Патогенные микобактерии

1.

ПАТОГЕННЫЕ МИКОБАКТЕРИИ
Атипичные неклассифицированные, анонимные
микобактерии, отличающиеся по своим свойствам
от туберкулезных и друг от друга
1. Атипичные микобактерии изолируются от людей и
животных, больных туберкулезом
2. Отдельные атипичные микобактерии могут
вызывать ряд хронических заболеваний,
напоминающих туберкулез, - “микобактериозы”.
3. Атипичные микобактерии сложно
отдифференцировать от истинных микобактерий
туберкулеза.

2.

Туберкулез (от лат. tuberculum – бугорок) – инфекционное заболевание
человека и животных, характеризуется образованием специфических
воспалительных изменений (бугорков) в различных органах, с
преимущественной локализацией в легких и лимфатических узлах.
Наука о туберкулезе – фтизиатрия (от греч. phthisis –истощение, чахотка,
увядание).
“Современная клиническая
бактериология начинается с
открытия туберкулезной бациллы
Р.Кохом” (Габричевский Г.Н.)
Возбудители
туберкулеза:
М. tuberculosis (бацилла Коха)
M. bovis
M. africanum
M. avium
Р. Кох (1843—1910) – лауреат
Нобелевской премии

3.

ВЫЯВЛЕНИЕ
КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫХ
МИКОБАКТЕРИЙ.
ОКРАСКА ПО МЕТОДУ ЦИЛЬНИЛЬСЕНА
1. Фиксированный мазок мокроты
окрашивают в течение 3-5 минут
карболовым фуксином Циля.
2. Окрашенный препарат
обесцвечивают 5% раствором
серной кислоты.
3.Промывают водой.
4. Докрашивают дополнительно
метиленовым синим Леффлера.
Возбудитель
туберкулеза
Возбудитель
лепры

4.

Рост микобактерий на среде Левенштейна-Йенсена

5.

ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ
Жирные кислоты способствуют
распаду клеточных элементов,
творожистому перерождению тканей.
Корд-фактор; палочки
расположены в виде
“косы”, жгутов
Незавершенный фагоцитоз
микобактерий
Корд-фактор разрушает
митохондрии клеток
зараженного макроорганизма,
нарушает функцию дыхания

6.

Каждый год от туберкулеза умирают
3 миллиона землян. И заболевают 8
миллионов. Уже болеющие
"старички" с новичками,
пополняющими ряды больных,
вместе составляют 15 миллионов
человек. Пятая часть из них, увы,
вскоре отправится в мир иной. Этот
конвейер смерти медицина до сих
пор не может остановить.
-определенные социальные группы –
бомжи, мигранты, жители приютов,
домов престарелых, наркоманы и др.;
-контактные лица в семье, на
производстве;
-лица с посттуберкулезными
изменениями в легких;
-ВИЧ-инфицированные лица с
пылевыми заболеваниями легких,
сахарным диабетом и др.
-лица, получающие цитостатики,
лучевую терапию, кортикостероиды

7.

КЛИНИЧЕСКИЕ ФОРМЫ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ
1. Туберкулезная инфекция у детей и подростков
2. Туберкулез органов дыхания –легких, плевры, верхних
дыхательных путей
3. Внелегочный туберкулез – мозговых оболочек, глаз,
суставов и костей, кожи и подкожной клетчатки,
кишечника и брюшины, органов моче-половой системы

8.

Правосторонний первичный туберкулезный комплекс.
Рентгенограмма органов грудной клетки в прямой проекции.

9.

Вакцинный штамм BCG (Bacillus Calmette-Guerin) был получен в
1942 г. Французскими учеными Кальметтом и Гереном путем
длительного культивирования (в течение 18 лет) вирулентного
штамма M.bovis на картофельно-глицериновой среде с
добавлением бычьей желчи.

10.

Туберкулезный лимфаденит
Туберкулез кожи
(туберкулезная волчанка)

11.

Туберкулезные
поражения кожи

12. Исследуемые материалы многообразны и зависят от локализации туберкулезных поражений: мокрота, бронхо-легочные аспираты,

плевральная жидкость, ликвор, моча,
костный мозг, гной, сыворотка крови и др. Мы рассмотрим на примере исследования
мокроты.
А.Микроскопическое исследование: Является предварительным, т.к. не
дает возможности гарантировано дифференцировать возбудителей
туберкулеза от других микобактерий.
Существует несколько вариантов микроскопического исследования:
1.Прямая микроскопия исследуемого материала.
Готовят мазки, растирая гнойный комочек мокроты между предметными
стеклами, и окрашивают их по способу Циль-Нильсена → под
микроскопом видны рубиново-красные кислотоустойчивые микобактерии
на общем голубом фоне мокроты; некислотоустойчивые бактерии и
форменные элементы имеют синий цвет.
(Для положительного заключения необходимо просмотреть 100 полей
зрения, указав количество обнаруженных в них кислото-устойчивых
бактерий). Прямая микроскопия – это сравнительно малочувствительный
метод, позволяющий обнаружить микобактерии при их содержании в
мокроте не менее 100 тыс.кл/мл

13. 2. Микроскопия предварительно обогащенного материала

Методы обогащения основаны на принципе извлечения микобактерий из мокроты и их
концентрации в малом объеме; используют методы гомогенизации и флотации.
А) Гомогенизация. В банку с мокротой, собранной в течение суток, + 1% NaOH
и энергично встряхивают в шюттель-аппарате. Гомогенизированную мокроту
центрифугируют при 3000 об/мин, осадок нейтрализуют, добавив 1-2 капли 10%
HCI. Мазки из осадка окрашивают по Циль-Нильссену.
Б) Флотация. Гомогенизированную мокроту помещают в колбу + 1-2 мл
ксилола (бензола) и встряхивают в течение 10 мин, доливают дистиллированную
воду до горлышка колбы и дают отстояться. В горлышке колбы образуется
сливкообразный слой, состоящий из всплывших мельчайших капелек ксилола с
сорбированными на них микобактериями. Из этого слоя готовят мазки на
предметном стекле путем повторного наслаивания и окрашивают их по ЦильНильссену.
Методы обогащения повышают вероятность обнаружения микобактерий на 10%.

14. 3. Люминесцентная микроскопия.

Основана на способности липидов микобактерий
поглощать
люминесцентные
красители и светиться в люминесцентном
микроскопе.
Мазки, приготовленные из осадка
гомогенизированной
мокроты
(или
флотационные
мазки),
окрашивают
водным раствором флюоресцентных
красителей (ауромин + родамин С),
микроскопируют в люминесцентном
микроскопе с объективом х40.
Туберкулезные микобактерии светятся
золотисто-желтым светом на темнозеленом
фоне,
нетуберкулезные
микобактерии дают зеленое свечение.
Люминесцентная
микроскопия
повышает
вероятность выявления микобактерий на 17%, т.е.
наиболее чувствительная из микроскопических
методов.

15. Б. Микрокультивирование – метод Прайса

Ускоренный метод, сочетающий микроскопическое
исследование с элементами бактериологического
метода (предварительное микрокультивирование).
Дает возможность выявить туберкулезные микобактерии при
их малом содержании, а также наличие у них корд-фактора и
тем самым доказать их вирулентность.
●Готовят мазки из осадка (центрифугата)
гомогенизированной
мокроты
или
флотационного слоя, выдерживают их 15 мин
в 2% H2SO4 для уничтожения посторонней
микрофлоры,
промывают
стерильной
дистиллированной водой. Несколько стекол с
мазками помещают в широкую пробирку с
жидкой синтетической питательной средой
(или разведенной цитратной кровью) и
инкубируют при 37ºС.
●Через каждые 3-5 дней, последовательно,
вынимают по одному мазку и окрашивают по
Циль-Нильсену. Обычно через 6-10 дней на
стеклах наблюдается рост микроколоний,
выявляемых при микроскопии.
Результат: ▪ Вирулентные туберкулезные
микобактерии, содержащие корд-фактор,
образуют микроколонии из тесно слеенных
между собой рубиново-красных палочек в
виде изогнутых жгутов или кос.
▪ Микроколонии невирулентных туберкулезных микобактерий представляют собой
беспорядочные рыхлые скопления бактериальных клеток.

16. В. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Является основным методом для получения и идентификации выделенной чистой культуры
возбудителя туберкулеза; для определения лекарственной устойчивости (степень ее
чувствительности) к химиотерапевтическим препаратам. Этим методом удается выделять
микобактерии при их концентрации от 2-100 живых бактерий в 1 мл клинического
материала. NB – Основной недостаток – длительность исследования.
Последовательность исследования:
1)Исследуемый материал (мокроту) - для концентрации микобактерий и уничтожения
посторонней микрофлоры - предварительно обрабатывают 2% NaОH или 10% H2SO4,
подвергая встряхиванию и центрифугированию;
2)Полученный осадок нейтрализуют и засевают в несколько пробирок с яичной средой
Левенштейна-Йенсена (рекомендована ВОЗ); среды: яичная среда Финна – II; картофельно-глицериновая; жидкая среда Сотона.
3)Засеянные пробирки плотно закупоривают во
избежание высыхания и инкубируют при 37ºС до
2-3 мес., еженедельно просматривая. Видимый
рост появляется, начиная с 10-12-14 дней и позже.
→ М.Т. образуют сухие, морщинистые грубые
колонии кремового цвета (R-формы).
M.bovis отличается более скудным и медленным
ростом.

17. (продолжение) БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД * ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ М.tuberculosis ОТ M. bovis, М. africanus

(продолжение) БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ
* ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ
МЕТОД
М.tuberculosis ОТ M. bovis, М. africanus
1)Для этого ставят ниациновую пробу. Только М.Т. способны
синтезировать никотиновую кислоту (ниацин) при культивировании на яичных средах. Для выявления ниацина к выросшей культуре добавляют растворы 10% цианистого бромида
и 4% анилина. В положительном случае появляется ярко-желтое окрашивание.
2) Кроме того, у чистой культуры изучают скорость роста, обра
зование пигмента (на свету или в темноте), способность к росту при 20-25ºС и к росту на простых питательных средах, наличие каталазы и
пероксидазной активности (см. табл)
Таблица. Дифференциальные признаки возбудителей туберкулеза
Вид
М.tuberculosis
М.bovis
М.africanus
Синтез
ниацина
Восстановле ние
нитратов
+
-
+
-
Потеря каталазНикотин
ной активности
-амидаза
при 68ºС в течение
30 мин
+
+
+
+
+
Рост при
температурах:
25ºС
37ºС
40ºС
-
+
+
+
+
+
-/+

18. (продолжение) Бактериологический метод

4) У выделенных культур туберкулезных микобактерий в обязательном порядке
определяют степень лекарственной устойчивости к противотуберкулезным
химиопрепаратам. Для этой цели культуру засевают в пробирки с яичной средой
Левенштейна-Йенсена, в которые перед свертыванием были внесены различные
концентрации химиопрепаратов. Окончательную оценку проводят после 3-х
недель инкубации. Учитывают отсутствие роста или степень его интенсивности в
присутствии различных концентраций химиопрепаратов.
Полученные результаты используют для назначения рациональной
.
химиотерапии

19. Г. БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

В настоящее время применяют редко в диагностике туберкулеза легких, чаще – при
Материалом от больного заражают
лабораторных животных (морских свинок, чувствительных
к М.Т.; кроликов – восприимчивых к М.Вovis.).
Наблюдают за животными в течение 1-2 мес до
их гибели. С 5-10 дня после заражения можно
исследовать пунктат лимфатических узлов.
диагностике туберкулеза почек.
Д. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Проводят для выявления АТ в сыворотках больных
туберкулезом или микобактериозом, а также для
обнаружения АГ-ов микобактерий в исследуемом материале.
С этой целью ставят: РСК, РНГА, РИА, ИФА
Е. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МЕТОД - ПЦР
Позволяет выявлять 1-10 микробных клеток в исследуемом
образце

20. Ж. Кожно-аллергическая проба: ПРОБА МАНТУ И ДИАСКИНТЕСТ

Выявляет ГЗТ, развивающуюся у вакцинированных вакциной БЦЖ, инфицированных и больных
туберкулезом. Осуществляется с помощью препаратов туберкулина, который вводят накожно или
внутрикожно.
1. Проба Манту – внутрикожная проба – применяется как основной метод туберкулинодиагностики
при массовых ежегодных обследованиях. Ее назначение: 1 – отбор контингентов лиц для
ревакцинации БЦЖ; 2 – для диагностики туберкулеза, в том числе раннего выявления
начальных и локальных форм туберкулеза у детей и подростков; 3 – для определения
инфицирования микобактериями туберкулеза.
При постановке пробы Манту туберкулин вводят на
внутреннюю поверхность предплечья
строго внутрикожно. Учитывают реакцию через 72 ч. Проба
Манту считается
(-) при наличии только уколочной реакции (0-1 мм),
сомнительной при гиперемии без папулы или наличии
папулы диаметром 2-4 мм;
(+) – при папуле диаметром 5 мм и более.

21. 2. ДИАСКИНТЕСТ

Туберкулин, применяемый при пробе Манту – натуральный АГ, полученный из микобактерий. При введении его подкожно, организм человека реагирует на него, вызывая воспалительный аллергический
процесс в виде отечности и покраснения (папулы). Манту показывает,
встречался ли организм с туберкулином раньше ( это может быть заболевание, заражение, с
с которым организм справился самостоятельно или с помощью БЦЖ.
Диаскинтест – содержит синтетические АГ двух видов (CFP10 и ESAT6). Такие белки есть в
возбудителях туберкулеза и при введении также вызывают аллергическую реакцию. Причем
реакция на Диаскинтест возникает только в случае активного процесса в организме – заболевания или заражении, которое не всегда переходит в болезнь. Рез-ты теста определяют через 72
часа. В отличие от пробы Манту, реакция на Диаскинтест возникает, только если в организме
есть активные микобактерии туберкулеза. Диаскентест
более специфичен и не реагирует на другие штаммы, не
вызывающие туберкулез. Не реагирует Диаскинтест также и на прививку БЦЖ. Поэтому его часто назначают после пробы Манту для проведения дифференциальной диаг –
ностики. В отличие от пробы М., которая может дать
+-реакцию, если есть в организме микобактерии, не
вызывающие болезни, Диаскинтест чувствителен только к возбудителям туберкулеза.

22. ЛЕПРА

23.

24.

Лепра (от lepo – лущить) – проказа, болезнь Хансена –
антропонозный генерализованный микобактериоз с длительным
инкубационным периодом, протекает в виде хронической болезни
с поражением кожи, слизистых оболочек, периферической нервной
системы и внутренних органов.
Морфология возбудителя
Палочка M. leprae Г+, размером
0,2-0,5Х 1,0-7,0 мкм. Окрашиваются
по методу Циль-Нильсена в красный
цвет.
M. leprae – строгий внутриклеточный
паразит, не культивируется на
искусственных питательных средах.
Скопления бактерий в клетках – в
виде шаров или палочек сигар.
Герхард Хансен

25.

26.

27.

28.

29.

30.

31.

32. ТТ-ТИП ЛЕПРЫ

33. LL –ТИП ЛЕПРЫ