Семейство – Staphylococcaceae. Диагностика стафилококковых инфекций

1.

Приволжский исследовательский медицинский университет
Кафедра эпидемиологии, микробиологии и доказательной
медицины
Staphylococcus
3 курс, лечебный, педиатрический, медико-профилактический,
фармацевтический факультеты
Дисциплина: Микробиология, вирусология
Лектор: ст. преподаватель каф. эпидемиологии,
микробиологии и доказательной медицины
Лукова Ольга Алексеевна

2.

Классификация
• Семейство – Staphylococcaceae
• Род – Staphylococcus
• Виды –
S.aureus
S.epidermidis
S.saprophyticus

3.

Морфология и общая характеристика
Грам-положительные
стафилококки
факультативные анаэробы
неспорообразующие
неподвижные
убиквитарность
полирезистентность

4.

Клеточная стенка Гр+

5.

Физиология и культуральные свойства

6.

Гемолитическая активность

7.

Гемолитическая активность
• Вокруг колоний стафилококка наблюдается
зона гемолиза за счёт выделения токсина. Колонии с гладкой поверхностью,
выпуклые с ровными краями, золотистого
цвета, мелких и средних размеров.

8.

Лецитиназная активность
(Желточно-солевой агар)

9.

Определение у S. aureus
лецитиназы (лецитовителлазы)
• На желточно-солевой агар засевается
культура стафилококка в виде бляшек. При
выделении стафилококком лецитиназы
вокруг
посева
образуется
венчик
помутнения и радужный ореол за счёт
разрушения лецитина яичного желтка,
который находится в составе питательной
среды.

10.

Тест на каталазу
(+)

11.

Коагулазо
позитивные
• S.aureus
Коагулазо
негативные
• S.saprophyticus
• S.epidermidis

12.

Обнаружение фермента
плазмокоагулазы у S. aureus
• Для постановки реакции плазмокоагуляции берут
плазму кролика или человека и разводят 1:4. В
небольшое количество плазмы (0,5мл) вносят
петлю испытуемой культуры, выделенную из
материала от больного. Результат
просматривают через 6-12-18 часов. При наличии
у стафилококка данного фермента наблюдается
свёртывание плазмы и образование сгустка. При
отсутствии у стафилококка плазмокоагулазы
изменений в плазме не наблюдается.

13.

14.

Диагностика стафилококковых гнойновоспалительных инфекций
Основным методом исследования является
бактериологический (культуральный) метод.
материал от больного берут из патологического
очага :
-гнойное содержимое,
-мокроту,
-кровь из вены (5 мл).

15.

Для первичного
посева
-желточно-солевой
агар (селективная
среда),
-кровяной агар
-простой агар (мясопептонный агарМПА).
Термостатирование
при температуре
37 , 18-24 часа.
• На плотных питательных средах
стафилококки растут в виде средних или
крупных (3-5 мм) блестящих колоний с
ровным краем. Колонии стафилококков
имеют пигмент: преимущественно
золотистого цвета у S. аureus, белый – у S.
epidermidis и жёлтый – у S.saprophyticus.
Следует иметь ввиду, что цвет пигмента –
это признак штамма, а не видовой.
Вокруг колоний стафилококка на
кровяном агаре может наблюдаться зона
гемолиза (вариабельный признак) за счёт
выделения -токсина (гемолизина).
• Из изолированной колонии делают
бактериальный мазок на предметном
стекле, фиксируют, окрашивают по методу
Грама. При микроскопировании видны
грамположительные кокки, которые
образуют скопления, похожие на «грозди
винограда».

16.

Идентификация.
Изолированную
колонию пересевают в
пробирку с МПА (этап
накопления биомассы
чистой
культуры).
После
выделения
чистой
культуры,
изучают
основные
признаки и определяют
принадлежность к S.
аureus по следующим
свойствам (характерно
только для S. аureus ):
• способность коагулировать
плазму
• образовывать фермент
лецитовителлазу
(лецитиназу)
• образовывать фермент
ДНК-азу
• способность сбраживать
маннит в анаэробных
условиях
• наличие белка А.
Внутривидовую дифференциацию штаммов
S.аureus проводят при помощи
фаготипирования набором индикаторных
фагов.

17.

Фаготипирование
стафилококков (S. aureus)
Фаготипирование стафилококков (S. aureus)
производят с целью внутривидовой
дифференцировки штаммов (определение
фаговаров). В настоящее время известно
около 80 стафилококковых типовых фагов,
объединенных в 1-1V фагогруппы. Существует
международный диагностический набор
стафилококковых бактериофагов, с помощью
которого проводят фаготипирование штаммов
стафилококков, выделенных от больных и
носителей, для определения источника
госпитальной инфекции.
На чашку с засеянной культурой стафилококка
наносят различные фаги. После инкубации в
термостате в обычных условиях, определяют
фаготип стафилококка по наличию негативных
пятен (зоны просветления на фоне сплошного
роста культуры) с помощью трафарета с
цифровыми обозначениями фагов.