Diplom (2)

1.

СОЗДАНИЕ ВЕКТОРНОЙ СИСТЕМЫ ДЛЯ ПРОВЕРКИ
СТРУКТУРЫ МОДИФИЦИРОВАННОГО ЗАПАСАЮЩЕГО
БЕЛКА ГОРОХА ПОСЕВНОГО (PISUM SATIVUM L.)
Выполнил:
студент гр. 4741601/41001
Яжгур Александр Алексеевич
Научный руководитель:
Богомаз Денис Игоревич, доцент, к.б.н.
Место выполнения работы: ООО “Бигль”

2. Введение

Белок вицилин – основной запасающий белок
бобовых растений, в частности гороха
посевного (Pisum sativum L.). Изменение
нуклеотидной последовательности гена этого
белка
дает
возможность
изменять
аминокислотный состав и повышать пищевую
ценность бобовых, создавая продукты с более
сбалансированным
составом
питательных
веществ.
При получении модифицированного фрагмента
гена вицилина следует клонировать его в
экспрессионный
вектор,
который
будет
использоваться
для
получения
рекомбитнатного белка.
Pisum sativum L.
2

3. Цель и задачи

Целью данной работы являлось разработка экспрессионного вектора, для получения
модифицированный запасающий белок гороха посевного (Pisum sativum L.), сбалансированного по
аминокислотному составу, и анализа его пространственной конформации.
Задачи:
1. Проведение биоинформатических исследований, с последующим сравнительным анализом
доступных векторных систем.
2. Подбор молекулярно-биологического инструментария для проведения работ по клонированию.
3. Клонирование гена модифицированного вицилина полной длины в заданную экспрессионную
векторную систему. Получение рекомбинантной конструкции с поледующей трансформации
продицирующего штамма.
3

4. Схема эксперимента

1
2
Подбор и анализ
векторной системы
Разработка праймеров,
содержащих сайты рестрикции
Выбор рестриктаз и
буферов
6
7
Секвенирование
по Сэнгеру
3
Клонирование
конструкции
5
Обработка
рестриктазами вставки и
вектора
4
ПЦР с перекрыванием
4

5. Материалы и методы

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Подбор и анализ векторной системы
• Промотор: Индуцибельный промотор T7
lac. Метка: 6HIS (на N-конце) для детекции
и аффинной очистки
• Праймеры для секвенирования/ПЦР: T7Promoter (прямой) и T7-Terminator
(обратный)
• Антибиотик: Ампициллин (ген