Виды ВЭЖХ по технике исполнения

1.

Виды ВЭЖХ по технике исполнения
Хроматография
Жидкостная
Колоночная
Бумажная
Планарная
Тонкослойная

2. Планарная (тонкослойная) хроматография

3.

Разделение веществ происходит на открытом
слое сорбента
Хроматографический процесс обеспечивается
передвижением подвижной фазы (элюента)
посредством капиллярных сил

4.

Определение Rf и Rst
b
Rf
a
b
Rst
a

5.

Rf зависит от:
«Активности» и качества сорбента
Природы и качества растворителей
Толщины слоя сорбента
Количества нанесенного вещества
Способа работы
Коэффициент разделения 2-х соединений
K2/1 = D2/D1 = (1/Rf – 1)2 / (1/Rf – 1)1

6. Достоинства планарной хроматографии

7.

- единственный хроматографический метод,
который позволяет проводить полный анализ
неизвестной смеси, т.к можно проверить, не осталось
ли на старте неэлюированных компонентов;
- по производительности, по крайней мере, на
порядок, превосходит газовую и высокоэффективную
жидкостную хроматографию;
- используется более простое и дешевое
оборудование;

8.

-обладает высокой селективностью, которую легко
варьировать, подбирая состав подвижной фазы;
- нет ограничений как в ВЭЖХ на выбор
растворителей;
- дает возможность одновременного разделения
нескольких образцов в условиях однократного или
многократного элюирования (при различных
условиях);
- возможность детектировать соединения с высокой
чувствительностью и селективностью, которые легко
варьировать, подбором проявляющего реагента;

9.

Недостатки планарной
хроматографии

10.

-ограниченная разделяющая способность из-за
сравнительно небольшой длины разделяющей зоны (310 см);
-чувствительность ниже, чем в случае ВЭЖХ;
-зависимость от окружающей среды: относительная
влажность, температура, а также наличие
загрязняющих веществ в воздухе;
- трудности в работе с образцами, имеющими высокую
летучесть, а также с веществами, чувствительными к
кислороду воздуха или свету.

11.

Области применения плоскостной
хроматографии

12.

Методы элюирования в планарной
хроматографии

13.

14.

15.

16. Круговая хроматография

Подача элюента
Нанесение пробы
Зоны разделяемых
компонентов
Пластинка
Емкость с элюентом
Подача элюента

17.

При нанесении пробы необходимо:
- легкое удаление растворителя со стартовой зоны;
- растворимость анализируемых веществ должна быть
не менее 0,01 г/мл;
- растворитель не должен иметь высокую полярность,
иначе зона на старте может быть размыта.

18.

19.

20.

21.

22.

23.

Подложки: стекло, алюминевая фольга,
полимерные пленки
Связующие вещества : гипс (5-10%),
силиказоль, силикаты щелочных металлов,
полиакриламид, полиакриловый эфир, крахмал
Флуоресцентный индикатор: смесь
силикатов цинка и магния и смесь сульфидов
цинка и кадмия; вольфраматы
щелочноземельных элементов

24.

Требования к сорбентам в ТСХ
- образуют химически и физически стабильные слои;
- не образуют ковалентных связей с разделяемыми
веществами;
- не растворяются в подвижной фазе или
перемещаются вместе с ней по пластинке;
- не содержат компонентов, мешающих разделению
или детектированию
- не имеют собственной окраски;
- не набухают и не сжимаются под действием
подвижной фазы.

25.

Предварительная подготовка слоя сорбента
- промыть пластинку
- активировать пластинку
- активироавнную пластинку хранить в
эксикаторе
вакуум-
- при нанесении пробы рабочую область
платинки предохранять покровной стеклянной
пластинкой

26.

Влияние относительной влажности на разделение ПАУ

27.

28.

Основные типы сорбентов в ТСХ

29.

Силикагель - полярный адсорбент, содержит
активные силанольные и силоксановые группы.
Применяют для разделения соединений различной
полярности.
Оксид алюминия
- полярный адсорбент с
гетерогенной поверхностью, содержит активные ОНгруппы, заметно выражены протоноакцепторные
свойства. Применяют для разделения ароматических
углеводородов, алкалоидов, хлоруглеводородов,
стероидов

30.

31.

Разделение органических соединений с
различными функциональными группами на
слоях силикагеля
hRf
Алифатические углеодороды
Неполярный
Простые эфиры
Сложные эфиры
Карбонильные соединения
Фенолы и спирты
Карбоновые кислоты
Полярный

32.

Хроматограмма разделения L-аминокислот
1- лейцин, 2- метионин, 3-фенилаланин, 4- валин, 5 – смесь кислот
ПФ – хлороформ:этанол:CH3COOH:H2O
А- пластинки «Сорбфил», высокоэффективный вариант,
Б – пластинки «Сорбфил», аналитический вариант

33.

Некоторые характеристики
ТСХ- и ВЭТСХ пластинок

34.

Устройство для высокоэффективной тонкослойной
хроматографии под давлением

35.

36.

Выбор подвижной фазы

37.

Треугольная диаграмма по Шталю

38.

Методы подбора и оптимизации
состава подвижной фазы

39.

Стандартные системы для
адсорбционной ПХ:
Хлороформ – метанол
Хлороформ – ацетон
Диэтиловый эфир – толуол
Диэтиловый эфир – гексан – уксусная кислота
Этилацетат – метанол
Этилацетат - толуол

40.

Стандартные системы для
распределительной ПХ:
Хлороформ – метанол – вода
Хлороформ – метанол – вода – уксусная кислота
Хлороформ – метанол – вода – водный аммиак
Бутанол-1 – уксусная кислота – вода
Бутанол-1 – пиридин – вода
Этилацетат – муравьиная кислота – вода

41.

Метод «элюирования» пятна

42.

Схема подбора ПФ фирмы «Camag»

43.

Идентификация компонентов
- физическими методами, основанными на поглощении
света и флуоресценции
- химическими методами
- с «универсальными реагентами»
- с реагентами, которые избирательно реагируют с
определенными функциональными группами
исследуемых соединений.

44.

45.

46. Количественный анализ в тонкослойной хроматографии

47.

Определение с удалением хроматографической зоны с
пластинки
Проводят двояко:
переносом хроматографической зоны вместе с сорбентом
экстрагированием хроматографической зоны со слоя
сорбента
Определение определяемых соединений
непосредственно на пластинке
Метод визуального сравнения размеров площадей пятен и их
окраски с соответствующими параметрами пятен стандартных
образцов

48.

49.

50.

Использование метода денситометрии
Сканирование хроматограмм в видимом и УФ-свете с
помощью «хроматографических спектрофотометров» –
денситометров.
Измеряется:
поглощение света веществом на хроматограмме в режиме
пропускания или отражения;
флуоресценция и ее гашение.

51. Денситометрические измерения

52. Денситометрические измерения

53. Денситометрические измерения

54.

Использование метода видеоденситометрии
Введение изображения хроматограммы в компьютер с
помощью видеокамеры или цифровой камеры;
сравнением интенсивностей пятен стандартных
соединений и исследуемых образцов.
Использование денситометрии с планшетным
сканером.

55.

56.

Вид пространственного распределения
яркости в области пятна
Аi,j – значение уровня яркости точки пятна; Вi,jзначение уровня яркости точки на базовой поверхности.

57.

обработку пятна в видеоденситометрии
проводят по двум характеристикам:
площади пятна;
его «объему» в пространстве;
в качестве третьей координаты используют
яркость (интенсивность окраски пятна)

58.

59.

2 см
4 см
3 см
7 см

60. Примеры определений

61.

Денситограмма ТСХ-хроматограммы питьевой воды с
добавкой гербицидов (20 нг в пробе)
1 – метоксурон; 2 – монурон; 3 – хлортолурон; 4 – небурон; 5 – линурон
при различных длинах волн (200; 220; 240; 260; 280; 300 нм).

62.

Разделение тетрациклиновых антибиотиков
1 – хлортетрациклин;
2 – тетрациклин;
3 – окситетрациклин.
Сорбент – силикагель RP-18W;
ПФ: 0,5 М водный раствор щавелевой кислоты – метанол – ацетонитрил
(6:2:2)

63.

Определение теофилина в
антиастматическом препарате «Solosin»
1 – о-карбамилфеноксиуксусная кислота; 2 - теофилин
Сорбент: силикагель NH2
ПФ: этанол – 5% раствор этиламина в воде (95:5)

64.

Разделение аминокислот
Пластинки – «Сорбфил» ПТСХ-П-В;
ПФ: пропанол-2 – этилацетат – 25% аммиак – вода (30:10:3,5:10)

65.

66.

alliin
аланин
NH2 —CH2 —CH2 —COOH

67.

Хроматограммы красящих композиций
некоторых популярных тонов коммерческих
оттеночных шампуней: a – «бургунский», b –
«серебристый» или «платиновый», c –
«вишневый» или «вишня», d: 1 – «шоколад», 2 –
«коньяк», 3 – «красное дерево».

68.

Хроматограммы коммерческих образцов хны и басмы: a –
хна «иранская», b – хна, басма и индивидуальный лаусон, c –
образцы хны, красящие в разные цвета: 1 – хна «медная», 2 хна «гранатовая», 3 – хна «фиолетовая», 4 – хна «розовая».

69.

Благодарю за внимание