3.00M

Категория:

Медицина

Похожие презентации:

Энтеробактерии. Эшерихии, шигеллы, сальмонеллы

Внедрение в работу лабораторий молекулярно-генетических методов

Диареегенные эшерихии

Эшерихиозы

Общая характеристика кишечных инфекций. Источник возбудителя

Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых энтеробактериями

Возбудители кишечных инфекций

Эшерихиозы. E. coli

Общая характеристика кишечных инфекций

Esherikhii

2.

Род Escherichia
[Bergey's Manual…,1994]
E.coli
E.blattae
E.fergusonii
E.hermanii
E.vulneris

3.

Основные биохимические
свойства E.coli
Глюкоза (газ)
+
Лактоза
+
Сахароза
V
Продукция сероводорода
-
Цитрат Симонса
-
Фенилаланин
-
Индол
V

4.

О-антиген
Термостабилен;
Липополисахарид;
Более 150 разновидностей (О1, О2, …);
Факторный состав:
‘а’ - общий фактор;
‘в’, ‘с’… - дополнительные
(О111 ав, O111ас, О128а, О128 ав, 128ас)

5.

Н - антиген
Белковый;
Термолабильный жгутиковый антиген;
Более 50 разновидностей (Н1, Н2…);
Свежевыделенные штаммы обычно
слабо подвижны и обладают малым
количеством Н-антигена.

К - антигены
К
А
Термостабилен (121 оС, 2 часа).
В
Термолабилен (100 оС, 1 час).
L
Термолабилен (100 оС, 1 час).
В настоящее время для обозначения всех типов
К- антигена используется единая сквозная нумерация.
Описано более 100 разновидностей (К1, К2…).

7.

Классификация E.coli
E .c o li
У с ло в но -па то ге нны е
Д иа р е е ге нны е
Э П К П (E P E C )
Э нте ропа тоге нны е
кишечны е пал очки
Э Г К П (E H E C )
Э н те роге м орра гиче с кие
кишечны е пал очки
Э И К П (E IE C )
Э нтероинвазивны е
кишечны е пал очки
Э А К П (E A E C )
Энт ероагрегат ивны е
кишечны е пал очки
Э Т К П (E T E C )
Э н те ротокс иге н н ы е
кишечны е пал очки
Д А К П (D A E C )
Д и ф ф у зн о а д г е зи в н ы е
кишечны е пал очки

8.

Методы дифференциации
кишечных палочек
Выявление факторов вирулентности:
адгезии к клеткам, например НЕр-2;
продукции токсинов в изолированной петле
кишечника кролика, на культуре клеток,
иммунологическими методами;
выявление инвазивности на культуре клеток
Детекция генов вирулентности с помощью
генных зондов, ПЦР и др.
Определение антигенных маркеров путем
серотипирования

9.

10.

Выявление токсинов
E.coli
Реакция латекс-агглютинации
Иммуно-ферментный метод
Иммунохроматография

11.

ЭПКП
026:NM; 026:H11; 055:NM;
055:H6; 086:NM; 086:H2;
086:H34; 0111ab:NM;
0111ab:H2; 0111ab:H12;
0111ab:H21; 0114:H2; 0119:H6;
0125ac:H21; 0127:NM; 0127:H6;
0127:H9; 0127:H21; 0128ab:H2;
0142:H6; 0158:H23
Главные факторы вирулентности - факторы адгезии:
прикрепление к кишечному эпителию и повреждение его

12.

Пили E.coli

13.

ЭПКП. Стадии патогенеза
1.
2.
3.
Адгезия с помощью пилей
IV типа
Секреция бактериальных
белков EspA, EspB, Esp D
(механизм действия не
ясен).
Тесное прикрепление к
мембране с помощью Tirрецептора, внедряющегося в мембрану клетки
хозяина

14.

ЭТКП
Главные факторы
вирулентности:
Термолабильный энтеротоксин
(LT)
Термостабильный энтеротоксин
(ST)
Восприимчивый контингент:
Дети
Взрослые
Клинические проявления:
Обильный жидкий стул
Тошнота, рвота
Судороги
Обезвоживание
Основные серовары
06:H16; 08:NM; 08:H9;
011:H27; 015:HII; 020:NM;
025:NM; 025:H42; 027:H7;
027:H20; 063:H12; 078:HII;
078:H12; 085:H7;
0114:H21; 0115:H21;
0126:H9; 0128ac:H7;
0128ac:H12; 0128ac:H21;
0148:H28; 0149:H4;
0159:H4; 0159:H20;
0166:H27; 0167:H5

15.

Энтеротоксины E.coli
Термостабильность
Химическое
строение
Механизм действия
Генетическая
детерминанта
LT
ST
Нет
Да
Белок
Комплекс
полипептидов
Накопление
цАМФ
Накопление
цГМФ
Синтез, как правило,
обусловлен плазмидой

16.

ЭИКП
Главный фактор
вирулентности
Основные серовары
Внутриклеточная инвазия в
028ac:NM; 029:NM;
энтероциты
0112ac:NM; 0115:NM;
Восприимчивый контингент
0124:NM; 0124:H7;
Дети
0124:H30; 0135:NM;
Взрослые
0136:NM; 0143:NM;
Клинические проявления
0144:NM; 0152:NM;
Кровь, слизь, лейкоциты в
стуле
0164:NM; 0167:NM

17.

ЭГКП
Основные серовары
Главный фактор
вирулентности
Вероцитотоксин (Шига
подобный токсин)
Восприимчивый контингент
Дети
Взрослые
Клинические проявления
стул в виде малинового
желе
геморрагическая пурпура
О157:H7
01:NM; 02:H5; 02:H7; 04:NM; 04:H10;
05:NM; 05:H16; 06:HI; 018:NM; 018:H7;
025:NM; 026:NM; 026:HII; 026:H32; 038:H21;
039:H4; 045:H2; 050:H7; 055:H7; 055:HIO;
082:H8; 084:H2; 091:NM; 091:H21; 0103:H2;
0111:NM; 0111:H8; 0111:H30; 0111:H34;
0113:H7; 0113:H21; 0114:H48; 0115:HIO;
0117:H4; 0118:H12; 0118:H30; 0121:NM;
0121:H19; 0125:NM; 0125:H8; 0126:NM;
0126:H8; 0128:NM; 0128:H2; 0128:H8;
0128:H12; 0128:H25; 0145:NM; 0145:H25;
0146:H21; 0153:H25; 0157:NM;; 0163:H19;
0165:NM; 0165:H19; 0165:H25

18.

Бактерии, продуцирующие
Шигаподобные токсины
S.dysenteriae 1 [Stx]
E.coli (более 60 сероваров из более
чем 32 серогрупп) [Stx1 или/и Stx2]
Citrobacter freundii [Stx2]
Aeromonas hydrophila, A.caviae [Stx1]
Enterobacter cloacae [ген stx2]

19.

20.

ЭГКП. Формы инфекционного
процесса.
Носительство
Неосложненная диарея
Геморрагический колит
Гемолитико-уремический синдром
Тромботическая тромбоцитопеническая
пурпура

21.

МакКонки агар с сорбитом
SMAС
CR-SMAС
SMAС
BCIG
Пептон
20,0
20,0
20,0
Сорбит
10,0
10,0
10,0
Рамноза
5,0
Соли желчных кислот №3
1,5
1,5
1,5
Натрия хлорид
5,0
5,0
5,0
Нейтральный красный
0,03
0,03
0,03
Кристал-виолет
0,001
0,001
0,001
5-bromo-4-chloro-3-indolyl- -Dglucuronide (BCIG)
0,1
Агар
pH
15,0
15,0
15,0
7.1 ± 0.2
7.1 ± 0.2
7.1 ± 0.2

22.

Токсигенность
E.coli O157:H7
Иммунохроматография
Иммуноферментный
анализ
Латекс-агглютинация

23.

Серотипирование
E.coli O157:H7
Латекс-агглютинация
Агглютинация на стекле

24.

ЭАКП
• Главные факторы
вирулентности:
– аггрегация и адгезия на
поверхности слизистой
кишечника,
– продукция цитотоксина
• Восприимчивый контингент:
– Дети
– Взрослые
• Клинические проявления:
– секреторная диарея,
иногда с кровью
Основные серовары
03:Н2; О15:Н18; О44:Н18;
086:NM; О77:Н18;
О111:Н21; О127:Н2;
О?(неизвестен):Н10

25.

26.

Выделение и идентификация
диареегенных эшерихий
Выделение
ЭНДО
Идентификация
ЭМС
Реакция агглютинации
с ОКА сывороткой
Lac +
Lac ТСА,
среда Клиглера
среда Рэсселя
…
Реакция агглютинации
с ОКА сывороткой
(8-10 колоний)
-
Патогенные
E.coli
НЕ ОБНАРУЖЕНЫ
+
Реакция агглютинации
с сыворотками
ОКВ, ОКС, ОКД, ОКЕ
+
-
Патогенные
E.coli
НЕ ОБНАРУЖЕНЫ
+
Другое
МПА
Эшерихии?
Определение О и К
антигенов в реакции
агглютинации
Биохимическая
идентификация
Серологическая идентификация
Посев в
пробирки
Крейджи

27.

Эшерихиозные сыворотки и
имуноглобулины
Сыворотки
ОК-поливалентные
ОКА, ОКВ, ОКС, ОКД, ОКЕ
Сыворотки
Н-поливалентные
НА, НВ, НС, НД
Сыворотки ОК-типовые
О1, О2, О6, O18, O20, O25, O26, O28ас, O29, O32, O33,
O44, O55, O75, O85, O86, O111ab, O114, O115, O119,
O124, O125, O126, O127, O128, O136, O142, O143, O144,
O152, O159, O164, «408»
Сыворотки
О-групповые и факторные
О1, О2, О4, О5, О6, О7, О8, О9, О11, О18авс, О18в, О18с,
О20, О22, О25, О26, О28, О32, О33, О44, О55, О75, О85,
О86, О111, О112авс, О112в, О112с, О114, О119, О124,
О125авс, О125в, О125с,О126, О127, О128, О142, О143,
О144, О157, О164
Иммуноглобулины
ОК-типовые
О1:К1; О6:К15; О20:К84; О25:К11; О26:К60; О28:К3; О32:К;
О44:К74; О55:К59; О75:К; О85:К; О86:К61; О111:К58;
О112ас:К66; О112ав:К68; О114:К90; О119:К69; О124:К72;
О125: К70; О126:К71; О127:К63; О128:К67; О142:К86;
О143:К; О144:К; О164:К

28.

Серотипирование
эшерихий
С ер оти пи р овани е в
р е а кц и и а ггл ю т и н а ц и и
О К и м м ун о гл о б ул и н ы и
ад сор би р ованны е сы вор отки
Р е а кц и я а ггл ю т и н а ц и и
на стекл е
Н еадсор би р ованны е
сы вор отки
К-антиген
с нативной
агаровой
культурой
Р е а кц и я а ггл ю т и н а ц и и
на стекл е
О-антиген
с гретой
культурой
1 час 100 град.
Р азвер нутая р еакц и я
а ггл ю т и н а ц и и
(д о т и т р а с ы в о р о т к и )
Н-антиген
с культурой с
глицеринового
агара

29.

30.

Пробирка по Крейджи
Инокулят
Полужидкая питательная среда
Стеклянная трубка

31.

Пробирка по Крейджи
Инокулят
Полужидкая питательная среда
Стеклянная трубка

32.

Определение Н-антигенов
эшерихий
П а с с а ж и н а п о л уж и д к о м а га р е
в пр оби р ках К р ей д ж и
П о с е в н а гл и ц е р и н о в ы й а га р
П о с е в н а п о л уж и д к и й а га р с
Н - сы вор откам и и без ни х
С ус п е н д и р о в а н и е в ф и з .р -р е
У ч ет р еакц и и и м м оби л и зац и и
П остановка Р А на стекл е

33.

Индикация
диареегенных эшерихий

34.

Индикация
диареегенных эшерихий

35.

Выделение ЭПКП, ЭИКП,
ЭТКП
25 г продукта гомогенизировать
в 225 мл Brain heart infusion broth
10 мин при комнатной температуре, периодически встряхивая
Дать отстояться 10 мин
Надосадочную жидкость перенести
в стерильный контейнер
Инкубировать 3 часа при 35 0С
Долить равное количество
Tryptone phosphate broth двойной концентрации
Инкубировать 20 часа при 44 0С
Высев на MacConkey agar и eosin-methylene blue agar

36.

Идентификация
По биохимическим свойствам (20 колоний: 10 Lac+ и 10 Lac-) –
принадлежность к E.coli
ЭПКП
– Фенотипически
• Прикрепление и повреждение тканей
• Характер адгезии
• Отсутствие Vero-токсина
– Генотипически (гибридизация, PCR)
• AEF-плазмида
• eae -ген
ЭТКП
– Фенотипически
• LT – культура клеток Y-1, ST – тест на новорожденных мышах
• Латекс агглютинация, ELISA
– Генотипически – гибридизационный анализ
ЭИКП
– Фенотипически
• Керато-конъюнктивальная проба на морских свинках
• Тест на культуре клеток HeLa
– Генотипически – выявление гена invA

37.

Идентификация
• По биохимическим свойствам –
принадлежность к E.coli
• По антигенным свойствам
– Реакция агглютинации на стекле
– Реакция латекс-агглютинации
• По токсигенности
– ELISA
• По генетическим признакам
– Гибридизационный анализ
– Мульплексная PCR

English Русский Правила