SCN1A TF — 21.01.2026

1.

Дизайн транскрипционного
фактора для SCN1A на базе ААВ
Автор:
Гладыщук Ольга
Ph.D in Life and Food Sciences

2.

SCN1A: роль
Ген SCN1A отвечает за синтез
натриевых каналов пропускающих
ионы натрия. Мутации в одной
копии (гаплонедостаточность)
SCN1A являются причиной синдрома
Драве в 85% случаев. При данном
синдроме наблюдается дефицит
функционирующего белка (loss of
function), а работа одной аллели
недостаточна что приводит к
эпилепсии.
> 10 детей ждут
генотерапию

3.

SCN1A: регуляторы экспрессии гена

4.

SCN1A: особенности гена и дизайн
транскрипционого фактора
SCN1A имеет размер 6030 пар нуклеотидов, что делает невозможным для упаковки его в ААВ вектор.
Однако разработка более ёмкого вектора для генной терапии возможна.
Был создан транскрипционный фактор для увеличения экспрессии SCN1A на эндогенном геноме.
L ITR
Enhancer
Promotor
Intron
Промоторная часть включает
энхенсер, промотор, интрон и 5' UTR
от GAD1/SCN1A ограничивающие
экспрессию вектора до
интернейронов
5' UTR
TF
microRNA
binding domain
hGH polyA
signal​
Транскрипционный фактор SCN1A
представляет собой последовательность
включающую сигнал ядерной локализации,
домен с цинковыми пальцами, домен
активации транскрипции VP64, домен
присоединения микроРНК (miR128&miR221),
полиА сигнал
R ITR

5.

SCN1A: особенности гена и дизайн
транскрипционого фактора

6.

SCN1A: принцип работы транскрипционого
фактора

7.

Блок 1: минимальные исследования
№
Краткое описание необходимого метода/шага
Кол-во
образцов
Время для
работы
Цена
ФИО согласившегося
соавтора работы
1
Синтез векторов/частей векторов
8
3 месяца
16 руб/нк
~145000 руб за все
2
Сборка векторов
5
3
Сиквенс векторов
5
4
Наработка плазмид для transient transfection method
5
Гладыщук Ольга
5
Transient transfection
5
?Бавыкин Андрей?
10
Гладыщук Ольга
3
Гладыщук Ольга
Гладыщук Ольга
~50000
Отправка на сиквенс:
Гладыщук Ольга
Клеточные линии: HEK293
6
Проверка экспрессии нетаргетных близлежащих (TTC21B, SCN9A)
и таргетных генов (SCN1A) через qRT-PCR. Контрольные гены:
SNCA/GRN/UTRN/TTN. Вектор: pAAV-GABA-TFenhSCN1A (5 модификации).
Источник РНК: HEK293/
Метод: qRT-PCR.
Ожидания: небольшой отчет* с диаграммой и анализом результата
7
BLASTn анализ фрагмента ДНК с которым связывается транскрипционный фактор с
целью выявления похожих фрагментов в ДНК человека.
Ожидания: небольшой отчет* с диаграммой и анализом результата

8.

Блок 2: углубленные исследования
№
Краткое описание необходимого метода/шага
Кол-во
образцов
8
Упаковка вектора pAAV9-GABAep-TFenhSCN1A в ААВ9/DJ (5 модификации).
Ожидания: упакованные частицы, титр, небольшой отчет*.
1-2-3
Время для
работы
Цена
ФИО согласившегося
соавтора работы
Наработка вектора в
бактерии и передача на
упаковку: Гладыщук
Ольга
Упаковка
вектора:Марлин?
9
Разработки/покупка модели мыши с синдромом Драве SCN1A+/-. Подтверждение через сиквенс
или ОТ-ПЦР или документами.
6922.50$/1 ???
0 мышей
Методы: genotyping via RT-PCR (если делаем модель сами)
Ожидания: мышь-модель заболевания, небольшой отчет* или паспорт на модель
10
Анализ работы промотора: сравнить локализацию экспрессии конструкции pAAV-GABAep-EGFP ~5 мышей
(2 модификации) и pAAV-CBA-EGFP in vivo (в мозге мышей). После 27 дней введения (для мыши). Для
на 1
гистопатологии мозга мышей нужен патологоанатом.
конструкци
ю
Метод: histopathology (мыши)
Патологоанатом:???
Ожидания: небольшой отчет*.
11
Анализ уровня белка NaV1.1 в мозге мыши. Эксперименты на мышах - моделях SCN1A+/-.
Вектор: pAAV-GABAep-TFenhSCN1A (~4 модификации).
SCN1A+/- и дикий (здоровый) тип.
Доза:#.
Количество мышей:#.
???
Мыши
Метод: Meso Scale Discovery electrochemiluminescence-based sandwich immunoassay
Ожидания: небольшой отчет*.
12
Анализ частотности судорог мышей с помощью видеофиксации/чипа. Эксперименты на мышахмоделях SCN1A+/-. Вектор: pAAV-GABAep-TFenhSCN1A (~2-3 модификации). Доза:#. Количество
мышей:#. Сравнение между здоровой мышью с вектором pAAV9-GABAep-TFenhSCN1A и моделью
+/-
4-8
???

9.

Результаты работы:
При условии получения ожидаемых результатов,
планируется патентование генетической конструкции и/или написание
статьи на русском/английском языке (то есть все детали
эксперимента будут раскрыты в рамках сочетания здравого смысла и
конфиденциальности).
Помимо доклинических исследований, могут быть проведены
клинические (зависит от результатов).