Генная инженерия бактерий

1. Генная инженерия бактерий

Выполнил студент 3 курса:
Юнусбаев Арслан Уралович

2.

3.

4.

• Маркерные последовательности
• Ориджин репликации
• Полилинкер

5. Классификация плазмид

• Коньюгативные плазмиды
• R-факторы
• Col-факторы
• Плазмиды биодеградации

6.

7. В клетках они могут существовать в 3 формах:

• ССС
• Форма релаксированного кольца
• Линейная форма плазмиды

8. Общая стратегия молекулярного клонирования

• Создание рекомбинатной ДНК
• Трансфекция

9. Выделение пДНК

1) рост бактерий и амплификация пДНК
2)лизис клеток
3)очистка плазмидной ДНК

10. Рост бактерий

11. Лизис культуры

• Физические:
-Баллистические методы
-Экструзия
-Чередование заморозки и разморозки
-Ультразвук
-Температурные шоки
• Химические:
-Детергентный лизис клеток
• Энзиматические
• Биологические:
-Апоптоз

12.

• ЭДТА разрыхляет наружную мембрану,
ингибирует нуклеазы
• Лизоцим – разрушает клеточную стенку.
• SDS разрушает цитоплазматическую
мембрану, денатурирует белки, ингибирует
нуклеазы.

13. Очистка плазмидной ДНК

• Отличие геномной и плазмидной ДНК:
- Масса и размер
- Плазмидная ДНК экстрагируется в виде
ковалентно замкнутых кольцевых молекул

14. Трансдукция

Капсид фага вмещает до 50 кб
Может вместить до 20 кб
Эффективность внедрения 100%
Имеет сильные промоторы

15. Космиды

Плазмиды с cos сайтами фага лямда
-Способны вместить до 40 кб чужеродной
ДНК
-Так как в их геном можно вмещать больше
генетической информации, то для создания
геномной библиотеки потребуется меньше
времени

16. Фазмиды

• Искусственные гибридные векторы на
основе фага и плазмиды

17. Искусственные бактериальные хромосомы

• Способны вместить до 300 кб чужеродной
ДНК
• Созданы на основе F плазмид