Андронова Окснана Владимировна Эмбрионы_065302

1.

Культивирование вирусов
в организме лабораторных животных и на куриных эмбрионах
Дисциплина: вирусология
Реферат
Выполнила: Андронова Оксана Владимировна
2026

2.

Содержание
1. Введение
2. Биологические системы для культивирования
3. Культивирование в организме животных:
принцип
4. Выбор животных-моделей
5. Способы заражения животных
6. Индикация вируса у животных
7. Применение метода с животными
8. Преимущества и недостатки (животные)
9. Куриные эмбрионы: принцип метода
10. Подготовка эмбрионов и инкубация
11. Способы заражения эмбрионов: обзор
12. Заражение в аллантоисную полость
13. Заражение на хорионаллантоисную оболочку
14. Заражение в желточный мешок
15. Заражение в амниотическую полость
16. Индикация вируса в эмбрионах
17. Преимущества и ограничения (эмбрионы)
18. Сравнение методов
19. Биобезопасность и этика
20. Заключение

3.

Введение
Вирусы — облигатные внутриклеточные паразиты: они не способны к самостоятельному размножению
вне живой клетки.
Для их изучения, диагностики и производства вакцин необходимы живые биологические системы, в
которых вирус может реплицироваться.
Исторически первыми такими системами стали:
• Организм чувствительных лабораторных животных
• Развивающиеся куриные эмбрионы
Цель реферата — описать принципы, технику и практическое применение обоих методов, а также
сравнить их достоинства и ограничения.

4.

Биологические системы для культивирования
Животные (in vivo)
• Максимально приближено
к естественной инфекции
• Первичное выделение
вирусов
• Изучение патогенеза
Куриные эмбрионы
• Промежуточная модель
• Активно делящиеся ткани
• Относительная
стерильность
Культуры клеток
• Современный стандарт
• Высокая
воспроизводимость
• Автоматизация процесса
Все три подхода применяются в вирусологии и часто дополняют друг друга.
В данном реферате подробно рассматриваются первые два метода — культивирование в организме
животных и на куриных эмбрионах.
Актуальность: диагностика вирусных инфекций, выделение новых штаммов, титрование, производство
вакцин.

5.

Культивирование в организме животных
Принцип метода
Суть метода: вируссодержащий материал вводится чувствительному лабораторному животному, после
чего вирус размножается в его организме.
Ключевые условия успешного культивирования:
• Правильный выбор вида животного — оно должно быть восприимчиво к конкретному вирусу
• Подходящий путь введения материала (зависит от тропизма вируса)
• Соблюдение асептики и правил биобезопасности
• Контроль состояния животного на протяжении всего эксперимента
Схема: Образец →
тканей
Заражение животного
→ Накопление вируса →Выделение из

6.

Выбор животных-моделей
Критерии чувствительности
Вид животного
Примеры вирусов
Почему подходит
Мыши-сосуны
Бешенство, ящур, энтеровирусы
Иммунная система не сформирована
Взрослые мыши
Арбовирусы, некоторые энцефалиты
Удобны для титрования
Кролики
Болезнь Ауески
Чувствительность к герпесвирусам
Цыплята
Ларинготрахеит, болезнь Марека
Естественный хозяин птичьих вирусов
Чувствительность определяют экспериментально: если после заражения наблюдаются клинические
признаки или накопление вируса в тканях — животное считается подходящей моделью.

7.

Способы заражения животных
Выбор пути введения зависит от тропизма вируса
Путь введения
Куда попадает вирус
Примеры вирусов
Подкожно / внутримышечно
Системное распространение
Ящур, болезнь Ауески
Интраназально
Дыхательные пути
Вирусы гриппа, пневмонии
Интрацеребрально
Центральная нервная система
Бешенство, энцефалиты
Внутривенно
Быстрое распространение по организму
Арбовирусы
Внутрибрюшинно
Системная инфекция
Энтеровирусы, гепатиты

8.

Индикация и подтверждение размножения вируса у животных
Клинические признаки
• Вялость, потеря аппетита
• Параличи, судороги
• Изменения поведения
• Гибель в характерные сроки
Патологоанатомические
• Кровоизлияния в органах
• Некротические очаги
• Увеличение органов
• Характерные поражения
тканей
Лабораторные методы
• Выделение вируса из
тканей
• ПЦР
• Реакция нейтрализации
• Титрование (ID₅₀)
Для количественной оценки используют титрование вируса — например, метод бляшек на культуре
клеток или определение 50% инфекционной дозы (ID₅₀).
Комбинация клинических, патологоанатомических и лабораторных методов даёт надёжное
подтверждение.

9.

Применение культивирования в организме животных
Основные направления применения:
• Первичное выделение вируса из клинического материала
• Накопление вирусной массы для производства вакцин и диагностикумов
• Изучение патогенеза и механизмов заражения
• Тестирование противовирусных препаратов и вакцин
• Получение гипериммунных сывороток (многократная иммунизация)
• Титрование вируса и постановка реакции нейтрализации
• Поддержание вируса в лаборатории в активном состоянии
Метод остаётся незаменимым для получения живого вируса, пригодного для дальнейших исследований.

10.

Преимущества и недостатки метода (животные)
Преимущества
• Максимальное приближение к естественной
инфекции
• Возможность изучать полный цикл патогенеза
• Учёт иммунного ответа организма
• Подходит для вирусов, не растущих в
культурах клеток
• Получение гипериммунных сывороток
• Тестирование вакцин в живой системе
Недостатки
• Высокая стоимость содержания животных
• Этические ограничения (правила bioethics)
• Индивидуальная вариабельность
реагирования
• Риск заражения персонала (биобезопасность)
• Необходимость вивария и
квалифицированного ухода
• Длительность экспериментов

11.

Куриные эмбрионы как модель
Принцип метода
Метод основан на введении вируссодержащего материала в развивающийся куриный эмбрион, где
вирус размножается в его тканях и жидкостях.
Почему куриные эмбрионы удобны:
• Относительная стерильность — эмбрион защищён скорлупой и оболочками
• Активно делящиеся ткани — благоприятная среда для репликации вируса
• Иммунная система ещё не сформирована — нет иммунного ответа на вирус
• Возможность получения больших объёмов вируссодержащего материала
• Хорошо отработанная техника работы
• Доступность и экономическая целесообразность

12.

Подготовка эмбрионов и условия инкубации
Возраст эмбрионов:
• Обычно используют 6–12-дневные развивающиеся эмбрионы
• На этом сроке ткани достаточно развиты, но иммунная система
ещё не активна
Обработка перед заражением:
• Скорлупу обрабатывают 70% этиловым спиртом, раствором йода
• Иногда применяют фламбирование (обжигание поверхности)
• После инъекции отверстие закрывают каплей расплавленного парафина
Условия инкубации:
• Температура — около 37 °C, влажность — 60–70%
• Продолжительность: от 2 до 8 суток (зависит от вируса и штамма)
• Контроль состояния — овоскопирование (просвечивание)

13.

Способы заражения куриных эмбрионов
Выбор зависит от тропизма вируса
Способ заражения
Где накапливается вирус
Типичные вирусы
В аллантоисную полость
Аллантоисная жидкость
Грипп, ньюкаслская болезнь
На хорионаллантоисную оболочку (ХАО)
Оболочка (бляшки)
Оспа, ларинготрахеит
В желточный мешок
Желточный мешок
Болезнь Марека, хламидии
В амниотическую полость
Амниотическая жидкость
Грипп, ньюкаслская болезнь
В тело зародыша / сосуды ХАО
Ткани зародыша
Специфические задачи
Объём вводимого материала обычно составляет 0,1–0,2 мл.

14.

Заражение в аллантоисную полость
Описание метода:
• Материал вводят шприцем через отверстие в скорлупе
в аллантоисную полость
• Объём — 0,1–0,2 мл вируссодержащего материала
Для каких вирусов применяется:
• Вирусы гриппа (A, B)
• Вирус ньюкаслской болезни
• Вирус энцефаломиелита птиц
Особенности:
• Вирус накапливается в аллантоисной жидкости в
больших количествах
• Один из самых распространённых методов
• Широко применяется в производстве вакцин против гриппа

15.

Заражение на хорионаллантоисную оболочку (ХАО)
Описание метода:
• На скорлупе делают «окошко», обнажая ХАО
• Материал наносят капельно непосредственно
на оболочку
• После инкубации оболочку извлекают и исследуют
Для каких вирусов применяется:
• Вирусы оспы (оспа птиц, оспа вакциния)
• Инфекционный ларинготрахеит птиц
• Чума плотоядных
• Болезнь Ауески
Индикация:
• На оболочке формируются характерные бляшки —
участки некроза (оспенные поражения)

16.

Заражение в желточный мешок и амниотическую полость
Желточный мешок
• Материал вводят через тупой конец яйца
• Игла проходит в желточный мешок
• Вирусы: болезнь Марека, хламидии
• Ринопневмония лошадей
• Катаральная лихорадка овец
• Вирус накапливается в тканях желточного
мешка
Амниотическая полость
• Материал вводят в амниотическую полость
• Игла направлена к телу зародыша
• Вирусы: грипп, ньюкаслская болезнь
• Ринопневмония лошадей
• Вирус накапливается в амниотической
жидкости
• Часто используют при первичном выделении

17.

Индикация вируса в куриных эмбрионах
Признаки репродукции вируса в эмбрионе:
• Гибель эмбриона в характерные для данного вируса сроки
• Специфические поражения оболочек: бляшки, кровоизлияния,
отёки
• Задержка роста и развития эмбриона
• Изменение цвета и консистенции жидкостей
Лабораторные методы подтверждения:
• Реакция гемагглютинации (РГА) — вирусы со спиралью
склеивают эритроциты
• ПЦР — точная идентификация генетического материала
вируса
• Иммунофлуоресценция — обнаружение вирусных антигенов
• Электронная микроскопия — визуализация вирионов

18.

Преимущества и ограничения метода (эмбрионы)
Преимущества
• Относительная простота и доступность
• Большие объёмы вируссодержащего
материала
• Низкая стоимость по сравнению с животными
• Меньше этических ограничений
• Хорошо отработанная техника
• Широкое применение в производстве вакцин
Ограничения
• Не все вирусы размножаются в эмбрионах
• Риск контаминации латентными вирусами
• Возможна бактериальная контаминация
• Отрицательный результат не всегда =
отсутствие вируса
• Меньшая чувствительность, чем у культур
клеток
• Партия яиц может варьировать по качеству

19.

Сравнение методов культивирования
Параметр
Лабораторные животные
Куриные эмбрионы
Стоимость
Высокая (содержание вивария)
Низкая (оплуженные яйца)
Этические ограничения
Существенные
Минимальные
Объём вируса
Ограничен тканями животного
Большие объёмы (жидкости)
Воспроизводимость
Индивидуальная вариабельность
Выше, стандартизировано
Спектр вирусов
Широкий (зависит от модели)
Ограничен (преимущественно птичьи, некоторые
mammalian)
Биобезопасность
Риск для персонала выше
Риск ниже (закрытая система)

20.

Заключение
Культивирование вирусов в организме лабораторных животных и на куриных эмбрионах — два
классических метода, которые сохраняют своё значение в современной вирусологии.
Животные обеспечивают модель, максимально приближенную к естественной инфекции, и незаменимы
для изучения патогенеза и первичного выделения.
Куриные эмбрионы — доступная и экономичная система, широко применяемая в производстве вакцин
(особенно против гриппа) и диагностических препаратов.
Оба метода часто дополняют друг друга: первичное выделение у животных → накопление на эмбрионах
→ дальнейшее изучение в культурах клеток.
Несмотря на развитие культур клеток, эти классические подходы остаются актуальными для решения
специфических вирусологических задач.