Энтеровирусы. Возбудители вирусных гепатитов

1. Лекция «Энтеровирусы. Возбудители вирусных гепатитов»

ГОУ ВПО Кировская ГМА
Кафедра микробиологии с вирусологией и иммунологией
Лекция
«Энтеровирусы.
Возбудители
вирусных
гепатитов»
Лектор: к.м.н. Е.И. КОРОТКОВА

2. План лекции

1.
2.
3.
4.
5.
Общая характеристика пикорнавирусов.
Вирус полиомиелита.
Вирус гепатита А.
Вирус гепатита В.
Вирусы гепатитов E, F, D, C, G, TTV и SEN.

3. Общая характеристика пикорнавирусов

Таксономия
Семейство:
Род:
Picornaviridae (от итал. piccolo –
маленький, от англ. rna – РНК)
Enterovirus
Hepatovirus
Rinovirus
Cardiovirus
Aphtovirus

4. Общая характеристика пикорнавирусов

Мелкие размеры – 20-30 нм;
Простое строение («голые») –
отсутствие суперкапсида;
Геном – несегментированная односпиральная
(+) РНК, связанная с внутренним белком VPg;
Тип симметрии нуклеокапсида – кубический
(икосаэдрический);
Синтез, сборка новых вирионов – в цитоплазме;
Внутриклеточно – кристаллоподобные
включения;
Резистентны к кислотам, эфиру, детергентам.

5.

Роль в патологии
Энтеровирусы:
• вирус полиомиелита – полиомиелит;
• вирусы Коксаки А и В (1948 г. Г. Долдорф, Г. Сикл в г.
Коксаки, США – из кишечника детей с полиомиелитоподобными заболеваниями), ЕСНО (Enteric Cytopatogenic
Human Orphans – «кишечные цитопатогенетические
вирусы-сиротки человека», 1951-1953 гг. Дж. Мельник),
типов 68-71 – полиомиелитоподобные заболевания,
острые кишечные и респираторные инфекции, поражение
сердечно-сосудистой системы.
Гепатовирусы – вирусный гепатит А.
Риновирусы – ОРВИ.
Кардиовирусы – миокардиты.
Афтовирусы – ящур у животных,
у человека – миокардит с
везикулярным поражением кожи
и слизистых.

6.

Полиомиелит (от греч. polios – серый, myelos –
спинной мозг) – острое инфекционное
вирусное заболевание,
характеризующееся поражением нейронов
продолговатого и передних рогов
спинного мозга, сопровождающееся
развитием вялых парезов и параличей
преимущественно нижних конечностей и
туловища.

7. Историческая справка

• 1909 г.: К. Ландштайнер и Г. Поппер – выделили
вирус из спинного мозга умершего от
полиомиелита ребенка путем заражения обезьян.

8. Таксономия

Семейство – Picornaviridae
Род – Enterovirus
Тип – Poliovirus (вирус полиомиелита) I, II и III типов

9.

Геном
• несегментированная односпиральная (+) РНК.
• Тип симметрии нуклеокапсида – икосаэдрический
(60 белковых субъединиц – капсомеров).
Морфология
• Форма – «ягода малина»;
• Размеры – 22-30 нм;
• Простая организация:
РНК, связанная с внутренним
белком VPg;
4 капсидных белка –
VP-1, VP-2, VP-3 и VP-4
(VP-1 поверхностно расположен,
а VP-4 связан с РНК).

10. Антигенная структура

Общий комплементсвязывающий антиген (в РСК);
Типоспецифический капсидный антиген (в РН).

11. Особенности репродукции вируса

1.
2.
3.
4.
5.
6.
Адсорбция на
липопротеиновых
рецепторах
чувствительных клеток.
Проникновение в клетку
путем виропексиса
(впячивание ЦПМ внутрь и образование вакуоли с
вирусом).
Депротеинизация – освобождение РНК.
Эклипс-фаза – репликация РНК и синтез вирусных
белков в цитоплазме на рибосомах (сначала
синтезируется макрополипептид, который
ферментами разрезается на капсомерные и
внутренний белки, протеазу, РНК-транскриптазу).
Сборка вирионов.
Выход вирионов с лизисом клетки.

12. Культивирование

• В культуре клеток – перевиваемых (Vero, Hela,
Hep-2, KB) и первичных (фибробласты эмбриона
человека, почек обезьян);
• В организме обезьян;
• В куриных эмбрионах не культивируются.

13. Резистентность

Устойчивы во внешней среде:
• в сточных водах при 00С – 30 дней, при -200С –
несколько лет:
• к детергентам;
• эфиру;
• низким рН.
Чувствительны:
• к повышенной температуре (500С – 30 минут,
кипячение – мгновенно);
• УФЛ;
• высушиванию;
• хлорсодержащим дезинфектантам.

14. Эпидемиология

Источник инфекции – больные и вирусоносители.
Механизмы передачи инфекции:
• Фекально-оральный (пути – водный,
алиментарный, контактно-бытовой);
• Аэрогенный (путь – воздушно-капельный).
Наиболее восприимчивы дети.
Инкубационный период – 7-12 дней.

15. Патогенез и клинические особенности

Первичная репродукция в входных воротах:
эпителиальных клетках полости рта,
носоглотки, кишечника, в лифматических тканях
(глоточном кольце Пирогова, пейеровых
бляшках).
Первичная вирусемия.
Диссеминация в органы, кроме ЦНС (при
наличии антител – абортивная инфекция).
Вторичная вирусемия.
Иммунные комплексы повышают
проницаемость ГЭБ
вирус проникает в
двигательные нейроны передних рогов
спинного мозга и головной мозг
необратимые изменения (в цитоплазме
нейронов – кристаллоподобные включения).

16. Клинические формы полиомиелита:

• Иннапарантная – бессимптомно.
• Абортивная – катаральная и желудочнокишечная.
• Паралитическая – повышение
температуры до 400С,
вялые парезы и
параличи преимущественно нижних
конечностей и туловища.

17. Иммунитет

• Приобретенный пассивный (плацентарный)
иммунитет – 4-5 недель жизни ребенка.
• Постинфекционный иммунитет – стойкий
пожизненный.

18. Микробиологическая диагностика

Исследуемый материал – рото-глоточные смывы
(первые 3 дня), фекалии (1-2-я недели), СМЖ,
кровь, при летальном исходе – секционный
материал (кусочки спинного, головного мозга,
миокарда, стенки тонкого кишечника).
1. Вирусологический метод – заражение
перевиваемых (Vero, Hela, Hep-2, КВ) или
первичных (фибробласты эмбриона человека,
почек обезьян) культур клеток; индикация в
пробирочных культурах – по ЦПД, на матрасах – по
бляшкообразованию, идентификация в РН.
2. Серологический метод – РСК, РН, ИФА.
3. Молекулярно-биологический метод – ПЦР.

19. Специфическая профилактика

Плановая вакцинация – живая пероральная
полиомиелитная вакцина из аттенуированных
штаммов вируса полиомиелита I, II и III типов,
предложенных А. Сэбином в 1956 г. (выращены на
первичной культуре клеток почек зеленых мартышек).
• Вакцинация: 3 – 4,5 – 6 мес.;
• Ревакцинация: 18, 20 мес. и 14 лет
однократно.
+ формируется общий
гуморальный и местный
иммунитет кишечника.
Спецефическое лечение –
донорский иммуноглобулин.

20.

Вирусные гепатиты – группа
полиэтиологичных антропонозных
вирусных поражений печени с
различными механизмами и путями
передачи возбудителей,
характеризующихся преимущественно
диффузным воспалительным процессом
в печеночной ткани с развитием
интоксикационного, астеновегетативного и
желтушного синдромов.

21. Вирусы – возбудители гепатитов человека

РНК-содержащие вирусы
Семейство
Picorna
viridae
Семейство
Calici
viridae
Семейство
Paramyxo
viridae
Вирус
гепатита
А (HAV)
Вирус
гепатита
Е (HEV)
Вирус
гепатита F
(HFV)
Семейство
Flaviviridae
ДНК-содержащие вирусы
Дельта
-агент
?
Вирус
гепатита
C (HCV)
Фекально-оральный
механизм заражения
Вирус
гепати
та G
(HGV)
Вирус
гепати
та D
(HDV)
Семейство
Hеpodn
oviridae
Семейство
Parvo
viridae
?
Вирус
гепатита
B (HBV)
Вирус
гепатита
TTV
(transfusion
transmitted
virus)
Вирус
гепати
та SEN
Парентеральный механизм заражения
Антигенная структура для идентификации
HA-Ag
HE-Ag
Не
установ
лены
HC-Ag
Не
установ
лены
HD-Ag
HBs-Ag
HBs-Ag
HBc-Ag
HBe-Ag
HBx-Ag
Не
установ
лены
Не
уста
новле
ны

22.

Гепатит А (синонимы: инфекционный,
эпидемический гепатит, болезнь Боткина) –
острое инфекционное заболевание с фекальнооральным механизмом передачи,
характеризующееся поражением печени.
Историческая справка
• 1888 г.: А. Боткин описал заболевание.
• 1973 г.: С. Фейстоун – выделил вирус в фекалиях
больных с помощью иммунной электронной
микроскопии (ИЭМ).

23. Таксономия

Семейство – Picornaviridae
Род – Hepatovirus (Enterovirus)
Тип – HAV = Hepatitis A virus (тип 72)

24.

Геном
• Линейная несегментированная однонитевая
(+) РНК.
• Тип симметрии нуклеокапсида – кубический (32
капсомера).
Морфология
• Форма – икосаэдрическая;
• Размер – 27-32 нм;
• Простоорганизованный: РНК, белки VP1-4,
протеазы и полимераза вируса.
Антигенная структура
• HA-Ag – видоспецифический,
связан с капсидными белками.

25. Культивирование

• В организме обезьяны шимпанзе, мармозеты;
• В культуре клеток – перевиваемых (Hela, Hep-2) и
первичных (фибробласты эмбриона человека,
почек африканской зеленой мартышки);
• В куриных эмбрионах не культивируются.

26. Резистентность

Устойчив во внешней среде:
• При низкой температуре (-200С) – годами, при
комнатной температуре (210С) – несколько
недель, 600С – 12 часов, 1000С – 5 минут;
• К кислотам, щелочам, эфиру;
• В растворе формалина – 3 дня, хлорамина – 30
минут;
• В воде – 3-10 месяцев;
• В экскрементах – 30 суток.
Чувствителен к УФО и высушиванию.

27. Эпидемиология

Источник инфекции – больной человек.
Механизм передачи – фекально-оральный (пути –
водный, алиментарный, контактно-бытовой).
Осенне-зимняя сезонность.
Чаще болеют дети от 3 до 10 лет.

28. Патогенез и клинические особенности

1. Внедрение через ЖКТ с первичной репродукцией в
энтероцитах тонкого кишечника и регионарных
лимфотических узлах (инкубационный период ≈ 30
дней).
2. Вирусемия и первичная генерализация инфекции
(продромальный период ≈ 5-7 дней – два варианта:
гриппоподобный и диспепсический).

29. Патогенез и клинические особенности

3. Вторичная репродукция в гепатоцитах: оказывает
прямое цитопатическое действие на гепатоциты с их
некрозом, нарушением всех видов обмена, особенно
билирубинового (стадия разгара ≈ 2-3 недели – потеря
аппетита, тошнота, рвота, боль в области правого
подреберья, холурия (потемнение мочи), ахолия
(светлый кал), желтушное окрашивание кожи и
слизистых).

30.

Патогенез и клинические особенности
4. Вторичная вирусемия и генерализация инфекции.
5. Иммуногенез и высвобождение организма от
возбудителя с полным выздоровлением.
Иммунитет
Постинфекционный иммунитет – гуморальный,
стойкий, пожизненный.

31. Микробиологическая диагностика

Исследуемый материал – фекалии, кровь.
1. Серологический метод (основной) – ИФА, РИА, ИЭМ:
• HAV-Ag в фекалиях и в сыворотке крови в конце
инкубационного и преджелтушном периоде (маркер
острой инфекции);
• анти-HAV-IgM в сыворотке крови с конца
инкубационного периода и 4-6 месяцев после
выздоровления (маркер острой инфекции);
• анти-HAV-IgG в сыворотке крови со 2-3 недели
болезни и пожизненно (перенесенный гепатит).
2. Молекулярно-биологический метод – ПЦР:
• HAV-РНК в сыворотки крови (маркер острой
инфекции).

32.

Специфическая профилактика
По эпидпоказаниям:
• Пассивная при контакте с
больным – донорский γ-глобулин;
• Активная – вакцина против гепатита А
культуральная концентрированная очищенная
инактивированная адсорбированная жидкая
(ГЕП-А-ин-ВАК): инактивированные формалином
вирусы, выращенные в культуре перевиваемых
клеток и адсорбированные на гидроокиси
алюминия.
Специфическое лечение не существует.

33.

Гепатит В – инфекционное вирусное
заболевание с парентеральным механизмом
передачи, характеризующееся поражением
печени с развитием симптомокомплекса острого
и хронического гепатита.
Историческая справка
• 1965 г.: Б. Блюмберг – из крови австралийского
аборигена выделил HBs-Ag
(«австралийский антиген»).
• 1970 г.: Д. Дейн – вирус гепатита В.

34. Таксономия

Семейство – Hepadnoviridae (от лат. hepa – печень,
от англ. dna – ДНК)
Род – Orthohepadnovirus
Тип – HBV (Hepatitis B virus)

35.

Геном
• Двухнитевая кольцевая молекула ДНК («плюсцепь» на 30% короче «минус-цепи»);
• Тип симметрии нуклеокапсида – кубический.

36.

Морфология
Частица Дейна
• Форма – сферическая;
• Диаметр – 42-45 нм;
• Организация – сложная:
Сердцевина (нуклеокапсид) –
ДНК, капсидные белки,
ДНК-полимераза;
Снаружи – суперкапсид.
Мелкие сферические частицы
диаметром 22 нм, тубулярные
формы размером 22×50-230 нм
– частицы свободной оболочки
(HBs-антигена), лишенные ДНК,
не проявляющие
инфекционные свойства.

37.

Антигенная структура
1.
2.
3.
4.
HBs-Ag (superficiales – поверхностный) – белок внешней
оболочки, включает 2 фрагмента: preS1 – иммуногенный,
preS2 – рецепторный. Различают 4 субтипа: adw, adr, ayw,
ayr. Появляется в крови через 1,5 месяца после
инфицирования.
(При хроническом гепатите высокое содержание HBs-Ag
в крови – внедрения генома вируса в генотип гепатоцита с
преобладанием синтеза оболочки над компонентами
сердцевины).
HBcor-Ag (cor – сердцевина) – сердцевинный, белковой
природы, в крови в свободном виде не определяется,
только в ядрах или цитоплазме гепатоцитов (маркер
репликации вируса в клетках печени).
HBe-Ag (антиген инфекциозности) – секретируемая
растворимая часть HBcor-Ag, индикация HBe-Ag в крови
подтверждает наличие HBcor-Ag в гепатоцитах
(показатель активной инфекции).
HBx-Ag – белковый сердцевинный антиген, малоизучен,
опосредует злокачественную трансформацию
гепатоцитов.

38. Особенности репродукции вируса

• Репродукция в гепатоцитах.
• Сначала короткая цепь ДНК достраивается по
длинной с помощью ДНК-полимеразы.
Культивирование
• Не культивируется в лабораторных условиях.
• Восприимчивые животные – шимпанзе.

39. Резистентность

Устойчив к низким и высоким температурам,
химическим и физическим воздействиям:
• Комнатная температура – 3 месяца,
в холодильнике – 6 месяцев, в замороженном
виде (-200С) – 15-20 лет, при кипячении – 30 минут,
автоклавировании (1200С) – 5 минут,
в сухожировом шкафу (1600С) – 2 часа;
• 2% раствор хлорамина – 2 часа, 1,5% растворе
формалина – 7 дней.
• В высушенной плазме – 25 лет.

40. Эпидемиология

Источник инфекции – больные и вирусоносители.
Механизм передачи:
• Парентеральный (пути – трансфузионный,
артифициальный, половой, контактно-бытовой);
• Вертикальный (путь – трансплацентарный).
Низкая инфицирующая доза.
Группы риска: гематологические больные,
наркоманы, гомосексуалисты,
медицинские работники.

41. Патогенез и клинические особенности

1. Внедрение возбудителя: входные ворота –
кровеносные сосуды.
2. Фиксация на гепатоцитах, проникновение внутрь
клетки. Не обладает прямым цитопатическим
действием, поражение печени иммунообусловленно.
3. Размножение вируса, сборка вирионов,
представление на мембране гепатоцитов HBcor-Ag и
HBe-Ag.
4. Распознавание ИКК, дифференцировка и
сенсибилизация: Т-киллеры, макрофаги действуют на
гепатоциты, пораженные вирусом, разрушая их.
5. Формирование иммунитета и выздоровление (при
интеграция HBV в геном гепатоцитов «ускользают» от
иммунной системы – хронический процесс или
носительство).

42.

Клинические периоды
1.
2.
3.
4.
5.
Инкубационный период – 3-6 месяцев.
Преджелтушный период – 7-12 дней:
недомогание, слабость, снижение аппетита,
головные боли, артралгии.
Желтушный период – 21 день: потеря аппетита,
тошнота, рвота, боли в области правого
подреберья, холурия, ахолия, желтушное
окрашивание кожи и слизистых.
Восстановительный период – 1,5-3 месяца.
Исходы – выздоровление, носительство,
развитие хронического гепатита, цирроза
печени.
Иммунитет
Постинфекционный иммунитет – клеточный,
слабонапряженный, непродолжительный.

43. Микробиологическая диагностика

Исследуемый материал – сыворотка крови.
1. Серологический метод (основной) – обнаружение
антигенов вируса и антител ИФА и РИА.
2. Молекулярно-биологический метод – ПЦР для
обнаружение ДНК, ДНК-pol.
Маркеры острого гепатита В:
–
–
–
–
ДНК вируса, ДНК-pol;
Анти-HBcor-IgM;
HBe-Ag;
HBs-Ag.

44.

Специфическая профилактика
Пассивная для экстренной профилактики – HВиммуноглобулин;
Активная – для плановой профилактики –
рекомбинантная дрожжевая вакцина (генноинженерная вакцина, производимая путем
встраивания гена, кодирующего HВsAg, в
дрожжевые клетки; сорбирован на адъюванте)
для в/м введения.
Вакцинация – новорожденным в
первые 12 часов жизни, в 1 и 6 мес.
В 13 лет (невакцинированные) и
взрослые групп риска:
2 первые инъекции с интервалом
в 1 месяц, 3-я – через 6 месяцев,
ревакцинация – через 7 лет.

45.

Специфическое лечение не разработано.
Этиотропная терапия – рекомбинантные
интерфероны (Виферон, Реаферон, Роферон А).