Клеточные технологии лечения

1. Клеточные технологии лечения

Санкт-Петербургский Государственный
Медицинский Университет имени
академика И.П.Павлова
Клеточные технологии
лечения
Галибин Олег Всеволодович

2. БОЛЕЕ 128 МИЛЛИОНОВ ЧЕЛОВЕК СТРАДАЮТ ЗАБОЛЕВАНЯМИ, ПОТЕНЦИАЛЬНО ИЗЛЕЧИМЫМИ МЕТОДАМИ КЛЕТОЧНОЙ И ГЕННОЙ ТЕРАПИИ Предполагается,

что количество таких пациентов
существенно возрастет по мере расширения
показаний к клеточной и генной терапии

3. Сравнение различных современных подходов к лечению заболеваний

не позволяет устранить необратимые изменения,
вызванные болезнью – невозможность полного излечения
в большинстве случаев – пожизненное лечение
Лекарственная
терапия
Органная
трансплантация
распространены случаи резистентности к терапии
неизлечимые заболевания
надежное
надежноевосстановление
восстановлениеутраченных
утраченныхфункций
функций
постоянная
постояннаяиммуносупрессивная
иммуносупрессивнаятерапия
терапиясс
последующими
последующимиосложнениями
осложнениями
катастрофическая
катастрофическаянехватка
нехваткадонорских
донорскихорганов
органов
надежное восстановление утраченных функций
при использовании собственных клеток нет
опасности отторжения
доступные источники донорского материала
Клеточная терапия
Наиболее физиологичный вариант терапии

4. Области применения клеточной терапии

• Онкологические и онкогематологические
заболевания
(лейкемия, лимфомы, множественная миелома,
анапластическая анемия, солидные опухоли)
• Аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка,
склеродермия, ревматоидный артрит)
• Кардиологические заболевания (сердечная
недостаточность)
• Нервные болезни (болезнь Паркинсона, рассеянный склероз,
посттравматические растройства, постинсультные состояния, болезнь
Альцгельмера, эпилепсия)
• Эндокринопатии (сахарный диабет,
надпочечниковая
недостаточность, гипотиреоз и гипопаратиреоз)
• Иммунодефицитные состояния
• Печеночная, почечная недостаточность
• Дефекты кожи, костной и хрящевой ткани

5. Актуальность

•В
РФ
зарегистрирован
о
более
3
миллионов
больных
сахарным
диабетом

6. Показания к трансплантации ОКПЖ (ВНИИТиИО

• СД 1 типа средней тяжести
1. Без осложнений
2. С осложнениями
- полинейропатия
- ретинопатия
- ангиопатия нижних конечностей
• СД 1 типа тяжелой формы
1. Лабильного течения без осложнений
2. Стабильного или лабильного течения с осложнениями
- полинейропатия
-
ретинопатия
ангиопатия нижних конечностей
нефропатия на стадии транзиторной протеинурии
смешанные осложнения

7. Способы трансплантации ОКПЖ

• Пункционно под фасцию прямой мышцы
живота
• В воротную вену через бужированную
пупочную вену
• Под капсулу или в пульпу селезенки во
время оперативных вмешательств
• В селезеночную артерию во время
ангиографического исследования почек
• Лапароскопически в серповидную
связку печени или в большой сальник

8. Динамика С-пептида у больных после трансплантации ОКПЖ

С-пептид
(пмоль/л) 0,07
0,06
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0
до
операции
1 неделя
1 месяц
3-6 месяцев
1 год

9. Динамика уровня гликемии у больных после трансплантации ОКПЖ

Гликемия 10
(ммоль/л)
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
до
1 неделя
операции
1 месяц
3-6
месяцев
9-12
месяцев

10. Широкую известность метод аллогенной трансплантации β–клеток приобрел после разработки многих его деталей исследовательской

группой Shapiro A.M.et al. (University of
Alberta)
• Основными особенностями
“эдмонтонского” протокола
являются методика
выделения островков из ПЖ
трупного донора и состав
комбинированной
иммуносупрессивной
терапии.
• Важной вехой
совершенствования
иммуносупрессивной
терапии в
посттрансплантационном
периоде стал отказ от
применения
глюкокортикостероидов.

11. Показания к трансплантации клеточных культур надпочечников

• Аддисонова болезнь
• Двусторонняя адреналэктомия в анамнезе
• Первично-хронический гипокортицизм
• Гормонзависимые формы бронхиальной
астмы

12. Динамика потребности больных в заместительной терапии после трансплантации КК надпочечников

Кортизон ацетат,
мг/сутки
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Двусторонняя АЭ
Односторонняя АЭ
Болезнь Аддисона
До
операции
14 суток
6 месяцев 12 месяцев

13. Динамика потребности больных в заместительной терапии после трансплантации КК надпочечников

Кортизон ацетат,
мг/сутки
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Двусторонняя АЭ
Односторонняя АЭ
Болезнь Аддисона
До
операции
14 суток
6 месяцев 12 месяцев

14. Динамика уровня трийодтиронина после трансплантации КК щитовидной железы

Т3, нмоль/л
2
1,8
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
2 недели
1 месяц
2 месяца 6 месяцев
9-12
месяцев

15. Постспленэктомический синдром

• Снижение иммунорезистентности организма
Снижение концентрации Ig A,M,G
Cнижение количества Т- и Влимфоцитов
Снижение фагоцитарной активности
лейкоцитов
Снижение активности комплемента
• Гиперкоагуляция за счет стойкого
тромбоцитоза
• Снижение общего тонуса и
работоспособности

16. Методы коррекции постсплеэктомического синдрома

КОНСЕРВАТИВНЫЕ
• иммуномодуляторы
• адаптогены
• вакцинация
• антиагреганты
• антикоагулянты
• лечение
инфекционных и
тромбоэмболических
осложнений
ХИРУРГИЧЕСКИЕ
• органная
трансплантация
селезенки
• аутотрансплантация
ткани селезенки
• аллотрансплантация и
ксенотрансплантация
культур клеток
селезенки

17. Флотирующая культура клеток селезенки (неонатальный донор) 5 сутки культивирования

18. Кисет из сальника с трансплантатом культуры клеток селезенки

19. Ксенотрансплантат культуры клеток селезенки на сроке 3 мес. после трансплантации

20.

Печеночная недостаточность - комплекс нарушений функций
печени, возникающий вследствие острого или хронического
воздействия на её клетки различных повреждающих факторов
(гепатотропных вирусов, токсинов, аутоиммунных факторов агрессии).
Причины
Основные поражающие факторы
Вирусные гепатиты
(острые и хронические)
Вирусы гепатита А,В,С,Д,Е,F(?),
цитомегаловирус, вирус простого герпеса
Токсические гепатиты
Ацетоминофен, Amanita phalloides,
CCl4, рифампицин, амиодарон
Васкулярные причины
Синдром Бада-Хиари, тромбоз v. portae, ОПН
при синдроме малого выброса
Другие причины
Дефекты метаболизма, аутоиммунный
гепатит, первичный билиарный цирроз и др.
William M. Lee NEJM 1993, Vol 329: 1862-1872.

21.

Методы коррекции печеночной
недостаточности
Методы эфферентной терапии
Общие принципы терапии
• Обменное переливание крови
• Контроль внутричерепного давления
с применением эпидуральных датчиков
• Плазмаферез
• Коррекция артериальной гипотонии
• Гемосорбция (Amberlite XAD-7)
• Метаболическая защита нейронов
• Предотвращение коагулопатии
• Профилактика почечной недостаточности
• Гемодиализ и гемофильтрация
(Система возвратной молекулярной • Энтеральная деконтаминация
адсорбции MARS)

22.

Методы клеточной терапии, используемые
при печеночной недостаточности
• Экстракорпоральные системы “Вспомогательная Печень”
(система ELAD Extracorporeal Liver Assist Device,
система Demetriou Cedars-Sinai Medical Center (USA))
• Трансплантация клеток
• Клеточно-инженерные конструкции (3D-gelmatrix, Caalginate hydrogel)

23.

Флотирующая культура клеток эмбриональной печени
Гепатоциты и клеточный детрит в культуре
8 сутки культивирования
10 сутки культивирования

24.

В эксперименте планируется выбор оптимального
органа депо для трансплантации флотирующей культуры
гепатоцитов
Трансплантация в карман сальника
Пункционная
трансплантация
паренхиму печени

25. Перспективы метода

• Поиск новых источников донорского
материала
ксеногенный материал
стволовые клетки
• Криоконсервация клеток
• Иммунологическое типирование
• Иммуноизоляция с использованием
полимерных носителей

26.

Инкапсулирование клеток - микрорепликация
Эхиноциты
Конфокальная микроскопия

27. Инкапсулирование клеточных культур

Альгинат –
хитозан (0,3%);
10 слоев
Альгинат –
хитозан с CaCl2
0,3M;
10 слоев

28. Results Alive Human Erythrocytes

Alginat – Poly-L-lysine
FITC labelled;
0,3mg/ml; 2 layers
Alginat – Poly-Llysine FITC labelled;
0,3mg/ml; 16 layers
Alginat – Poly-Llysine FITC labelled;
1 mg/ml; 2 layers

29. Инкапсулированная культура клеток селезенки