Техники посева микроорганизмов. Лекция 14

1.

Техники посева
микроорганизмов
Лекция 14
2019-2020 уч.год
Преподаватель Скворцова И.Е.

2.

Бактериологический метод
Состоит из:
• 1. посева материала на
искусственные питательные среды
• 2. выделения чистых культур ПБА
• 3. их последующей идентификации

3.

Техника посева зависит от: характера засеваемого материала,
консистенции питательной среды,
цели исследования

4.

Для проведения посева
необходимы
Подлежащий исследованию материал
Питательные среды
Инструменты для посева
Металлический поддон для переноса
засеянных чашек
• Металлические коробки для переноса
пробирок
• Емкость с крышкой для сброса
инфицированного материала
• Спиртовка

5.

Инструменты для
осуществления посевов:
• Бактериологическая петля,
• Шпатели стеклянные,
металлические
• Шпатель Дригальского,
• Пастеровские или градуированные
пипетки
• специальный ватный тампон

6.

7.

• Жидкий материал берут или петлей (в
кольце должно быть «зеркало») или
пипеткой для большого или точно
отмеряемого объема
• Плотный материал засевают чаще
петлей

8.

Техника посевов на плотные и
жидкие питательные среды
• При посеве в жидкую питательную
среду петлю с находящимся на ней
материалом погружают в среду. Если
материал с петли не снимается, его
растирают на стенке
пробирки/сосуда, а затем смывают
жидкой средой. Материал,
набираемый в пастеровскую или
градуированную пипетку, вливают в
питательную среду

9.

• При посеве на «косяк» пробирку
берут в левую/нерабочую руку
между I и II пальцами, чтобы
основание пробирки находилось
на поверхности кисти руки и
посев осуществлялся под
визуальным контролем. Пробку
из пробирки вынимают
правой/рабочей рукой IV и V
пальцами, не касаясь той части,
которая входит внутрь пробирки

10.

• Остальными тремя пальцами
держат бактериологическую петлю.
После вынимания пробки
открытую пробирку держат в
наклонном положении, чтобы не
попала посторонняя микрофлора из
воздуха.

11.

• При посеве «на косяк» петлю с
пересеваемым материалом вводят
в пробирку до дна, опускают
плашмя на поверхность
питательной среды и скользящими
движениями наносят штрихи
снизу вверх «змейкой»

12.

• При посеве на плотную
питательную среду из пробирки в
чашку Петри пробирку фиксируют
II, III и V пальцами
левой/нерабочей руки, а крышку
чашки Петри приоткрывают I и IV
пальцами левой руки так, чтобы
проходила петля или шпатель.
Исследуемый материал, взятый
петлей из пробирки втирают в
поверхность ПС у края чашки.
Затем петлю прожигают

13.

Техника посева по Дригальскому. Посев
осуществляют стерильным шпателем на
три чашки Петри с плотной
питательной средой. На середину
первой чашки пипеткой или
бактериологической петлей вносят
исследуемый материал, который
распределяют по поверхности чашки
круговыми движениями, вращая
приоткрытую чашку левой рукой. Не
стерилизуя, шпатель переносят во
вторую, а затем в третью чашку,
проводя распределение истощенного
материала по их поверхности

14.

15.

Метод Коха (количественный метод).
Готовят 10-кратные разведения
исследуемого материала в стерильном
физиологическом растворе. Отбирают по
1 мл из каждого разведения, которые
вносят в пробирки с расплавленным и
охлажденным до 45 °С агаром. После
перемешивания содержимое пробирки
выливают в стерильную чашку Петри.

16.

17.

Техника посева петлей
секторами. Чашку Петри делят
на 4-5 радиальных секторов.
Взяв материал стерильной
петлей, делают посев одной
петлей на всех секторах.

18.

19.

Техника посева по Голду
Исследуемый материал отбирают петлей диаметром
2 мм и засевают на чашку Петри с питательной
средой. Для этого чашку Петри со стороны дна
предварительно расчерчивают на четыре квадрата.
В первом квадрате делают посев исследуемого
материала 20-30 штрихами. Петлю прожигают и
проводят четыре перпендикулярных штриха из
материала первого квадрата во второй квадрат.
Петлю снова прожигают и проводят четыре
перпендикулярных штриха из второго квадрата в
третий, захватывая последовательно материал от
первого, затем второго штриха, далее - третьего и
четвертого штрихов. Посевы помещают в термостат
с температурой 37 °С на 24 ч.

20.

21.

Техника посева тампоном. Проводят
тампоном по диагонали дорожку, затем
петлей через дорожку делают засев по
обе стороны от нее. Другой способ:
тампон вносят к краю агара и
круговыми движениями втирают
материал с тампона.

22.

23.

Пересев колонии с чашки Петри в пробирку
со скошенным агаром. Приподнимают
крышку чашки Петри. Стерильной петлей
отбирают колонию. Чашку закрывают. В
левую руку берут пробирку со скошенным
агаром, над пламенем открывают правой
рукой пробку, прижимая ее мизинцем к
ладони, вводят петлю в пробирку до дна в
конденсационную воду, прикасаются к
поверхности агара и делают посев штрихом
по скошенной части агара. Края пробирки
обжигают, закрывают пробкой над пламенем
горелки.

24.

25.

Посев по методу Щукевича (для
выделения подвижных бактерий).
Петлю с отобранным материалом
вносят в пробирку со скошенным
агаром, не касаясь стекла и агара, в
конденсационную воду, не
распределяя материал по скосу агара.
Пробирки помещают в термостат в
вертикальном положении.
Подвижные бактерии будут
распространяться вверх по влажной
поверхности скоса агара.

26.

Посев в столбик полужидкого агара.
Стерильной петлей забирают
колонию, в левую руку берут
пробирку со столбиком среды, над
пламенем горелки открывают
мизинцем правой руки пробку и
производят укол петлей в среду с
поверхности до дна пробирки.
Пробирку закрывают пробкой над
пламенем горелки.

27.

28.

Посев в жидкую среду. Петлю с
инокулятом бактериальной культуры
слегка погружают в жидкость и
растирают посевной материал по
стенке пробирки, после чего
смывают его средой. Петлю
извлекают, пробирку закрывают,
проведя через огонь пробку, петлю
прокаливают. Выполненные посевы
помещают в термостат с
необходимой для культивирования
температурой.

29.

Литература
1.
Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б.,
Бельская Н.А. Микробиология.- М.:
Альянс, 2012 – 512с.
2.
Микробиология, вирусология:
руководство к практическим занятиям
[Электронный ресурс] : учеб. пособие /
Зверев В.В. [и др.]; под ред. В.В. Зверева,
М.Н. Бойченко - М. : ГЭОТАР-Медиа,
2015.http://www.studmedlib.ru/book/ISBN978597
0434956.html

30.

3. Сбойчаков В.Б. Микробиология с
основами эпидемиологии и методами
микробиологических исследований:
учебник для средних медицинских
учебных заведений. СПб.: СпецЛит,2007.
- 592с.
4. Общая и санитарная микробиология с
техникой микробиологических
исследований: учебное пособие /под ред.
А.С. Лабинской, Л.П. Блинковой, А.С.
Ещиной.-М.: Медицина, 2004.-576с.

31.

Спасибо, что досмотрели!