Молекулярные механизмы стимуляции пролиферации гепатоцитов после спленэктомии

1.

Международная Пироговская научная медицинская конференция студентов и молодых ученых
International Pirogov scientific medical conference for students and young scientists
Секция: Фундаментальная медицина
Section: Fundamental medicine
Номер заявки: 413
Молекулярные механизмы
Тема работы:
стимуляции пролиферации
гепатоцитов после спленэктомии
Название учебного заведения,
город:
Российский национальный исследовательский
медицинский университет им. Н.И. Пирогова, Москва,
Россия
Автор(ы) работы:
Колдаева М.С., Лаврова А.М., Богдан П.И., Сергеев Д.А.,
Михалкин Н.Б., Овакимян Ц.Р
д.м.н., проф. Ельчанинов А.В.
Научный(ые) руководитель(и):
Москва

2. Актуальность

• Во всем мире цирроз печени занимает 14 место в перечне самых частых причин смерти,
при этом в Центральной Европе - 4 место (Tsochatzis, Bosch and Burroughs, 2014). По
разным оценкам примерно 0,3-0,6% взрослого населения страдает циррозом печени
(Ganne-Carrié, 2017).
• Большинство исследований, направленных на поиск новых методов лечения и
стимуляции репаративных процессов в печени, практически не рассматривают тесную
связь печени с селезенкой в рамках печеночно-селезеночной оси
• Выяснение роли селезенки в регуляции тканевого гомеостаза печени необходимо для
создания новых методов лечения патологий печени, а также для выяснения
фундаментальных основ регуляции репаративных процессов иммунной системой
Международная Пироговская научная медицинская конференция студентов и молодых ученых

3. Цель и задачи исследования

• Цель исследования - выяснить влияние спленэктомии на печень у крыс в норме в течение 5
суток после операции
• Задачи:
1.
Выявить влияние спленэктомии на активность пролиферативных процессов в печени
2.
Изучить уровень синтеза цитокинов и факторов роста в печени после спленэктомии
3.
Выявить влияние спленэктомии на популяцию макрофагов печени
Международная Пироговская научная медицинская конференция студентов и молодых ученых

4. Материалы и методы

Материалы:
• Экспериментальные животные: половозрелые самцы крыс Спрейг-Доули массой 250-260 г
• Экспериментальное воздействие: спленэктомию выполняли под общим эфирным наркозом (n=27), контролем служили
ложнооперированные животные (n=25) и интактные животные (n=6)
• Сроки исследования: 24ч, 48ч, 3 суток и 5 суток, по 6-7 животных на каждый срок
Методы исследования:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Гистологические. Окраска печени гематоксилином и эозином.
Митотическая активность гепатоцитов определялась на 6000 клеток для каждого животного, выраженная в промилле (‰).
Иммуногистохимическое исследование проводили с использованием иммунофлуоресцентного метода (определяли экспрессию
маркеров Ki67, CK18, CD68, CD163 и CD206).
Полимеразная цепная реакция в реальном времени. Для анализа экспрессии генов использовали метод определения порогового
цикла (Ct) и вычисления относительной экспрессии гена домашнего хозяйства Gapdh.
Вестерн-блот анализ. Мембраны с выделенным белком окрашивали первыми антителами к соответствующему белку или антителами
к GAPDH, который служил референсным белком.
Статистический анализ. Сравнение двух выборочных долей проводили с помощью z-критерия. Полученные относительные экспрессии
сравнивали с помощью критерия Манна-Уитни (U). При сравнении более двух групп использовали ранговый однофакторный
дисперсионный анализ. Различия считали статистически значимыми при p˂0,05
Международная Пироговская научная медицинская конференция студентов и молодых ученых