3 Проводка, виды материала

1. Проводка ткани. Виды материала.

Пешков М.В.
Биолог
Донецк, 2024

2. Цель проводки ткани. Основные этапы.

Подготовка тканей к микротомии.
• Отмывка избытка формалина
• Обезвоживание и обезжиривание объектов
• Просветление объектов (подготовка к пропитыванию парафином)
• Пропитывание парафином
• Заливка в блок

3. Важное замечание

Не использовать в процессорах формалин и воду.
Фиксация должна и может быть закончена вне процессора.
Промывка водой в процессоре не будет адекватной из-за
недостаточного объема.
Высокий риск повреждения тканей и процессора осадками спиртов
и фосфатов.
Отсрочка старта: первый спирт. Задержка: минеральное масло.

4. Принцип парафиновой проводки

объект
Вода, жиры
просветлитель
объект
дегидратант
парафин
объект
просветлитель
дегидратант
Жидкости проникают в объекты, так как в объектах их еще нет.
Жидкости, которые в объектах есть, выходят из них, потому что
концентрации их вне объектов ничтожны. Концентрации жидкостей в
объекте и окружении выравниваются согласно первому закону Фика.

5. Расписания проводки. Мелкие биоптаты 1.

• Ручной метод. Этанол (изопропанол)-ксилол-парафин. Мелкие биоптаты (не более
2 мм).
• 1. Этанол (изопропанол): 15 мин
• 2. Этанол (изопропанол): 15 мин
• 3. Этанол (изопропанол): 15 мин
• 4. Ксилол: 15 мин
• 5. Ксилол: 15 мин
• 7. Ксилол: 15 мин
• 8. Парафин: 20 мин (56-62оС)
• 9. Парафин: 20 мин (56-62оС)
• 10. Парафин: 20 мин (56-62оС).
• Минимальное общее время: 2.5 часа.

6. Расписания проводки. Мелкие биоптаты 2.

• Ручной метод. Изопропанол-минеральное масло-парафин. Мелкие
биоптаты (толщина не более 2 мм)
• 1. Изопропанол: 30 мин
• 2. Изопропанол: 30 мин
• 3. Промежуточная смесь 1: 30 мин
• 4. Промежуточная смесь 2: 30 мин
• 5. Минеральное масло: 30 мин
• 6. Парафин: 20 мин (56-62оС)
• 7. Парафин: 20 мин (56-62оС)
• 8. Парафин: 20 мин (56-62оС)
• Минимальное общее время: 3,5 часа.

7. Расписания проводки. Обычные объекты 1.

Ручной метод. Этанол (изопропанол)-ксилолпарафин.
Хирургические или аутопсийные образцы
7. Ксилол: 1 час
(толщина не более 3 мм).
8. Ксилол: 1 час
Парафин/ксилол, 1/1, 37-40оС: 1 час или до
1. Этанол (изопропанол в концентрации около 9.
(компромисс для ночного пребывания
70%): 1 час (возможна задержка на несколько утра,
объектов при использовании ксилола в
дней).
проводке).
2. Этанол (изопропанол): 1 час
10. Парафин: 1 час (56-62оС)
3. Этанол (изопропанол): 1 час
11. Парафин: 1 час (56-62оС)
4. Этанол (изопропанол): 1 час
12. Парафин: 1 час (56-62оС)
5. Этанол (изопропанол): 1 час
13. Парафин: 1 час (56-62оС).
6. Ксилол: 1 час
Минимальное общее время: 13 часов.

8. Расписания проводки. Обычные объекты 2.

• Ручной метод. Изопропанол-минеральное
масло-парафин.
• Хирургические или аутопсийные образцы
(толщина не более 3 мм).
• 1. Изопропанол: 1 час (возможна задержка • 8. Минеральное масло: 1,5 часа (или до утра
или сколько необходимо – любой срок) Этот
на несколько дней).
этап является компромиссным для ночного
• 2. Изопропанол: 1 час
пребывания объектов.
• 3. Изопропанол: 1 час
• 10. Парафин: 1 час (56-62оС)
• 4. Изопропанол: 1 час
• 11. Парафин: 1 час (56-62оС)
• 5. Изопропанол: 1 час
• 12. Парафин: 1 час (56-62оС)
• 6. Промежуточная смесь 1: 1,5 часа
• 13. Парафин: 1 час (56-62оС).
• 7. Промежуточная смесь 2: 1,5 часа
• Минимальное общее время: 13,5 часов.

9. Особенности ручного метода проводки

Отдельные батареи для мелких биоптатов и хирургического
материала.
Наиболее удобны 1л стеклянные емкости: реагент 900мл, кассеты
не более 40 (хирургические), и не более 45 (мелкие биоптаты).
Если объектов много, добавляются параллельные батареи.
Хирургический материал проводится с перерывом на ночь:
- ксилол/парафин 1/1 при 40оС
- минеральное масло без нагрева

10. Карусельный процессор. Особенности 1.

• Карусельный (линейный) процессор. Одна корзина.
• Расписания не отличаются от ручных.
• Карусельный (линейный) процессор. Две корзины.
• Расписание также не отличается.
• Сложность в том, что объекты из второй корзины проводятся чуть
дольше в предыдущем реагенте, если в следующей позиции первая
корзина пребывает дольше (это не критично).
• Важно то, что финиширует первая корзина в последнем парафине, а
вторая в предпоследнем. Поэтому эта корзина должна вручную быть
переставлена в последний парафин, либо в доп парафин в термостате.

11. Карусельный процессор. Особенности 2.

• Карусельный (линейный) процессор. Предназначен для
относительно небольшого потока
• Предпочтительнее в таких проводить мелкие биоптаты днем
• Если парафина 2, то важно иметь дополнительную станцию с
парафином в термостате (обычные объекты требуют длительного
пропитывания парафином во многих станциях и даже 3 парафина
с 2 корзинами будет крайне недостаточно несмотря на
сбалансированные расписания проводки
• Испарения реагентов попадают в помещение лаборатории при
ротации корзин, поэтому помещение должно быть хорошо
вентилируемым

12. Вакуумные процессоры. Особенности.

• Вакуумный процессор. Предназначен для большого потока.
• Может эксплуатироваться в 2 запуска: утром для биоптатов, ночью – для
хирургий
• Расписания важно настраивать так, чтобы были задействованы все станции с
реагентами (без пропусков)
• Смену реагентов проводить перед запуском мелких биоптатов (если этот
запуск полный, то дегидратант меняется перед запуском хирургических
объектов также)
• Расписания проводки не отличаются от ручного метода
- Не использовать нагрев спиртов! Только комнатная температура!!!
- Добавляется нагрев на последний просветлитель (перед парафином) до
45оС на 40 мин
- Добавляется перемешивание на малой скорости в каждой станции
- Добавляется давление/вакуум на каждой станции

13. Правила смены реагентов 1.

Фиксация и промывка объектов никогда не должны выполняться в
процессорах.
Первый спирт (дегидратант) в процессе работы разбавляется водой до 70%, не
более, поэтому может использоваться для отсроченного старта
Ни один из спиртов не должен быть мутным
Ни один из любых других реагентов не должен быть мутным (это хорошо
видно в карусельных процессорах)
При проводке одной полной партии ежедневно:
-первый спирт утилизируется, остальные передвигаются на одну позицию
влево и последний – чистый
-если группа просветлителей состоит из одинаковых реагентов (ксилол),
первый утилизируется через 5 запусков, остальные передвигаются влево на
одну позицию, последний – чистый

14. Правила смены реагентов 2.

- Если в группе просветлителей используются разные реагенты
(промежуточные смеси и минеральное масло – каждая позиция заменяется
на свежую без передвижений влево
- Если парафинов 4, первый утилизируется через 5 запусков, остальные
передвигаются влево на одну позицию, последний – чистый
- Если парафинов 3, первый утилизируется через 4 запуска, остальные
передвигаются влево на одну позицию, последний – чистый, либо вводится
дополнительная смена чистого парафина вручную на 1 час и смена
проводится так, как выше.
- Если парафинов 2, вводятся две дополнительные смены парафина вручную
и смена проводится так как если бы парафинов было 4 (см выше)
- Если объектов насчитывается примерно половина, то смена реагентов
выполняется в 2 раза реже
- Если объектов больше или меньше половины, то требуется корректировка
(чаще или реже).

15. Смена реагентов. Ручной и аппаратный метод. Хирургические и аутопсийные образцы. Этанол (изопропанол) – ксилол – парафин.

Цикл
Этанол
(изопропанол)
1
70%
Этанол
(изопропанол)
2
Чистый
Этанол
(изопропанол)
3
Чистый
Этанол
(изопропанол)
4
Чистый
Этанол
(изопропанол)
5
Чистый
1
←
←
←
Чистый
2
←
←
←
Чистый
3
←
←
←
Чистый
4
←
←
←
Чистый
5
←
←
←
Чистый
6
←
←
←
Чистый
7
←
←
←
Чистый
8
←
←
←
Чистый
9
←
←
←
Чистый
10
←
←
←
Чистый
11
←
←
←
Чистый
12
←
←
←
Чистый
Смен
13
Ксилол 1
Чистый
Ксилол 2
Чистый
Ксилол 3
Чистый
Парафин
1
Чистый
Парафин
2 Чистый
Парафин
3 Чистый
Парафин
4 Чистый
←
Чистый
←
←
Чистый
←
Чистый
←
←
Чистый
3
3

16. Смена реагентов. Ручной метод. Мелкие биоптаты. Этанол (изопропанол) – ксилол – парафин.

Цикл
Этанол
(изопропанол)
1
70%
Этанол
(изопропанол)
2
Чистый
Этанол
(изопропанол)
3
Чистый
1
←
Чистый
2
←
Чистый
3
←
Чистый
4
←
Чистый
5
←
Чистый
6
←
Чистый
7
←
Чистый
8
←
Чистый
9
←
Чистый
10
←
Чистый
11
←
Чистый
12
←
Чистый
Смен
13
Ксилол
1
Чистый
Ксилол
2
Чистый
Ксилол
3
Чистый
Парафин
1
Чистый
Парафин
2
Чистый
Парафин
3
Чистый
Парафин
4
Чистый
←
Чистый
←
←
Чистый
←
Чистый
←
←
Чистый
3
3

17. Смена реагентов. Ручной метод. Мелкие биоптаты. Изопропанол – минеральное масло - парафин.

Цикл
Изопропанол 1
70%
Изопропанол 2
Чистый
Изопропанол 3
Чистый
1
←
Чистый
2
←
Чистый
3
←
Чистый
4
←
Чистый
5
←
Чистый
6
←
Чистый
7
←
Чистый
8
←
Чистый
9
←
Чистый
10
←
Чистый
11
←
Чистый
12
←
Чистый
См
ен
13
Промежут
смесь 1
Чистый
Промежут
смесь 2
Чистый
Минеральное
масло
Чистый
Парафин
1
Чистый
Парафин
2
Чистый
Парафин
3
Чистый
Парафин
4
Чистый
Чистый
Чистый
Чистый
←
←
Чис тый
Чистый
Чистый
Чистый
←
←
Чистый
3
3

18. Смена реагентов. Ручной и аппаратный метод. Хирургические и аутопсийные образцы. Изопропанол – минеральное масло – парафин.

Цикл
Изопропанол
1
70% Чистый
Изопропанол
2
Чистый
Изопропанол
3
Чистый
Изопропанол
4
Чистый
Изопропанол
5
Чистый
1
←
←
←
Чистый
2
←
←
←
Чистый
3
←
←
←
Чистый
4
←
←
←
Чистый
5
←
←
←
Чистый
6
←
←
←
Чистый
7
←
←
←
Чистый
8
←
←
←
Чистый
9
←
←
←
Чистый
10
←
←
←
Чистый
11
←
←
←
Чистый
12
←
←
←
Чистый
Смен
13
Промежут
смесь 1
Чистый
Промежут
смесь 2
Чистый
Минеральное
масло
Чистый
Парафин
1
Чистый
Парафин
2
Чистый
Парафин
3
Чистый
Парафин
4
Чистый
Чистый
Чистый
Чистый
←
←
Чистый
Чистый
Чистый
Чистый
←
←
Чистый
3
3

19. Циклы очистки вакуумного процессора

Выполняются после любого и каждого цикла проводки.
Обязательно: стандартный цикл очистки.
Реагенты:
- ксилол (или депарафинирующий раствор)
- этанол (или изопропанол)
[Несовместимые реагенты: депарафинирующий раствор и этанол]
Замена всех реагентов через 6-8 циклов, сразу после очистки, пока они
горячие (так полнее удаляются остатки парафина и других веществ).

20. Расчет потребности в реагентах для проводки

Фиксация: не более 20/мл объект:
- 40 кассет на 1л емкость для ручной проводки (900мл/40=22,5мл)
- 300 кассет для 5л (5000/300=16.6 мл)
- 80 кассет для 2л (2000/100=20 мл).
Дегидратант (не более 20 мл/кассета)
Просветлитель (каждый вид: не более 4.5 мл) – замена 1 раз/нед
Парафин (не более 4.16мл)

21. Плотности веществ

Масса = плотность х объем; Объем = масса / плотность.
Плотности:
- Вода и 10% нейтральный забуференный формалин 1г/мл
- Спирты (любые неразведенные) и парафины (любые) 0.8 г/мл
- Ксилол 0.9 г/мл
Вода, формалин:
Ксилол:
Спирт, парафин:
1кг = 1л
1кг = 0,9л
1кг = 0,8л
1л = 1кг
1л = 1.1кг
1л = 1.2кг