Жидкостная хроматография

1. Жидкостная хроматография

2. ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

МЕТОД РАЗДЕЛЕНИЯ И АНАЛИЗА ВЕЩЕСТВ,
ГДЕ П.Ф. СЛУЖИТ ЖИДКОСТЬ
Методы жидкостной хроматографии
ЖИДКОСТНО–ТВЕРДОФАЗНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
(адсорбционная)
(ионообменная)
ЖИДКОСТНО-ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
(распределительная)
ЖИДКОСТНО-ГЕЛЕВАЯ
(эксклюзионная)

3. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ - ВЭЖХ

ХРОМАТОГРАФИЯ ВЫСОКОГО ДАВЛЕНИЯ
Впервые реализовали в 1970 г
Шаба Хорват и С.Р. Лински
Эффективность разделения достигается
применением колонок с мелкодисперсными
частицами носителя неподвижной фазы

4. Схема жидкостного хроматографа

5.

6.

7. Распределительная ВЭЖХ

Н.ф. – жидкость, п.ф.- жидкость
• Метод основан на распределении вещества между
двумя несмешивающимися жидкостями.
• Разделение происходит из- за различий в
растворимости разделяемых веществ в неподвижной
и подвижной жидких фазах.

8. Неподвижные жидкие фазы

• Иммобилизованные неподвижные жидкие фазы
н.ж.ф. закреплена на поверхности носителя за счет сил
физической адсорбции.
• Химически закрепленные неподвижные жидкие
фазы
н.ж.ф. закреплена на поверхности носителя
химической связью.
• Носители – сферические пористые частицы на основе
сверхчистого оксида кремния диаметром 3 – 10 мкм.
Диаметр пор – 60 – 300 А˚.

9. Носители неподвижной фазы

10. Неподвижные жидкие фазы

На поверхности SiO2 находятся силанольные
группы, которые используют для химической
модификации поверхности неподвижной фазы.
CH3
Si OH + Cl Si R
CH3
CH3
Si O Si R + HCl
CH3

11. Неподвижные жидкие фазы

Полярность п.ф. и н.ф. всегда различается.
Нормально-фазовая хроматография
п.ф. – малополярная жидкость
н.ф. – полярная жидкость
Обращенно – фазовая хроматография
п.ф. –полярная жидкость
н.ф. – малополярная жидкость

12. Обращенные фазы

CH3
Si O Si
CH3
C8, C18

13. Нормальные фазы

R=
CH3
Si O Si
R
CH2
3
O
CH2 CH
OH
CH2
CH3
CH2
3
3
CN
NH2
CH2OH

14. Подвижные фазы

• В нормально-фазовой хроматографии п.ф. –
диэтиловый эфир, хлористый метилен, хлороформ,
регулируют полярность добавками гексана
(модификатор).
• В обращенно-фазовой хроматографии п.ф. –
метанол, ацетонитрил, тетрагидрофуран,
регулируют полярность добавками воды.

15. КОЛОНКИ

• Прямые трубки правильной формы из
нержавеющей стали.
• Для решения различных аналитических задач
выпускают колонки различного диаметра и длины.
Чаще с внутренним диаметром d = 3.9 и 4.6мм.
• Колонка d = 4.6 мм, заполненная частицами
диаметром 5 мкм имеет эффективность от 60000 до
90000 т.т./м при скорости потока 1 мл/мин.
• При длине колонки 25 см можно разделить от 50
до 100 пиков.

16. КОЛОНКИ

17. Детекторы

УФ-детекторы.
Флуоресцентные детекторы.
Рефрактометрические детекторы.
Электрохимические
детекторы(кондуктометрические,
кулонометрические, вольтамперометрические).
• Масс-спектрометрический детектор.

18. Заключение

• Жидкостная хроматография является фармакопейным
методом анализа и является значимым методом
определения фармакологически активных веществ, а
также вспомогательных веществ и примесей.