Лекция № 6
План лекции
АНТИГЕНЫ АНТИТЕЛА
Антиген: определение
Свойства антигенов:
Свойства антигенов
Свойства антигенов
Принцип строения антигенов
Эпитоп
Количественный состав эпитопа
ВАЛЕНТНОСТЬ АНТИГЕНА
Антигены бактерий
АНТИТЕЛА (ИММУНОГЛОБУЛИНЫ – Ig)
Свойства антител
Классификация антител по происхождению:
По специфичности противомикробные антитела делят на:
Классы (изотипы) иммуноглобулинов
Структура иммуноглобулина
Структура иммуноглобулина
Структура иммуноглобулина
Структура иммуноглобулина
Структура иммуноглобулина
Морфофункциональные особенности иммуноглобулинов
Антигенность антител
ВАЛЕНТНОСТЬ АНТИТЕЛ
Взаимодействие антигена с антителом
Взаимодействие антигена с антителом
Свойства антител
ОСНОВЫ СЕРОЛОГИИ
Серология (от лат. serum – сыворотка)
Серологические реакции: характеристика
Серологические реакции: цели применения
Серологические реакции: цели применения
Серологические реакции: цели применения
Серологические реакции: классификация
ПРОСТЫЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ: сущность
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ: внешние проявления
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ: способы постановки
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ: способы постановки
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ: способы постановки
Реакция гемагглютинации
РНГА (РПГА)
РНГА (РПГА): внешние проявления
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: сущность
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: применение
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: способы постановки
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: по Асколи
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: в геле
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: простая радиальная иммунодиффузия по Манчини
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: двойная, или встречная, иммунодиффузия по Оухтерлони
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: Реакция нейтрализации токсина антитоксином (РН)
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: Реакция нейтрализации токсина антитоксином
Реакция нейтрализации токсина антитоксином In vivo:
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: иммуноэлектрофорез
НЕПОЛНЫЕ АНТИТЕЛА
Выявление неполных антител (диагностика резус-конфликта)
СЛОЖНЫЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С УЧАСТИЕМ КОМПЛЕМЕНТА
реакции иммунного лизиса:
РЕАКЦИЯ ГЕМОЛИЗА
Реакция гемолиза: «+» - гемолиз (лаковая кровь) «-» - задержка гемолиза
Реакция связывания комплемента
Реакция связывания комплемента
Реакция связывания комплемента
Схема РСК
Серологические реакции с использованием меченых антител или антигенов (общая характеристика)
Современные серологические реакции с меткой
Современные серологические реакции с меткой
Современные серологические реакции с меткой
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ, реакция Кунса)
Люминесцентный микроскоп
Иммуноферментный анализ - ИФА
Иммуноферментный анализ
Иммуноферментный анализ
Иммуноферментный анализ
Иммуноферментный анализ
Радиоиммунологический анализ
Контрольные вопросы
5.76M
Категория: МедицинаМедицина

АГ,АТ_Серология_СФ_23

1. Лекция № 6

ФГБОУ ВО КемГМУ Минздрава России
Кафедра микробиологии и вирусологии
Лекция № 6
Лектор: заведующая кафедрой, профессор
Леванова Людмила Александровна
2023 г.

2. План лекции

Общее представление и свойства антител и
антигенов.
Антигены бактерий.
Молекулярная структура антите.
Серологические реакции, общее представление.
Простые (двухкомпонентные) серологисеские
реакции.
Сложные (многокомпонентные) серологические
реакции.

3. АНТИГЕНЫ АНТИТЕЛА

4. Антиген: определение

Вещества или тела, несущие на себе
отпечаток чужеродной генетической
информации
т.е. молекула (вещество), распознаваемое
иммунной системой в контексте
«свой/чужой»

5. Свойства антигенов:

Антигенность
(чужеродность)
или
антигенное действие – способность
индуцировать развитие иммунного ответа;
Вещество должно отличаться от тканей
хозяина, при чем антигенные различия
обратно
пропорциональны
степени
эволюционного родства.

6. Свойства антигенов

Иммунногенность – свойство антигена,
обусловливающее
«быть
замеченным»
иммунной системой с последующим
иммуногенезом.

7. Свойства антигенов

Специфичность или антигенная функция –
способность антигена вызывать реакцию,
эффекторы которой избирательно нацелены
против него и не действуют на другие,
неродственные антигены.
Антигенные
особенности,
благодаря
которым антигены отличаются друг от
друга.

8. Принцип строения антигенов

Ag
Несущая
часть
Иммуногенность
Индукция
иммунного
ответа
Эпитоп
Антигенность
Взаимодействие
c Ig и TcR

9. Эпитоп

Определение
участок молекулы антигена
специфического состава и конфигурации
Синонимы:
«антигенная детерминанта»
«детерминантная группа антигена»
Количество эпитопов прямо
пропорционально молекулярной массе
белка.

10. Количественный состав эпитопа

5-6 аминокислотных остатков – для
белков
5-6 липополисахаридных остатков –
для ЛПС (липополисахаридов)

11. ВАЛЕНТНОСТЬ АНТИГЕНА

Количество
идентичных
эпитопов

12. Антигены бактерий

Классификация по специфичности:
Групповые (общие у нескольких видов)
Видовые (общие для вида)
Типовые (общие для одного серовара)
Перекрестно-реагирующие
(гетероантигены) (общие с антигенами
тканей и органов человека)

13.

14.

O-Ag Г+→ тейхоевые кислоты

15.

16. АНТИТЕЛА (ИММУНОГЛОБУЛИНЫ – Ig)

γ-глобулины
сыворотки крови,
способные
специфически
связываться с
антигеном

17. Свойства антител

Специфичность – способность вступать во
взаимодействие с антигеном, аналогичным
тому, который индуцировал их образование;
Гетерогенность – по физико-химическому
строению, специфичности, генетической
детерминированности
образования
(происхождению);

18. Классификация антител по происхождению:

Нормальные;
Инфекционные;
Постинфекционные;
Поствакцинальные.

19. По специфичности противомикробные антитела делят на:

Группоспецифические;
Видоспецифические;
Вариантоспецифические;
Перекрестнореагарующие.

20. Классы (изотипы) иммуноглобулинов

Ig M - 8% -первичный иммунный ответ.
Ig G - 80% - проходит через плаценту;
вторичный иммунный ответ.
Ig A - 12% - местный иммунитет слизистых
оболочек.
Ig E - 0,003% - участвует в развитии ГНТ
(анафилаксия).
Ig D - 0,3% - основной рецептор для АГ на
поверхности зрелых В-клеток.

21. Структура иммуноглобулина

Молекулы иммуноглобулинов всех пяти классов состоят
из полипептидных цепей:
двух одинаковых тяжелых цепей Н (heavy) и
двух одинаковых легких цепей — L (light),
соединенных
между
собой
дисульфидными
мостиками.
Тяжелые цепи (heavy chain) определяют различия
между классами иммуноглобулинов, поэтому разные
типы тяжёлых цепей обозначают греческими буквами
соответственно латинской аббревиатуре класса: для IgM
– μ (мю), для IgG – γ (гамма), для IgA – α (альфа), для
IgE – ε (эпсилон), для IgD – δ (дельта).
Легкие цепи (light chain) всех пяти классов являются
общими и бывают двух типов: κ (каппа)
и λ (лямбда); Функциональные различия между
иммуноглобулинами с лёгкими κ- или λ-цепями не
выявлены.

22. Структура иммуноглобулина

NH2
N2H
Как в Н-, так и в L-цепях
имеется:
вариабельная — V область, в
которой
последовательность
аминокислот непостоянна, и
константная — С область с
постоянным
набором
аминокислот.
В легких и тяжелых цепях
различают NH2- и СООНконцевые группы.
НООС
СООН

23. Структура иммуноглобулина

Фрагменты молекулы
иммуноглобулина
Путём протеолитического расщепления
папаином молекулы иммуноглобулина с
последующей
ионообменной
хроматографией можно получить 3
фрагмента:
1 Fс-фрагмент и 2 Fab-фрагмента.
Fab-фрагменты (Fragment, antigen
binding
антигенсвязывающие
фрагменты) - 2 одинаковых фрагмента,
сохраняющих способность связывать
антиген.

24. Структура иммуноглобулина

Fc-фрагмент (Fragment crystallizable кристаллизующийся фрагмент) - непарный,
легко
кристаллизуется.
Fс-фрагменты
обеспечивают
взаимодействие
самих
антител и комплексов антиген-антитело с
системой
комплемента,
фагоцитами,
эозинофилами,
базофилами,
тучными
клетками.
Шарнирная область, соединяющая все з
фрагмента; необходима для изменения
конформации иммуноглобулина, в ней есть
участки связывания белков системы
комплемента.

25. Структура иммуноглобулина

Вторичная структура полипептидных цепей представлена
доменами.
Домен - свернутый в глобулу участок полипептидной цепи,
примерно 110 аминокислотных остатков,
стабилизирован внутренней дисульфидной связью;
домены соединены друг с другом линейными фрагментами.
в Н-цепи их по 4 (VH, CH1, CH2, CH3) а в L-цепи — по 2
(VL, CL).
V-домены обеих цепей имеют сильно варьирующий
аминокислотный состав (отсюда и их обозначение Variable), что позволяет им связывать разные антигены.

26.

27. Морфофункциональные особенности иммуноглобулинов

J-цепь
Объединяет мономеры в единую полимерную молекулу
IgM и IgAS
S-белок
Защищает IgAs от ферментативного расщепления в секретах слизистых оболочек
M-белок
Фиксация рецепторного Ig на мембране В-лимфоцита

28. Антигенность антител

ЭПИТОПЫ
ХАРАКТЕРИСТИКА
Видовые
H и L цепи
Характерны для Ig всех особей данного вида
определяют видовую принадлежность антител
Изотипические
H цепи
Групповые эпитопы определяют принадлежность Ig
к определенному классу и подклассу
Аллотипические
H и L цепи
Индивидуальные эпитопы (определяют
принадлежность Ig конкретному организму)
ИдиоОтображают особенности строения паратопа
молекулы Ig
типические
H и L цепи
Fab-фрагменты

29. ВАЛЕНТНОСТЬ АНТИТЕЛ

Валентность антитела — число активных (Агсвязывающих) центров антитела.
Молекула полного Ig как минимум двухвалентна.
Такие антитела известны как полные антитела.
Полные антитела (в частности, IgM, lgG)
вызывают агрегацию Аг, видимую невооружённым
глазом (например, РА бактерий).
Мономеры с меньшей валентностью
(одновалентные) — неполные антитела.

30. Взаимодействие антигена с антителом

Связывание
эпитопа
(детерминанты)
антигена с активным центром Fabфрагмента (паратопом) антител обусловлено
ван-дер-ваальсовыми силами, водородными
связями и гидрофобным взаимодействием.
Прочность и количество связавшегося
антигена антителами зависят от аффинности, авидности антител и их валентности.

31. Взаимодействие антигена с антителом

32. Свойства антител

АФФИННОСТЬ –
прочность связи конкретной
паратоп/эпитоп;
наибольшая у
моноклональных антител,
IgG.
АВИДНОСТЬ –
прочность связи молекулы
антитела с молекулой
антигена в целом;
наибольшая у IgM

33. ОСНОВЫ СЕРОЛОГИИ

лат. serum – сыворотка,
logos - учение

34. Серология (от лат. serum – сыворотка)

► Раздел иммунологии, изучающий
закономерности взаимодействия Аг и
Ат сыворотки крови.
► Серологические реакции –
реакции Аг+Ат, протекающие in
vitro.

35. Серологические реакции: характеристика

Взаимодействие Аг и Ат строго специфично;
Проходят при эквивалентных соотношениях Аг и Ат;
Имеют двухфазный характер:
а) специфическое взаимодействие – фаза «невидимая»;
б) образование видимых комплексов (для этого
добавляют физ.раствор);
Проходят по типу физико-химической реакции в
коллоидной системе;
Выделяется
небольшое
количество
тепла
(слабоэкзотермичны).

36.

37. Серологические реакции: цели применения

Серологическая
идентификация

определение вида неизвестного Аг при
помощи известных Ат:
а) неизвестные Аг – это микроорганизмы,
токсины, белки крови, клетки разных органов
и
тканей
другого
вида,
клетки
трансплантантов;
б) известные Ат – это стандартные препараты –
иммунные
диагностические
сыворотки,
специфичные определенному (искомому) Аг.

38. Серологические реакции: цели применения

Серологическая
диагностика

определение
неизвестных
Ат
в
сыворотке (или других биологических
жидкостях) крови больного с помощью
известного Аг (диагностикума):
а) неизвестные Ат – это искомые Ат
сыворотки крови людей (больных,
переболевших,
носителей,
вакцинированных);

39. Серологические реакции: цели применения

диагностикум

это
стандартные
иммунобиологические препараты, которые
получают
из
чистых
культур
микроорганизмов определенных видов или их
Аг.
►Микроорганизмы
выращивают,
затем
инактивируют, стандартизируют (количество
микробов в единице объема);
►Инактивируют
нагреванием,
обработкой
формалином, спиртом, ультразвуком и т.д.
(диагностикум теряет патогенность, но
сохраняет Аг свойства).
б)

40. Серологические реакции: классификация

1. Простые (2-х компонентные: Ag + Ig)
РА (с корпускулярным антигеном)
РП (с растворимым антигеном)
2. Сложные (3-х компонентные):
(Ag + Ig + C) – РСК.
3. С использованием метки: РИФ, ИФА, РИА,
ИЭМ.

41. ПРОСТЫЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ

2-х компонентные: Ag + Ат

42. РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ: сущность

Реакция
агглютинации
(agglutinatio
—склеивание)
проявляется в склеивании и выпадении в осадок
корпускулярных антигенов: бактерий, эритроцитов, а также
химических частиц с адсорбированными на них антигенами
под влиянием антител в среде с електролитом.
Реакция протекает в две фазы: в первой фазе проходит
специфическая адсорбция антител (агглютининов) на
поверхности клетки, несущей соответствующие антигены
(агглютиногены), во второй —образование агрегата
(агглютината) и выпадение его в осадок, причем этот
процесс происходит только в присутствии электролита
(раствор натрия хлорида).

43. РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ: внешние проявления

МЕЛКОДИСПЕРСНАЯ АГГЛЮТИНАЦИЯ –
О – агглютинация (иногда видимая только в
агглютиноскоп или даже микроскоп –
реакция микроагглютинации)
КРУПНОХЛОПЧАТАЯ АГГЛЮТИНАЦИЯ –
Н – агглютинация (при агглютинации
жгутиконосных бактерий)

44. РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ: способы постановки

1. Прямая реакция агглютинации:
- пластинчатая (ориентировочная)
- объемная (развернутая)
2. Непрямая реакция агглютинации:
эритроциты – гемагглютинация (РНГА,
РОНГА);
частицы латекса - латекс-агглютинация;
стафилококки – коагглютинация;

45. РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ: способы постановки

На стекле (пластинчатая, ориентировочная) –
чаще используется для идентификации антигена
Компоненты (ингредиенты):
1. чистая культура неизвестного микроба;
2. агглютинирующие диагностические сыворотки
(поли- и моновалентные)

46.

47. РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ: способы постановки

В пробирке (объемная, развернутая) – чаще используется
для обнаружения антител (серодиагностики) и определения
их количества (титра);
Титр (франц. titre определение, титр) - предельное
разведение пробы сыворотки крови или другой
биологической жидкости, при котором обнаруживается
активность антител с помощью какой-либо серологической
реакции.
Повторение ее через 5-7 дней позволяет выявить
нарастание титра антител у больного человека (метод
парных сывороток);

48.

Компоненты (ингредиенты):
1. сыворотка больного;
2. диагностикумы.
Сыворотка Диагностикум
+физраствор +физраствор
1:100
1:200
1:400
1:800

49. Реакция гемагглютинации

РНГА (РПГА) – цель серодиагностика.
Компоненты (ингредиенты):
1. сыворотка больного (неизвестные Ат);
2. эритроцитарный диагностикум (мелкодисперсные Аг
адсорбированы на эритроцитах).
РОНГА – цель сероидентификация.
Компоненты (ингредиенты):
1. неизвестные Аг (исследуемый материал);
2. эритроцитарные сыворотки (Ат адсорбированы на
эритроцитах).

50. РНГА (РПГА)

51. РНГА (РПГА): внешние проявления

отрицательная –
«пуговка»
положительная –
«зонтик»

52. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: сущность

осаждение
(преципитация)
антигена
(преципитиногена), находящегося в дисперсном
коллоидном
состоянии,
под
воздействием
специфических антител (преципитина) в растворе
электролита (диагностические преципитирующие
сыворотки) с образованием иммунного комплекса преципитата.
Титр преципитирующей сыворотки – это наибольшее
разведение
преципитиногена,
при
котором
сыворотка еще дает реакцию преципитации.

53. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: применение

1. диагностика инфекционных заболеваний
2. судебная-медицинская экспертиза
определение видовой принадлежности белков
– при анализе кровяных пятен, спермы и т.д.
3. санитарная практика
выявление фальсификации рыбных и мясных
изделий.
Цель: сероидентификация.

54. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: способы постановки

В пробирке (кольцепреципитация, по Асколи)
В геле (иммунодиффузия)
Простая диффузия (линейная, радиальная по
Манчини)
Двойная или встречная иммунодифузия (по
Оухтерлони, реакция нейтрализации токсина
антитоксином)
Усовершенствованные методы
иммуноэлектрофорез
иммуноблотинг

55. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: по Асколи

В пробирке: высокочувствительная (как всякая РП)
Компоненты (ингредиенты): последовательные
разведения
антигена,
экстрагированные
из
исследуемого материала – шерсти животного,
наслаивают
на
стандартные
разведения
диагностической преципитирующей сыворотки;
титр РП – максимальное разведение антигена, при
котором наблюдается кольцо преципитации.

56.

отрицательная положительная

57. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: в геле

►преимущество
по
сравнению
с
пробирочной - гель, высокоочищенный
агар, выполняет функцию локализации
преципитата, т.к. он, в отличие от
антител и антигенов, не может
диффундировать в геле.

58. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: простая радиальная иммунодиффузия по Манчини

Цель - определение класса и концентрации Ig в
сыворотке пациентов (сероидентификация).
Компоненты (ингредиенты) –
1. гель, содержащая антиглобулиновую сыворотку (Ат
против Ig человека);
2. сыворотка пациента (содержащая Ig), которая
вносится в лунки.
Визуально вокруг лунки с исследуемым материалом
образуется преципитат в виде кольца.

59.

60. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: двойная, или встречная, иммунодиффузия по Оухтерлони

Сущность
диффундируют
оба
компонента реакции, между которыми
образуются
полосы
«усы»
преципитации.
Компоненты
(ингредиенты)

в
центральной лунке диагностическая
преципитирующая сыворотка (Ат) к Аг, в
периферических лунках Аг.

61.

62. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: Реакция нейтрализации токсина антитоксином (РН)

In vitro:
1. в пробирке
реакция флоккуляции – образуется рыхлый осадок –
флоккулят
2. в геле
по Оухтерлони – например, для выявления
токсигенности дифтерийной палочки
In vivo:
На чувствительных лабораторных животных.

63.

64. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: Реакция нейтрализации токсина антитоксином

Сущность – определение токсинообразования у
Corynebacterium diphtheria.
Компоненты (ингредиенты) –
1. антитоксическая противодифтерийная сыворотка
(пропитывается полоска фильтровальной бумаги);
2. чистая культура Corynebacterium diphtheria,
засеваемая на поверхность агара в виде бляшек или
штрихами вокруг фильтровальной бумаги (с
антитоксической сывороткой).
Визуально – при положительной реакции образуются
«усы» преципитации.

65.

66. Реакция нейтрализации токсина антитоксином In vivo:

токсин + антитоксическая сыворотка
лабораторное животное
отсутствие эффекта
действия токсина
(гибель, некроз кожи
в месте введения)
РН положительная
(нейтрализация токсина
произошла)
эффект действия
токсина проявляется
РН отрицательная
(нейтрализация
токсина не произошла)

67.

68. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: иммуноэлектрофорез

Сущность - электрофоретическое разделение белков (исследуемого
материала) в забуференном агаровом геле;
в канавку (параллельно миграции белков) вносят преципитирующую
сыворотку;
дуги преципитации дают представление о составе исходной смеси
антигенов по своему:
количеству,
расположению,
форме.

69. НЕПОЛНЫЕ АНТИТЕЛА

одновалентные
антитела,
не
образующие
видимого
глазом
гигантского иммунного комплекса в
ходе реакций агглютинации или
преципитации
блокирующие антитела, реагины

70. Выявление неполных антител (диагностика резус-конфликта)

реакция КУМБСА - антиглобулиновый тест
Компоненты (ингредиенты):
1.
Неполные антитела (сыворотка беременной женщины) + антиген
(эритроциты резус+) = реакция невидимая
2.
+ антиглобулиновая сыворотка (получаемая путем иммунизации
кролика человеческими Ig и содержащая полные антитела к любому
человеческому Ig, в т.ч. и неполным антителам) = реакция видимая (РА
или РНГА)

71. СЛОЖНЫЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ

3-х компонентные: Ag + Ат + С

72. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С УЧАСТИЕМ КОМПЛЕМЕНТА

Сущность - реакции, основанные на активации
комплемента комплексом антиген-антитело
1. Видимые
1. Иммобилизация
2. Иммунного прилипания
3. Лизиса (в т.ч. гемолиза)
2. Невидимые
1. Реакция связывания комплемента (РСК)

73. реакции иммунного лизиса:

РЕАКЦИИ ИММУННОГО ЛИЗИСА:
Реакция гемолиза (Ag – эритроцит);
Реакция бактериолиза (Ag –
бактерии);
Реакция цитолиза (Ag – клетка).

74. РЕАКЦИЯ ГЕМОЛИЗА

Цель:
Для определения титра и активности системы
комплемента.
Как индикатор для оценки РСК.
Компоненты (ингредиенты):
1. Аг (эритроциты барана);
2. Ат (гемолитическая сыворотка крови кролика,
иммунизированного эритроцитами барана);
3. комплемент (сыворотка крови морской свинки).

75. Реакция гемолиза: «+» - гемолиз (лаковая кровь) «-» - задержка гемолиза

76. Реакция связывания комплемента

Цель:
серодиагностика: определение Ат в
сыворотке пациента;
сероидентификация: определение Аг
(исследуемый материал).
Сущность - используется две конкурирующие
системы Аг и Ат и один комплемент.

77. Реакция связывания комплемента

1 система – основная (исследуемая или
тест-система) (специфическая фаза):
Серодиагностика: сыворотка больного (Ат),
инактивированная при 560 + антиген +
комплемент в рабочей дозе (реакция
связывания комплемента).
Сероидентификация: исследуемый материал,
содержащий Аг (моча, ликвор, носоглоточный
смыв и др.) + диагностическая сыворотка
(известные Ат) + комплемент (реакция
связывания комплемента).

78. Реакция связывания комплемента

2 система - индикаторная или
гемолитическая
(неспецифическая
фаза):
выявление в смеси свободного комплемента
путем добавления к ней гемолитической
системы:
эритроциты
барана
и
гемолитическая кроличья сыворотка свободный комплемент вызывает гемолиз.
При отсутствии свободного комплемента
(связывание с 1 системой) – задержка
гемолиза

79. Схема РСК

С сывороткой больного
С сывороткой здорового
Реакция Вассермана
Цель: серодиагностика сифилиса
отсутствие гемолиза
гемолиз

80. Серологические реакции с использованием меченых антител или антигенов (общая характеристика)

81. Современные серологические реакции с меткой

Особенности:
Используют метку (флюоресцеин, фермент или
изотоп), которую соединяют (конъюгируют) с Аг
или Ат.
Реакции происходят быстрее (экспресс) и
качественнее.
Высокочувствительны
и
возможна
точная
регистрация специальными приборами.
Их проводят на стекле или полистироловых
планшетках с лунками.

82. Современные серологические реакции с меткой

Требования к меткам:
Не изменять специфичность Ат и Аг;
Быстро и легко выявляться;
Определяться количественно.

83. Современные серологические реакции с меткой

Основные виды меток:
Светящиеся красители – флюорохромы
(РИФ);
Электронно-плотные белки (ИЭМ);
Ферменты (ИФА);
Радиоактивные изотопы (РИА).

84. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ, реакция Кунса)

ПРЯМОЙ МЕТОД:
Бактерия в мазке + сыворотка, меченная флюорохромом =
свечение в виде каймы зеленого цвета.
НЕПРЯМОЙ МЕТОД:
1) бактерия в мазке + кроличья диагностическая сыворотка,
2) отмывание антител, не связавшихся с антигенами
бактерий,
3) + антиглобулиновая (антикроличья) сыворотка, меченная
флюорохромом = свечение в виде каймы зеленого
цвета.

85.

ПРЯМОЙ МЕТОД
НЕПРЯМОЙ МЕТОД

86. Люминесцентный микроскоп

87. Иммуноферментный анализ - ИФА

Иммуноферментный анализ ИФА
ИФА применяют для диагностики инфекций,
определения гормонов, ферментов, лекарственных
препаратов и других биологически активных веществ,
содержащихся в исследуемом материале в минорных
концентрациях – 10-12 г/л.

88. Иммуноферментный анализ

Наиболее
распространен
твердофазный ИФА – когда
один из компонентов иммунной
реакции (антиген или антитело)
сорбирован на твердом носителе,
например
в
лунках
микропанелей из полистирола.

89. Иммуноферментный анализ

Фермент:
пероксидаза хрена
-галактозидаза
щелочная фосфатаза

90. Иммуноферментный анализ

Цель – серодиагностика
1) сорбированный в лунке антиген + сыворотка больного,
2) отмывание несвязавшихся реагентов путём тщательного
промывания лунки,
3) + антиглобулиновая (античеловеческая) сыворотка,
меченная ферментом,
4) отмывание несвязавшихся реагентов
4) + субстрат для фермента + хромоген = изменение цвета
хромогена.

91.

92. Иммуноферментный анализ

Цель: сероидентификация
В лунке сорбируют специфические антитела
+ искомый антиген (исследуемый материал)
+ иммунная сыворотка (Ат) против антигена,
меченная ферментом + субстрат для
фермента + хромоген (метод «сэндвича»).

93.

94. Радиоиммунологический анализ

Сущность: аналогичен ИФА.
Недостатки: метод представляет
определенную экологическую опасность.
РАДИОНУКЛИДЫ
125I,
14C,
3H,
51Cr и др.

95.

ИЭМ
метка
Ферритин
(белок с большим содержание железа)
Электронный микроскоп
эффект
Повышение контрастности вирусной
частицы при электронной микроскопии

96. Контрольные вопросы

1. С какими морфологическими структурами связана антигенность и
иммуногенность антигенов?
2. Перечислить антигены бактерий, которые являются продуктами распада.
3. Какие классы иммуноглобулинов существуют и чем они характеризуются.
4. Какие свойства антител определяют прочность связывания и количество
связавшегося антигена.
5. Что такое «аффинность» и «авидность» антител?
6. Что такое серодиагностика и сероидентификация, какие известные
компоненты используют в зависимости от цели реакции.
7. При каком способе постановки РА определяют титр антител
8. По какому феномену оценивают положительную РП?
9. Чем отличаются РП в геле и пробирочные?
10. Как называются антигены, антитела и осадок в реакциях агглютинации и
преципитации?

97.

БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ!
English     Русский Правила