Практическое занятие по основам биохимии с методами клинико-биохимических исследований
ОБНАРУЖЕНИЕ УГЛЕВОДОВ
Реакция №1 «Проба Биаля (обнаружение пентоз)»
Берут пробирку, подписывают и наливают 5 мл реактива Биаля
Добавляют 1 мл мочи
Пробирку нагревают до кипения
При положительной реакции появляется желто-зеленое окрашивание. В моче здорового человека пентозы не обнаруживаются
Реакция №2 «Проба Велька (обнаружение лактозы и мальтозы)»
Берут три пробирки и номеруют
В 1-ю пробирку добавляют 5 мл мочи
Во 2-ю пробирку добавляют 5 мл раствора лактозы (1% раствор)
В 3-ю пробирку добавляют 5 мл раствора мальтозы (1% раствор)
Во все три пробирки прибавляют 2,5 мл раствора аммиака
Затем во все 3 пробирки добавляем 200 мкл (0,2 мл) раствора КОН (20% раствор)
Пробирки нагревают на водяной бани 30 минут при 600С
При наличие лактозы появляется коричневая окраска (пробирка №2)
При наличие мальтозы появляется красная окраска (пробирка №3)
В моче здорового человека мальтоза и лактоза не обнаруживается (пробирка №1)
Реакция №3 «Проба Селиванова (обнаружение фруктозы»
Берут 2 пробирки, номеруют
В 1-ю пробирку вносят 2 мл мочи
Во 2-ю пробирку вносят 2 мл раствора фруктозы (1% раствор)
После чего в каждую пробирку приливают по 1 мл раствора резорцина
Пробирки нагревают до закипания
При положительной пробе развивается интенсивное красное окрашивание (пробирка №2)
В норме окраска не появляется (пробирка №1)
Реакция №4 «Обнаружение крахмала»
Берут пробирку и подписывают её
Добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)
Затем добавляют 1-2 капли раствора йода
При положительной реакции на йод появляется ярко-синее окрашивание
СВОЙСТВА УГЛЕВОДОВ
Реакция №5 «Реакция Троммера»
Берут 4 пробирки и номеруют
В 1-ю пробирку добавляют 10 капель раствора глюкозы (1% раствор)
Во 2-ю пробирку добавляют 10 капель раствора мальтозы (1% раствор)
В 3ю пробирку добавляют 10 капель раствора сахарозы (1% раствор)
В 4-ю пробирку добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)
После чего в каждую пробирку добавляют по 10 капель гидроокиси натрия (NaOH 10% раствор)
Затем в каждую пробирку добавляют по 2 капли сульфата меди (CuSO4 5% раствор)
Каждую пробирку осторожно нагревают до кипения
В пробирках с глюкозой (пробирка №1) и мальтозой (пробирка№2), где проба положительная выпадает осадок кирпично-красного цвета
В пробирках с сахарозой (пробирка №3) и крахмалом (пробирка№4) реакция отрицательная (изменения цвета не происходит)
Реакция №6 «Реакция Ниландера»
Берут 4 пробирки и номеруют
В 1-ю пробирку добавляют 10 капель раствора глюкозы (1% раствор)
Во 2-ю пробирку добавляют 10 капель раствора мальтозы (1% раствор)
В 3ю пробирку добавляют 10 капель раствора сахарозы (1% раствор)
В 4-ю пробирку добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)
После чего в каждую пробирку добавляют по 10 капель реактива Ниландера
Каждую пробирку осторожно кипятят 2 минуты
В пробирках с глюкозой (пробирка №1) и мальтозой (пробирка№2), где проба положительная появляется темно-коричневое окрашивание
В пробирках с сахарозой (пробирка №3) и крахмалом (пробирка№4) реакция отрицательная (изменения цвета не происходит)
Надеемся, что наша инструкция поможет вам не сделать ошибок в практической работе. Желаем удачи!
Составитель: Кузнецова Т.Н. – преподаватель дисциплины «Основы биохимии с методами клинико-биохимических исследований» Москва
25.66M
Категория: ХимияХимия

Практическое занятие по основам биохимии с методами клинико-биохимических исследований. «Химия углеводов»

1. Практическое занятие по основам биохимии с методами клинико-биохимических исследований

Практическое занятие
по основам биохимии с
методами клиникобиохимических исследований
«ХИМИЯ УГЛЕВОДОВ»

2. ОБНАРУЖЕНИЕ УГЛЕВОДОВ

Качественные реакции на углеводы позволяют
определить их присутствие в различных
биологических
жидкостях
и
провести
дифференциацию моно-, ди- и полисахаридов.
В клинической лабораторной практике этими
реакциями пользуются для обнаружения в моче
лактозы, мальтозы и пентоз, что имеет
диагностическое значение.

3. Реакция №1 «Проба Биаля (обнаружение пентоз)»

Принцип:
пентозы
с
орцином
и
треххлористым железом в кислой среде
образуют при нагревании соединение желтозеленого цвета.

4.

Реактивы :
• 1) орцин (5-метилорцин);
• 2) концентрированная хлористоводородная кислота;
3) треххлористое железо FeCI3 x 6H2O, 10%
раствор;
• 4) реактив Биаля (1 г орцина растворяют в 500 мл
хлористоводородной кислоты и добавляют 1 мл
10% раствора треххлористого железа);
• 5) моча;

5. Берут пробирку, подписывают и наливают 5 мл реактива Биаля

6. Добавляют 1 мл мочи

7. Пробирку нагревают до кипения

8. При положительной реакции появляется желто-зеленое окрашивание. В моче здорового человека пентозы не обнаруживаются

(отрицательный результат)

9. Реакция №2 «Проба Велька (обнаружение лактозы и мальтозы)»

Принцип: лактоза и мальтоза с аммиаком в
щелочной среде образуют при нагревании
окрашенные соединения.

10.

Реактивы :
• 1) аммиак водный, концентрированный;
• 2) гидроокись калия, 20% раствор;
• 3) 1% раствор лактозы;
• 4) 1% раствор мальтозы;
• 5) моча.

11. Берут три пробирки и номеруют

12. В 1-ю пробирку добавляют 5 мл мочи

13. Во 2-ю пробирку добавляют 5 мл раствора лактозы (1% раствор)

14. В 3-ю пробирку добавляют 5 мл раствора мальтозы (1% раствор)

15. Во все три пробирки прибавляют 2,5 мл раствора аммиака

16. Затем во все 3 пробирки добавляем 200 мкл (0,2 мл) раствора КОН (20% раствор)

17. Пробирки нагревают на водяной бани 30 минут при 600С

18. При наличие лактозы появляется коричневая окраска (пробирка №2)

19. При наличие мальтозы появляется красная окраска (пробирка №3)

20. В моче здорового человека мальтоза и лактоза не обнаруживается (пробирка №1)

21. Реакция №3 «Проба Селиванова (обнаружение фруктозы»

Принцип: при
нагревании фруктозы с
резорцином в кислой среде
образуются соединения,
окрашенные в красный цвет.

22.

Реактивы :
• 1) HCl, 1 моль/л;
• 2) резорцин (5 г в 1 моль/л раствора HCl);
• 3) моча;
• 4) 1% раствор фруктозы.

23. Берут 2 пробирки, номеруют

24. В 1-ю пробирку вносят 2 мл мочи

25. Во 2-ю пробирку вносят 2 мл раствора фруктозы (1% раствор)

26. После чего в каждую пробирку приливают по 1 мл раствора резорцина

27. Пробирки нагревают до закипания

28. При положительной пробе развивается интенсивное красное окрашивание (пробирка №2)

29. В норме окраска не появляется (пробирка №1)

30.

Оценку пробы проводят в момент закипания, так
как при длительном кипячении окраска может
появиться при наличии глюкозы (при
небольшой концентрации глюкозы образуется
красно-бурый осадок). Пищевая нагрузка медом
и фруктами может дать положительную пробу.

31. Реакция №4 «Обнаружение крахмала»

Принцип: крахмал
с йодом образует
окрашенное соединение синего
цвета.

32.

Реактивы :
• 1) 1% раствор крахмала;
• 2) йод, 1% раствор в 2% растворе йодида калия.

33. Берут пробирку и подписывают её

34. Добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)

35. Затем добавляют 1-2 капли раствора йода

36. При положительной реакции на йод появляется ярко-синее окрашивание

37. СВОЙСТВА УГЛЕВОДОВ

Моносахариды и некоторые
дисахариды, имеющие свободную
карбонильную группу, обладают
способностью восстанавливать в щелочной
среде металлы из окислов в закисные формы
или свободное состояние. Этим свойством
пользуются в практике для обнаружения
глюкозы в крови и моче.

38. Реакция №5 «Реакция Троммера»

Принцип: глюкоза в щелочной среде
восстанавливает окись меди в закись, при этом сама
окисляется до глюконовой кислоты.

39.

Реактивы :
• 1) глюкоза, 1% раствор;
• 2) мальтоза, 1% раствор;
• 3) сахароза, 1% раствор;
• 4) крахмал, 1% раствор;
• 5) гидроокись натрия, 10% раствор;
• 6) сульфат меди, 5% раствор.

40. Берут 4 пробирки и номеруют

41. В 1-ю пробирку добавляют 10 капель раствора глюкозы (1% раствор)

42. Во 2-ю пробирку добавляют 10 капель раствора мальтозы (1% раствор)

43. В 3ю пробирку добавляют 10 капель раствора сахарозы (1% раствор)

44. В 4-ю пробирку добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)

45. После чего в каждую пробирку добавляют по 10 капель гидроокиси натрия (NaOH 10% раствор)

46. Затем в каждую пробирку добавляют по 2 капли сульфата меди (CuSO4 5% раствор)

47. Каждую пробирку осторожно нагревают до кипения

48. В пробирках с глюкозой (пробирка №1) и мальтозой (пробирка№2), где проба положительная выпадает осадок кирпично-красного цвета

(закись меди)

49. В пробирках с сахарозой (пробирка №3) и крахмалом (пробирка№4) реакция отрицательная (изменения цвета не происходит)

50. Реакция №6 «Реакция Ниландера»

Принцип: Глюкоза, окисляясь, восстанавливает
висмут до гидрата закиси или свободного состояния.

51.

Реактивы :
• 1) глюкоза, 1% раствор;
• 2) мальтоза, 1% раствор;
• 3) сахароза, 1% раствор;
• 4) крахмал, 1% раствор;
• 5) реактив Ниландера (в фарфоровой ступке
смешивают 2 г нитрата висмута и 4 г сигнетовой
соли. При тщательном растирании добавляют
небольшими пропорциями 10 мл 10% раствора
гидроокиси натрия. Фильтруют, хранят в склянке
тёмного стекла на холоде).

52. Берут 4 пробирки и номеруют

53. В 1-ю пробирку добавляют 10 капель раствора глюкозы (1% раствор)

54. Во 2-ю пробирку добавляют 10 капель раствора мальтозы (1% раствор)

55. В 3ю пробирку добавляют 10 капель раствора сахарозы (1% раствор)

56. В 4-ю пробирку добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)

57. После чего в каждую пробирку добавляют по 10 капель реактива Ниландера

58. Каждую пробирку осторожно кипятят 2 минуты

59. В пробирках с глюкозой (пробирка №1) и мальтозой (пробирка№2), где проба положительная появляется темно-коричневое окрашивание

60. В пробирках с сахарозой (пробирка №3) и крахмалом (пробирка№4) реакция отрицательная (изменения цвета не происходит)

61. Надеемся, что наша инструкция поможет вам не сделать ошибок в практической работе. Желаем удачи!

62. Составитель: Кузнецова Т.Н. – преподаватель дисциплины «Основы биохимии с методами клинико-биохимических исследований» Москва

2008 год
English     Русский Правила