Микробиологическая диагностика зооантропонозных бактериальных инфекций

1. Микробиологическая диагностика зооантропонозных бактериальных инфекций

Министерство Здравоохранения Алтайского края
КГБПОУ « Барнаульский базовый медицинский колледж»
Микробиологическая диагностика
зооантропонозных бактериальных
инфекций

2. План

Возбудитель чумы
Возбудитель сибирской язвы
Возбудитель бруцеллеза
Возбудитель туляремии

3. 1. Возбудитель чумы

Чума —это особо-опасная, карантинная инфекция,
с высокой летальностью, полиорганным
поражением.
Природные очаги чумы находятся в Горном Алтае
и Монголии, где возбудитель циркулирует среди
животных, человек, попадая в эти очаги, может
заражаться.
В XIV веке по Европе прошлась страшная эпидемия
«чёрная смерть», занесённая из Восточного Китая,
и унесла более 2,5 миллионов человеческих
жизней.
Лечение чумы стало значительно эффективнее с
появлением современных антибактериальных
препаратов. Смертность от чумы с этого времени
снизилась .

4. Морфология

Возбудитель чумы — Yersinia pestis.
Грамотрицательные палочки, имеют
овальную форму и величину 0.3-0.6х12 мкм. Спор не образуют.
Полиморфны. Окрашиваются
биполярно, концы палочек
интенсивнее.
Возбудители чумы.

5. Культивирование.

Возбудитель чумы-факультативные анаэробы. Растут
на простых питательных средах при температуре 2830 °С, pH среды 7.0-7.2. Рост появляется через 12-14
часов, колонии имеют вид мелких глыбок с
неровными краями, через 48 часов напоминают
«кружевной платочек».
Элективные среды – казеиновые среды и гидролизаты
кровяного сгустка.
На скошенном агаре культура растет в виде вязкого
налета; на бульоне – в виде рыхлых хлопьев,
взвешенных в прозрачной жидкости.
На фото возбудители чумы — рост на плотной
среде колонии. Вначале колонии похожи на
битое стекло. Далее их центральная часть
уплотняется, а периферия напоминает кружева.

6. Ферментативные свойства. Токсинообразование. Антигенная структура.

Расщепляют сахарозу, мальтозу, арабинозу, рамнозу, глюкозу и маннит с
образованием кислоты. Различают два варианта – разлагающие и не
разлагающие глицерин. Не разжижают желатин, не свёртывают молоко,
образуют сероводород. Продуцируют фибринолизин, гемолизин,
гиалуронидазу, коагулазу.
Токсин, «мышиный яд», представляет собой особый белок, сочетающий
свойства экзо- и эндотоксина, он состоит из двух белковых фракций (А и В).
Микробы чумы содержат около десяти различных антигенов: фракции F, V,
W и др.

7. Устойчивость

При 100°С погибают мгновенно, при
80°С через 5 мин. Низкие
температуры переносят хорошо, но
очень чувствительны к высыханию.
Дез.растворы губят через 5-10 мин.

8. Источники заражения и пути передачи.

Источником являются больные животные, в основном
грызуны.
Пути передачи:
Трансмиссивный. Переносчики блохи.
Воздушно-капельный путь - заражение человека от
человека при легочной форме.
Пищевой - при употреблении в пищу зараженного мяса.
На фото признаки чумы у грызунов: увеличенные
лимфоузлы и множественные кровоизлияния под
кожей.
На фото сусликовая блоха – основной переносчик чумы.

9. Патогенез.

Инкубационный период длится от 2 до 5 дней.
Клинические формы инфекции:
первично-бубонная
кожная
легочная
септическая
кишечная.
На фото бубонная чума. Типичное увеличение
лимфатического узла.

10. Профилактика и иммунитет.

Иммунитет напряженный и продолжительный. Иммунитет
обусловливается системой макрофагов. Большое значение
имеет фагоцитарный фактор.
Профилактика:
Изоляции больных.
Установление карантина для людей, находящихся в контакте с
больными.
Проведение в очагах дезинсекции и дератизации.
Вакцинация
Защита медицинского персонала, находящегося в очагах,
проводятся введением стрептомицина.

11. Лабораторная диагностика чумы

Все исследования на чуму проводят в лабораториях ООИ,
исследования проводятся в противочумных костюмах!
Методы:
1.
микроскопический
2.
микробиологический
3.
биологический
4.
Серологический
5.
ПЦР.
Материал для исследования: содержимое бубона, мокрота,
кровь, кал, кусочки ткани органов умерших и трупов
животных.

12. 2. Возбудитель сибирской язвы. Систематика.

Семейство Bacillaceae
Род Bacillus
Вид Bacillus anthracis

13. Морфология

Возбудители сибирской язвыкрупные палочки длиной 5-8 мкм с
обрубленными или несколько
вогнутыми концами.
Грамположительны. В организме
располагаются попарно или в виде
коротких цепочек. Неподвижны,
образуют капсулу. Так же образуют
споры овальной формы .

14. Культивирование

Факультативные анаэробы. Неприхотливы.
Температура -35-38 С , рН среды 7,2-7,6.
На МПА образуют крупные колонии с неровными
бахромчатыми краями, от которых отходят пучки
нитей (голова медузы или львиная грива).
В бульоне - придонный рост .На дне образуется
осадок в виде комка ваты.
В желатина – послойное разжижение (перевернутая
елочка).
При посеве на МПА с пенициллином, наблюдается
распад бацилл на шары, цепь из которых напоминает
жемчужное ожерелье.
Колония возбудителя, рост в жидкой
среде и желатине.

15. Ферментативные свойства

Сахаролитические свойства – расщепляют глюкозу, лактозу , мальтозу,
левулезу и другие сахара до образования кислоты.
Протеолитические свойства - разжижает желатин, створаживает
молоко(медленно), гидролизируют крахмал , образуют аммиак и
сероводород ,переводят нитраты в нитриты.

16. Токсинообразование. Антигенная структура.

Образуют экзотоксин, содержащий отечный и летальные факторы. Большая
роль в вирулентности принадлежит капсуле, которая связана с токсическим
веществом.
Ферменты патогенности: липаза, пероксидаза, диастаза.
Бациллы содержат два антигена :
1)Соматический – находится в клеточной стенке микроорганизма.
Термоустойчив. Против этого антигена антитела не продуцируются. Этот
антиген длительно сохраняется в культурах и трупном материале.
2)Капсульный –антиген, обусловливающий антифагоцитарное действие.

17. Устойчивость к факторам окружающей среды

Вегетативная формамалоустойчива: при 100˚Смгновенно погибают; при 5560˚С-через 30-40 мин.
Споры- устойчивы.
Выдерживают кипячение в
течении 15-20 мин.
Автоклавирование (120С) убивает
через 20 мин. К низким
температурам не чувствительны.
В сухом состоянии сохраняются
до 30 лет.

18. Эпидемиология.

Источник заболевания – больные животные (коровы, овцы, лошади, олени, свиньи
и др.)
Пути передачи – контактно-бытовой, воздушно-пылевой, пищевой.

19. Патогенез и иммунитет

Входными воротами являются кожа и
слизистые оболочки дыхательных путей и
пищеварительного тракта.
Формы: кожную, легочную, кишечную.
В месте внедрения возбудителя образуется
покраснение, переходящее в папулу меднокрасного цвета, которая затем переходит в
везикулу с серозно-гнойным содержимым,
после подсыхания образуется черный струп.
Заболевание протекает тяжело и может
оканчиваться летально.
Иммунитет довольно стойкий, антимикробный
и антитоксический.

20. Профилактика

Неспецифическая: своевременное выявление и изоляция больных животных,
дезинфекция территории.
Специфическая:
-Вакцина живая СТИ,
-Вакцина комбинированная, в состав ее входит живая вакцина СТИ и
протективный антиген B.anthracis.
-Для экстренной профилактики используют иммуноглобулин.

21. Лабораторная диагностика сибирской язвы

Материал для исследования
Применяемые методы исследования:
Отделяемое везикул,
карбункулов(кожная форма).
Микроскопический
Мокрота(легочная форма).
Испражнения(кишечная форма).
Кровь(септическая форма).
Почва, шерсть животных(для
постановки реакции Асколи).
Бактериологический
Биологический
Аллергический
Реакция преципитации Асколи

22. 3. Возбудители бруцеллеза

Бруцеллез – зоонозное инфекционно-аллергическое заболевание,
характеризующееся длительной лихорадкой, поражением опорнодвигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой, мочеполовой и
других систем организма со склонностью к затяжному, хроническому
течению.
Систематика.
Семейство – Brucellaceae
Род – Brucella
Виды –В. melitensis, B. Abortus (bovis) , B. suis.

23. Морфология

Мелкие кокковидные палочки
размером 0,6-1,5 мкм,
грамотрицательные,
располагаются беспорядочно,
неподвижны, спор не
образуют, могут образовывать
нежную капсулу.

24. Культивирование

Строгие аэробы. Температура – 37˚С, рН – 6,8-7,2.
Характерен медленный рост бруцелл – 2-3 недели и более.
Требовательны к питательным средам: хорошо растут на
печеночном, сывороточном или кровяном агаре. В жидкой среде
наблюдается рост в виде диффузного помутнения. На плотных
питательных средах бруцеллы образуют перламутровые мелкие
выпуклые гладкие колонии с нежной зернистостью (S-форы).
Возможна диссоциация в R-формы.

25. Биохимическая активность. Антигенная структура.

Биохимическая активность. Выражена слабо. Ферментируют глюкозу и
арабинозу до кислоты без газа. Восстанавливают нитраты, разлагают белки
с образованием Н2S, индол не образуют.
Антигенная структура.
Родовые и видовые поверхностные антигены.
Два соматических антигена – А и М. М-антиген доминирует у В. melitensis,
А-антиген преобладает у B. abortus и B. suis.
L(Vi)-антиген – поверхностно расположенный капсульный антиген
вирулентности.

26. Факторы патогенности.

Эндотоксин (ЛПС), имеющим высокую инвазивную способность
Ферменты – гиалуронидаза и нейроминидаза
Пили, адгезивные белки, капсула.
Бруцеллы обладают высокой инвазивностью: могут проникать в организм
человека через неповрежденные кожные и слизистые покровы. Также
являются факультативными внутриклеточными паразитами.

27. Резистентность.

- В воде и влажной почве – они могут сохраняться до 5 месяцев;
- В молоке – 9 месяцев;
- В сыре – до 1 года;
- Они устойчивы к низким температурам и в замороженном мясе выживают
до 5 месяцев.
Чувствительны к повышенной температуре (до 60о С – погибают за 30
минут, кипячение – мгновенно), действию дезинфиктантов (3% раствор
хлорной извести, 1% хлорамин, 2% формалин убивают их за 5 минут),
антибиотикам (стрептомицину, тетрациклину, рифампицину).

28. Эпидемиология.

Источник возбудителя инфекции: овцы, козы (B. melitensis), крупный рогатый скот (B.
abortus), свиньи (B. suis).
Механизмы передачи:
Фекально-оральный (путь – алиментарный – большую опасность представляет сырое
молоко и молочные продукты, не подвергающиеся в процессе приготовления тепловой
обработке, например, сыр, брынза);
Контактный (путь – прямой контактный – при попадании возбудителя на поврежденные
кожные или слизистые покровы при уходе за больными животными);
Аэрогенный (путь – воздушно-пылевой – описан при вдыхании воздушно-пылевой смеси,
содержащей инфицированные частицы шерсти, навоза, земли во время уборки
помещения).

29. Патогенез.

Бруцеллы проникают в организм человека через слизистые оболочки или
кожные покровы. Лимфогенным путем возбудители заносятся в
региональные лимфоузлы и подвергаются незавершенному фагоцитозу. С
макрофагами возбудители проникают в кровоток и диссеминируют в
печень, селезенку, почки, костный мозг, суставы, эндокард. В пораженных
органах образуются очаги некроза, окруженные инфильтратами.
Появляются признаки очаговых поражений со стороны опорнодвигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой, мочеполовой и
других систем. Внутри фагоцитов бруцеллы способны формировать Lформы и длительно персистировать в организме. Переход в исходные
формы обусловливает рецидив болезни.

30. Иммунитет. Профилактика.

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет – гуморальный и клеточный,
нестерильный, возможны повторные заболевания. Формируется ГЗТ.
Профилактика. Живая бруцеллезная вакцина получена штамма ВА-19А,
полученную из В. abortus, создает перекрестный иммунитет против других
видов бруцелл.
Неспецифическая профилактика – плановое обследование в
животноводческих хозяйствах, на мясных и молочных комбинатах.

31. Лабораторная диагностика

Материал для исследования: кровь, костный мозг, грудное молоко, моча, околосуставная
жидкость.
Методы исследования.
Серологический – реакция агглютинации на стекле Хеддельсона, реакция Райта, РПГА,
РИФ, РСК
Бактериологический – культивирование в печеночной среде с последующей
идентификацией по морфологическим, культуральным, биохимическим и антигенным
свойствам.
Биологический – заражение морских свинок
Аллергическая проба – проба Бюрне
Моллекулярно-генетические (ПЦР).

32. 4. Возбудители туляремии.

Туляремия – острое природно-очаговое зоонозное заболевание,
характеризующееся лихорадкой, образованием лимфаденитов и
поражением различных органов (глаз, легких, кожных покровов, ЖКТ и др.)
Систематика:
Род – Francisella
Вид – Francisella tularensis.

33. Морфология.

Мелкие кокковидные палочки
размером 0,2-0,7мкм,
грамотрицательные, в мазках
располагаются беспорядочно,
неподвижные, спор не
образуют, некоторые имеют
капсулу.

34. Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы. Оптимальные температура – 37˚С, рН
– 6,8-7,2.
Рост на питательных средах замедленный – 4-14 суток.
Требовательны к питательным средам: культивируются на средах
с добавлением яичного желтка (среда Мак-Коя) или крови,
цистина и глюкозы (среда Френсиса).
В жидких питательных средах – рост в виде пленки.
На плотных питательных средах - мелкие молочно-белые
колонии с ровным краем.

35. Биохимические свойства. Антигены. Факторы патогенности.

Биохимическая активность. Ферментируют глюкозу, мальтозу и некоторые другие сахара
до кислоты, некоторые штаммы расщепляют глицерин. Образуют аммиак, Н2S; индол не
образуют.
Антигенная структура. О-антиген – соматический. Vi-антиген – разновидность
капсульного антигена, обладает вирулентными и иммуногенными свойствами.
Факторы патогенности:
Эндотоксин.
Ферменты – гиалуронидаза, нейроминидаза, фибринолизин.
Пили, белки клеточной стенки, капсула.

36. Резистентность.

Хорошо сохраняется во внешней среде, особенно при низких
температурах:
- В воде, почве – сохраняют жизнеспособность до 4 месяцев;
- На зерне при +10˚С – 9 месяцев, при 20-25˚С 1-2 мес;
- В шкурах животных, погибших от туляремии – до 1 месяца.
Чувствительны к повышенной температуре (до 60˚С – погибают
за 20 минут, кипячение – 1-2 минуты), УФ лучам, действию
дезинфиктантов, антибиотикам (стрептомицину, тетрациклину,
гентамицину, канамицину).

37. Эпидемиология.

Типичный зооноз.
Источник инфекции – многочисленные виды грызунов и другие животные (всего 82 вида).
Механизмы передачи:
- Трансмиссивный (при укусе кровососущими насекомыми – иксодовыми клещами,
комарами, слепнями);
- Фекально-оральный (путь – алиментарный и водный – через инфицированные продукты
и воду);
- Контактный (путь – прямой контактный –попадание возбудителя на поврежденные
кожные или слизистые покровы при снятии шкур, сборе павших грызунов);
- Аэрогенный (путь – воздушно-пылевой – описан при вдыхании содержащей
возбудителей пыли от зерна, соломы).

38. Патогенез.

Возбудители проникают в организм человека через кожу, слизистые оболочки глаз,
дыхательных путей или ЖКТ. В области входных ворот развивается первичный аффект в
виде последовательно сменяющих друг друга пятна, папулы, везикулы, пустулы и язвочки.
Затем возбудитель попадает в лимфоузлы, где поглощаются фагоцитами, внутри которых
активно размножается. Из лимфоузлов F.tularensis попадает в кровь (бактериемия), при
этом часть бактерий погибает, что обуславливает интоксикацию. Затем наступает стадия
очаговых поражений с образованием гранулем в селезенке, печени, легких, костном
мозге. Клиническое течение инфекции зависит от входных ворот, в соответствии с чем
выделяют формы заболевания:
- Бубонную;
- Легочную;
- Желудочно-кишечную;
- Септическую.

39. Иммунитет и профилактика.

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет – гуморальный и
клеточный, стойкий, пожизненный.
Специфическая профилактика. По эпидпоказаниям
иммунизируют живой аттенуированной туляремийной
вакциной.

40. Лабораторная диагностика

Методы исследования:
Серологический - РА, РПГА (для определения антител); РИФ, ИФА, реакция преципитации
(для определения антигена).
Аллергологический – проба с аллергеном тулярином.
Бактериологический - не нашел широкого применения, так как непосредственный
посев исследуемого материала на искусственные питательные среды роста бактерий не
дает.
Биологический – заражение морских свинок и белых мышей.
ПЦР.