Похожие презентации:
Технология рекомбинантных ДНК
1.
ТЕХНОЛОГИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДНК.2.
3.
4.
Рекомбинантная ДНК –гибридная молекула ДНК, содержащая искусственно
введенный ген.
5.
Механизм создания рекомбинантнойДНК
1. Рестрикция — разрезание ДНК
рестрикционной эндонуклеазой
(рестриктазой) на множество
различных фрагментов, но с
одинаковыми «липкими» концами.
Такие же концы получают при
разрезании плазмидной ДНК той же
рестриктазой.
6.
2. Лигирование — включение фрагментов ДНКв плазмиды благодаря «сшиванию липких
концов» ферментом лигазой.
3. Трансформация — введение
рекомбинантных плазмид в бактериальные
клетки, обработанные специальным образом —
так, чтобы они на короткое время стали
проницаемыми для макромолекул.
4. Скрининг — отбор среди клонов
трансформированных организмов тех, которые
содержат плазмиды, несущие нужный ген.
7.
5 - бактериальный геном (кольцеваяДНК, расположенная в нуклеоиде),
6 - ДНК с целевым геном, 7 - плазмида
(вектор).
1 - рестрикция ДНК
(разрезание ферментами
- рестриктазами),
2 - гибридизация ДНК
(объединение
фрагментов и их
сшивание -лигирование)
с образованием
рекомбинантной
плазмиды, 3 трансформация
бактериальной клетки
(перенос в нее
рекомбинантной
плазмиды),
4 - "липкие концы"
(комплементарные
одноцепочечные участки
ДНК),
8.
9.
Рестриктазы- ферменты, способные узнавать специфическиепоследовательности ДНК(4-6 нуклеотидов)
10.
11.
3. ДНК- полимераза – синтезирует нуклеиновыекислоты.
4. Терминальная трансфераза – наращивает на
концах фрагмента ДНК однонитевые участки
путем последовательного присоединения
нуклеотидов; используется для создания на
соединяемых фрагментах ДНК «липких»
концов.
5. Нуклеазы – большой класс ферментов,
расщепляющих молекулы нуклеиновых
кислот; имеются нуклеазы, расщепляющие
одно- или двуцепочные ДНК и РНК путем
отщепления по одному нуклеотиду или
небольших олигонуклеотидов.
12.
Примеры лекарств, производимых с помощью биотехнологии:Activase – для разрушения тромбов в кровеносных сосудах
Herceptin – лечение рака молочной железы
Neutropin, Humatrope – лечение недостатка гормона роста
Xolair – лечение аллергической астмы
Rativa, Amevive – лечение псориаза
Epogen и Procruit – лечение анемии
Enbrel, Humira, Remicade – лечение ревматоидного артрита
Avonex, Betaseron – лечение множественного склероза
Recombivax – вакцина против гепатита В
Flumist – вакцина против гриппа
Forteо – лечение остеопороза
Reopro – предотвращает тромбообразование
Xigris – лечение сепсиса
13.
Рекомбинантные белки, которые используют втерапевтических целях.
Год
Продукт
1982
Человеческий
инсулин
Гормон роста
человека
1985
Клиническое
применение
Диабет
Карликовость
1986
Вакцина гепатита В
1989
Эритропоэтин
Профилактика
гепатита В
Анемия
1992
Фактор VII
Гемофилия А
1997
Фактор IX
Гемофилия В
1999
Фактор VIIa
Гемофилия
14.
Некоторые рекомбинантные белки, синтезируемыев клетках насекомых:
-a-интерферон
- эритропоэтин
- щелочная фосфатаза человека
- липаза поджелудочной железы человека
- интерлейкин-2
- активатор тканевого плазминогена
- регулятор проницаемости мембран, нарушения
в котором приводят к муковисцидозу
15.
Клетки млекопитающихСозданы экспрессирующие векторы для культуры
клеток млекопитающих
Промышленный синтез рекомбинантных
белков с использованием модифицированных
клеток млекопитающих обходится слишком дорого
Системы экспрессии на основе клеток
млекопитающих
используют
для
получения
рекомбинантных белков, которые невозможно получить
с помощью других систем получения
16.
Получение определенных лечебных белков может быть достигнутотолько с помощью культуры клеток млекопитающих, где белок
соответствующим образом укладывается и модифицируется
Выработка этого белка в трансгенных животных
может быть альтернативным методом
17.
Методы получения трансгенных животныхМикроинъекция клонированных
генов производят в один или оба
пронуклеуса только что
оплодотворенной яйцеклетки мыши.
Чаще выбирают мужской
пронуклеус, привнесенный
сперматозоидом, так как его размеры
больше.
После инъекции яйцеклетку немедленно
имплантируют в яйцевод приемной матери,
или дают возможность развиваться в культуре
до стадии бластоцисты, после чего
имплантируют в матку.
18.
19.
Эмбрион находящийся на стадии 8 клеток, инфицируют рекомбинантнымретровирусом, несущий трансген. Самки, которым был импортирован
эмбрион, производят на свет трансгенное потомство.для идентификации
мышей, несущих трансген в клетках зародышей линии, проводят ряд
скрещиваний.
20.
Клонирование овцы методом переноса ядра. Эпителиальные клетки молочнойжелезы в культуре индуцируют для перехода в фазу G0 (стадия, на которой
находится яйцеклетка). Затем осуществляют слияние такой клетки с
энуклеированной яйцеклеткой и выращивают эмбрионы до ранних стадий
эмбриогенеза. После чего эмбрионы имплантируют в матку суррогатной матери,
где происходит дальнейшее развитие. В экс.Я. Уилмута (I. Wilmut) по
клонированию Долли было проведено 277 слияний безъядерных яйцеклеток с
клетками молочной железы в фазе G0, из 29 выживших эмбрионов только один
развился до жизнеспособного организма
21.
1) получение столбнячного (дифтерийного)токсина
2) введение лошади столбнячного токсина
3) появление иммуноглобулинов в крови лошади
4) получение плазмы крови
5) удаление фибриногена и очистка препарата
22.
23.
https://research-journal.org/archive/6-37-2015-july/polucheniemonoklonalnyx-antitelПолучение моноклональных антител. Методы