Современные методы молекулярно-генетической диагностики туберкулёза

1.

Современные молекулярногенетические методы
диагностики туберкулеза
Выполнили:
Телкова Я.Ю., Чабуева К.С.
2 курс, 4 группа
медико-профилактический
факультет

2.

Туберкулез - инфекционное заболевание,возбудителем которого почти в 95%
случаев является Mycobacterium tuberculosis. Обследованию подлежат больные с
длительными хроническими процессами, с выраженными клинико-лабораторными и
рентгенологическими показаниями и рефракторные к неспецифической
антибактериальной и/или другим методам терапии.
У здоровых людей инфицирование микобактериями туберкулеза часто не приводит к
появлению каких-либо симптомов, так как иммунная система человека способна
противостоять МБТ
Симптомы активной формы ТБ:
кашель иногда с мокротой или кровью
боли в груди
слабость
потеря веса
повышенная температура и ночной пот.
Туберкулез можно
излечить при
проведении
шестимесячного курса
антибиотиков.

3.

Наиболее распространенные
методы диагностики:
1. Метод микроскопии.
●микроскопия с окраской по Цилю – Нельсену
●методы люминесцентной микроскопии
●светодиодная (LED) микроскопия.
1. Культуральные методы
○на плотных средах
●на жидких средах
1. Молекулярно-генетические методы
●выявление ДНК МБТ
●методы идентификации
●молекулярно-генетические методы определения ЛУ
●гибридизационные технологии
●мультикомплексная ПЦР в режиме реального времени
●картриджная технология

4.

Культуральные методы
диагностики и методы микроскопии
являются актуальными и в настоящее
время, однако они трудоемки и
длительны, поэтому для более быстрой
и достоверной диагностики
используют молекулярно-генетические
методы.

5.

GeneXpert MTB/RIF

6.

Порядок действий:
Информация взятя с официального свйта www.hain-lifescience.de

7.

GeneXpert MTB/RIF
1. Автоматизация диагностики
2. Работа с любыми образцами (мокрота, моча,
спинномозговая и плевральная жидкости)
3. Одновременное осуществление скрининга на M.
Tuberculosis и рифампицин-резистентность
4. Результаты теста выдаются через 2 часа и
предоставляются в графическом, табличном и
цифровом форматах
5. Результаты каждого модуля отражаются в
реальном времени

8.

ПРЕИМУЩЕСТВА МЕТОДА:
малое время диагностики (примерно 2 часа)
высокая чувствительность (более 95%) и специфичность (более 95%) для
образцов макроты КУБ + и КУБполная автоматизация
безопасность
диагностика туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью
НЕДОСТАТКИ:
возможность определения устойчивости возбудителя только к одному
противотуберкулезному
препарату
рифампицину,
что
предопределяет
необходимость
дальнейших
исследований
для
диагностирования
мультирезистентности
возможность использования только нативной мокроты и концентрированных ее
образцов, высокая стоимость исследований

9.

GenoType® MTBDRplus

10.

Порядок действий:
Информация взятя с официального свйта www.hain-lifescience.de

11.

GenoType® MTBDRplus
Преимущества :
1. Простота
2. Надежность методики
3. Рентабельность
4. Достоверность результатов
5. Быстрое получение результатов (через 4-5 часов)
6. Высокая чувствительность (≥ 97%) и специфичность (≥
99%)
7. Автоматизация проведения исследований

12.

ПРЕИМУЩЕСТВА МЕТОДА:
● метод позволяет определить устойчивость МБТ изониазид и рифампицину,
что дает возможность выявить наличие мутаций в участке гена rpoB
Тест система используются только в лабораториях для микробиологической
диагностики туберкулеза III уровня, она предназначена для диагностики
туберкулеза с идентификацией микобактерий и определением чувствительности к :
➢
➢
➢
➢
➢
рифампицину
изониазиду
фторхинолонам,
аминогликозидам/циклическим пептидам
этамбутолу

13.

Секвенирование ДНК
Roche 454 GS FLX +

14.

Порядок действий:
Информация взятя с официального свйта www.hain-lifescience.de

15.

ПРЕИМУЩЕСТВА МЕТОДА:
·
·
·
·
·
Высокая точность для известной устойчивости
Высокая производительность
Быстрое время выполнения (3-4 дня)
Дешевле фенотипических исследований
Системы открытые и адаптивные по мере появления новых данных
ОГРАНИЧЕНИЯ:
·
·
·
Неполные данные по мутациям к новым ПТП
Не до конца понятна роль гетерогенной устойчивости
Важность эффлюксных насосов и компенсаторных механизмов остается неясной

16.

Роль секвенирование нового поколения в будущем:
1.
2.
Таргерное секвенирование (клиническая диагностика)
Быстрая и точная диагностика с использованием энциклопедии
градаций и мутаций
Полный профиль устойчивости в одном тесте
Полногеномное секвенирование (наблюдение/передача)
Выявление новых мутаций с появлением новых штаммов
Изучение роли эффлюсных насосов
Понимание компенсаторных механизмов устойчивости
Оценка передачи

17.

Список литературы:
1.
2.
3.
Бондаренко В.Н., Штанзе В.А., Золотухина Л.В. Характеристика лекарственной
устойчивости M/Tuberculosis, определенной молекулярно-генетическоими и фенотипическими
методами/ В.Н. Бондаренко, В.А. Штанзе , Л.В. Золотухина – Гомель, 2018.
Госманов Р.Г, Галиуллин А.К., Волков А.Х., Ибрагимова А.И. Микробиология. Учебник для
студентов медицинских ВУЗов/ З,Г, Госманов, А.К. Галиуллин, А.Х. Волков, А.И.
Ибрагимова – издание второе, стереотипное- Санкт-Петербург, Москва, Краснодар, 2017.
Структура и алгоритмы новейших молекулярно-генетических технологий экспресс
диагностики туберкулеза и лекарственной устойчивости в Республике Казахстан:
Методические рекомендации /А.Х.Аленова, Т.Ш.Абилдаев, Ж.Ш.Жумадилов и др.- Алматы,
2013.
4.
Федеральные клинические рекомендации по организации и проведению микробиологической и
молекулярно-генетической диагностики туберкулеза/ Л.НЧерноусова, Э.В. Севастьянова,
Е.Е. Ларионова и др. – Москва, 2014.

18.

Спасибо за внимание!