колоний происходит штрихами от края к
краю чашки, проходя через зону сброса
Зона сброса вдоль края.
Поворачиваем на 90 градусов делам зигзагом
приблизительно 8 движений
Повторяем еще раз тоже самое
Повернув 3 раз на 90 градусов делаем 4
штриха для выделения чистых колоний

20.

Государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение
Департамента здравоохранения города Москвы
«Медицинский колледж №1»
(ГБПОУ ДЗМ «МК №1»)
Техника посевов шпателем, петлёй,
тампоном на чашке Петри.
Приготовление жидких, полужидких и
плотных питательных сред
Подготовили:
Соловьева
Виталина,
Нистратова
Софья, Едунова Екатерина, Семенова Алёна, Качурка
Полина, Дробикова Елизавета, Кривошей Полина
Группа: Л111-3
Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика
Москва
2024