впг-1, 2

1. Патогенез и диагностика альфагерпесвирусов.

Кирпичникова Г.И.

2. Герпесвирусы.

• Herpes - ползучий.
• На сегодняшний день открыто около
200 представителей данного семейства,
из них 8 типов патогенны для человека.
• Отличительным признаком вирусов
этого семейства является их
способность к латентному
существованию в клетках хозяина,
персистируя бесконечно длительное
время без клинических проявлений.

3. История вопроса (1)

• Слово герпес происходит от древнегреческого
«herpo» — ползти. Так окрестил эту болезнь
2400 лет тому назад Гиппократ. Первое
описание симптомов «простуды» на губах
было сделано римским врачом Геродотом в V
веке до нашей эры. «Пузырьки на губах у
дамы» упоминаются самим Шекспиром в 1595
году в бессмертной трагедии о любви «Ромео и
Джульетта». В 1736 году описание
генитального герпеса дал лейб-медик короля
Людовика XV врач-философ Жан Астрюк (Jean
Astruc) в своей книге «De morbis venereis».

4. История вопроса (2)

• Во Франции герпес даже получил название
«болезнь французских королей»: генитальным
герпесом страдали Людовик XIV и его внук
Людовик XV. Следующим этапом,
позволяющим изучить вирусы герпеса, стало
открытие, сделанное в 1912 году В. Грютером и
Левенштейном. Они впервые доказали
экспериментальным путем вирусную природу
герпеса. Детальному изучению вирусы герпеса
подверглись в 50-х годах прошлого века после
широкого внедрения электронной
микроскопии и культивирования в клетках.

5. Классификация сем. герпесвирусов

Подсемейство
Альфагерпесвирусы
Бетагерпесвирусы
Гаммагерпесвирусы
Вирус
ВПГ-1, ВПГ-2
ВОГ
ЦМВ
ВГ-6, ВГ-7
ЭБВ
ВГ-8

6. Вызываемые заболевания

• ВПГ-1 (вирус простого герпеса типа : поражение:
кожи, слизистой оболочки ротовой полости,
конъюнктивы или роговицы глаза, энцефалиты.
• ВПГ-2 (вирус простого герпеса типа : поражение
слизистых оболочек гениталий, у новорожденных центральной нервной системы
• ВЗВ (вирус ветрянки) ветряная оспа, опоясывающий
лишай, постгерпетическая невралгия; язвеннонекротическая форма опоясывающего герпеса СПИД-индикаторный признак заболевания

7. Персистеннция

• Персистенция (лат. persistere —
оставаться, упорствовать) — это
способность к длительному сохранению
вируса в организме хозяина или в
клеточной культуре. Герпесвирусы
имеют эффективные механизмы
взаимодействия с иммунной системой
хозяина, позволяющие им максимально
распространяться и сохраняться в
организме в течение всей его жизни.

8. Механизм персистенции ВПГ (1)

• Согласно статической гипотезе, вирус
герпеса находится в клетках
паравертебрального сенсорного ганглия в
интегрированном или свободном
непродуктивном состоянии. Под влиянием
«пускового фактора» вирус активируется и
перемещается из ганглия по аксону
периферического нерва в эпителиальные
клетки, где реплицируется. Предполагается,
что этому во многом способствуют
восприимчивость клеток и ослабление
иммунологического контроля.

9. Механизм персистенции ВПГ (2)

• Динамическая гипотеза предусматривает
постоянную репликацию и выброс из ганглия
вируса герпеса. Достигая по нерву кожи, ВПГ
вызывают микрофокусы инфекции,
сдерживаемые механизмами защиты, что
предупреждает рецидивы или ослабляет их
проявления. На развитие рецидивов
оказывает влияние состояние местного
иммунитета, угнетение которого способствует
репликации достигшего кожи вируса.

10.

• Некоторые исследователи
представляют целесообразным
подразделить формы персистенции
вируса в организме на латентную,
хроническую и медленную инфекции.

11. Латентная инфекция

• бессимптомная персистенция вируса, при
которой могут происходить репродукция
зрелого вируса и выделение его во внешнюю
среду. Цикл вирусной репродукции может
нарушиться на любом этапе и тогда
выделение вируса из такой системы требует
специальных, часто весьма сложных,
лабораторных приемов. Иногда персистенцию
вируса можно определить ИФА или
молекулярно-биологическими методами.

12. продолжение…

• В некоторых случаях в организме,
поддерживающем латентную вирусную
инфекцию, под действием каких-либо
внешних воздействий может наступить
активация персистирующего вируса, что
часто приводит к развитию острой формы
инфекционного процесса (болезни).
Хрестоматийным примером латентной
вирусной инфекции служит широко
распространенная герпетическая инфекция с
ее длительной, практически пожизненной
персистенцией вируса в чувствительных
ганглиях тройничного нерва.

13. Хроническая инфекция

• -персистенция вируса, сопровождающаяся
появлением одного или нескольких
симптомов заболевания с последующим
развитием и поддержанием патологического
процесса в течение длительного
времени. Хроническая вирусная инфекция
имеет благоприятный прогноз Примером
хронической вирусной инфекции может
служить хорошо известная хроническая
аденовирусная инфекция.

14. Медленная инфекция

• Медленная инфекция—персистенция вируса,
характеризующаяся его своеобразным
взаимодействием с организмом хозяина, при
котором, несмотря на развитие
патологического процесса, как правило, в
одном органе или в одной тканевой системе
имеет место многомесячный или даже
многолетний инкубационный период, после
которого медленно, но неуклонно
развиваются симптомы заболевания, всегда
заканчивающегося летально (ВИЧ-инфекция).

15. Персистенцию вирусов

• можно трактовать как одну из
возможностей их ускользания от
воздействия неспецифических и
особенно специфических защитных
факторов организма с целью
сохранения их как вида. Существуют
данные, объясняющие феномен
ускользания вирусов от иммунного
ответа как мимикрию вирусов.

16. Структура ВПГ

• 1) сердцевина — геном представлен
вирусной ДНК — линейная двунитевая
молекула с коротким и длинным
компонентами, в составе имеет 80 генов;
• 2) суперкапсид с внешней оболочкой
(envelop), пронизанный гликопротеиновыми
шипами, типоспецифическими антигенами, по
которым определяют отдельные серотипы
герпесвирусов;
• 3) внутренняя оболочка (tegumentum) —
расположена между суперкапсидом и
капсидом;

17. Структура ВПГ

• 4) капсид, построенный из 162 капсомеров,
диаметром 100-120 нм, организован по типу
кубической симметрии, представлен
группоспецифическими для каждого
подсемейства антигенами.
• В структуре вириона более 30 структурных
белков (гликопротеинов), семь из которых
(gB, gC, gD, gE, gF, gG, gX) находятся на
поверхности и вызывают образование
вируснейтрализующих антител.

18. Строение вируса герпеса

19.

20. Патогенез ВПГ (1)

• ВПГ при первичном инфицировании
проникает через кожу, слизистые и
начинает реплицироваться в
эпителиальных клетках, затем
происходит контакт с окончаниями
сенсорного нейрона. Капсид вируса
траспортируется к ядру нейрона, где и
устанавливается латентная инфекция
(ДИЧ).

21. Структура ВПГ

• Репродукция герпесвирусов в чувствительных
клетках — сложный процесс, протекающий с
участием многих вирионных, клеточных,
вирусиндуцированных и
вирусмодифицированных энзимов. На
поверхности вириона представлены 11
белков, 10 из которых гликозилированы (gBgM). Гликопротеины gB, gD и gE
взаимодействуют с молекулами рецепторов
на наружной мембране клеток-мишеней.

22. Свойства ВПГ.

• Альфа-вирусы (ВПГ-1, 2 и ВВЗ).
Характеризуются быстрой репликацией,
от4-8 часов до 72), способностью к
цитолизу и бессимптомным
персистированием в клетках ЦНС.

23. Патогенез (1)

• В первой фазе патогенеза вирус внедряется в
клетки эпителия (слизистой оболочки полости
рта, глотки или половых органов), где
происходит его размножение. Пораженные
клетки гибнут, в очаг воспаления мигрируют
лимфоциты и макрофаги, происходит выброс
биологически активных веществ,
повреждение капилляров и соединительной
ткани. На слизистых оболочках и коже
появляются характерные для ГИ папулы и
везикулы.

24. Патогенез (2)

• Во второй фазе патогенеза ВПГ
проникает в чувствительные нервные
окончания и по центростремительным
нервным волокнам попадает в
паравертебральные ганглии. Из полости
носа ВПГ может по обонятельным
нитям, луковицам и трактам попадать в
нейроны гиппокампа. Цикл репродукции
продолжается около 10 ч. За это время
в клетке образуется от 50 до 200 тыс.
вирионов.

25. Продолжение….

• В третьей фазе патогенеза (2–4 недели
после заражения) при нормальном
иммунном ответе происходит
разрешение первичного заболевания и
элиминация ВПГ из тканей и органов.
Однако в паравертебральных ганглиях
возбудитель в латентном состоянии
сохраняется в течение всей жизни
человека.

26. В четвертой фазе

• патогенеза происходит реактивация
размножения ВПГ и его перемещение по
нервным волокнам к месту первичного
вхождения (воротам инфекции) с рецидивом
типичного инфекционно-воспалительного
процесса и возможной диссеминацией
инфекции. Кроме этого, может произойти
лимфогенная и гематогенная диссеминация
возбудителя с последующим повреждением
тканей и органов, так как ВПГ обладает
цитопатическим действием — он разрушает
клетки, в которых размножается.

27.

• В клетках своего хозяина герпесвирус
находиться в в виде субвирусных
структур (ДИЧ). Герпесвирусы остаются
в инфицированном организме
пожизненно. Вирус может периодически
рецидивировать с характерными
клиническими проявлениями, инфекция
может протекать бессимптомно либо
приобретать генерализованый характер
с возможным летальным исходом.

28. Продолжение..

• Сохраняющиеся в течение всей жизни
человека, иногда в довольно высоких
титрах, вируснейтрализующие антитела
хотя и препятствуют распространению
инфекции, но не предупреждают
возникновение рецидивов.

29. Реактивация латентного вируса

• может быть спровоцирована
физическим или эмоциональным
стрессом, приемом цитостатиков,
гормонов, УФО, перохлаждением.
• 25% людей, имеющих 2-ую группу
крови предрасположены к
рецидивирующей герпетической
инфекции.

30. Продолжение…

• По мере прогрессирования
иммуносупрессии активация вируса
становится более частой, в процесс
вовлекаются новые ганглии, меняется
локализация и увеличивается
распространенность очагов поражения
кожи и слизистых оболочек.

31. Свойства вируса (in vivo)

• Персистенция в нейронах.
• Активная репликация в эпителиальных
клетках.
• Обнаружен в составе: ПЯЛ,
эритроцитов, тромбоцитов, моноцитов,
макрофагов

32. Физико-химические свойства

• Термолабилен: инактивация +50 - 52°С – 30
минут, +37 °С – 10 часов.
• Чувствителен: к спиртам, органическим
жирорастворителям, детергентам, желчи.
• Длительно сохраняется при низких
температурах (-70 °С )

33. Иммунитет при активации ВПГ

• СД4 ↓
• НК ↓
• Макрофаги: функциональная
активность ↓
• Цитокины: изменен спектр
• Интреферон ↓
• Апоптоз ↑

34.

Диагностика ВПГ-1, ВПГ-2 (слайд 1)
• Методы,. направленные на выявление
антигена:
- Вирусологические (любой биологический
материал)
- ПЦР (любой биологический материал)
- МФА: ПИФ, НИФ (мазки, соскобы)
- ЭМ (секционный материал, мазки, соскобы)
- ИФА на АГ (отделяемое везикул)

35. Вирусологический метод

• Это выделение вируса герпеса на
культуре клеток — куриных эмбрионах,
культуре клеток Vero, мозге мышей.
Цитопатический эффект наблюдается
через 48–72 ч. «Золотой стандарт», но
дорог и длителен во времени.

36. Определение антигена (АГ) ВПГ

• Иммунофлуоресцентный метод прямой
и непрямой. Применяют соскобы кожи и
слизистых оболочек, срезы биоптатов,
соскоб из конъюнктивы, ликвор,
содержимое везикул. Должен
применяться до назначения
этиотропной терапии и в первые дни
болезни.

37. Метод флюоресцирующих антител (МФА: ПИФ, НИФ).

• основан на изучении препаратов в
люминесцентном микроскопе при
введении в состав комплекса антигенантитело хромогена (ФИТЦ и др.),
индуцирующего свечение
определенного цвета. Исследование
длится 1-3 часа. Метод
полуэкспрессный, выявляемость не
превышает 60%.

38. Иммунофлюоресценция ВПГ1/2.

39. ПЦР

• ПЦР очень показательна при
генитальном герпесе, офтальмогерпесе,
когда материал забирается
непосредственно из очага поражения.
• Чувствительность метода и
специфичность 96-99%.
Ложнонегативные результаты:
несовпадение праймера и НК
возбудителя, некачественный забор
материала и его доставка и хранение.

40. Прямые методы позволяют

• детектировать вирусную ДНК (ПЦР) или
антигены («ранние белки») (РИФ)
непосредственно в исследуемом
материале: в лейкоцитарной взвеси,
плазме, соскобах из очагов поражения
(со слизистых, с конъюнктивы, с кожи),
спинномозговой жидкости. Выявление
ДНК или ранних белков ВПГ-1 и ВПГ-2 в
лейкоцитах крови свидетельствует о
репликации вируса.

41. Цитологический метод

• получают мазки-соскобы из элементов
сыпи, крови, ликвора, соскобов
роговицы и гениталий. Условия для
обнаружения включений, характерных
для репродукции вируса — это
немедленная фиксация мазков в спирте
и окраске по Романовскому–Гимзе.
Нельзя дифференцировать рецидив и
первичную инфекцию. Специфичность
не выше 40%. Опосредованный метод.

42.

Диагностика ВПГ-1, ВПГ-2 (слайд 2)
• Методы, направленные на выявление
АТ:
• Иммуноферментный анализ
• ИФА: непрямой метод (IgM, IgG)
• ИФА: метод захвата «capture» (IgM,
IgG).
• ИФА: высокочувствителен, специфичен,
дешев, полностью автоматизирован,
доступен, стандартизован.

43.

Диагностика ВПГ-1, ВПГ-2 (слайд 3)
• Серологические тесты: РТГА, РНГА, РН,
РСК (имеют низкую степень
чувствительности, специфичности, высокий
процент ложных результатов, не
стандартизованы.) Практически не
применяются. Не стандартизованы.

44.

Диагностика ВПГ-1, ВПГ-2 (слайд 4)
• Применение ИФА:
- Определение IgM: первичное
инфицирование, врожденная инфекция
- Определение IgG: в динамике
исследуются парные сыворотки

45.

46.

47. Иммуноблот (Westernblot, Line-blot

позволяет дифференцировать в одном тесте белки,
характерные для активации ВПГ 1 и 2 типов,
раздельно детектировать IgM и IgG к отдельным
белкам (наборы фирмы «EUROIMMUN», Германия),
следить в динамике за их сменой, что имеет высокое
диагностическое и прогностическое значение. Опыт
работы свидетельствует о возможности его
использования как при диагностике врожденного, так
и приобретенного герпеса. Данный тест в сочетании
с методами РИФ или ПЦР предоставляет весьма
ценную для врача информацию, особенно при
мониторинге врожденных и приобретенных форм, в
том числе генитального герпеса.

48. Расшифровка ИФА ( при обследовании)

Показатель
Расшифровка
IgMIgG-
У человека отсутствует иммунитет.
Опасность первичного
инфицирования высока.
IgMIgG+
Наличие иммунитета к герпесу.
Риск первичного заражения
отсутствует. Вторичное обострение
зависит от состояния иммунитета.
Возможна профилактика.
IgM+
IgG-
Первичное инфицирование,
пациенту требуется лечение.
IgM+ ?
IgG+
Вторичное обострение, больной
нуждается в терапии.

49. ИФА при беременности.

Показатель
Расшифровка
IgMIgG-
При отрицательных показателях
женщина здорова, заболевания
никогда не было. Из-за
незащищенности плода
иммунитетом риск заражения есть.
IgMIgG+
существует 3 варианта
расшифровки:
Если ранее была серонегативность,
не отмечались симптомы
герпетической инфекции – это
вторая половина первичной
инфекции с угрозой для плода.
Если ранее инфекция уже была, то
женщина является
вирусоносителем, а результат
означает рецидив. Иммунитет
присутствует, но риск для плода

50. Продолжение…

IgMIgG+
3.Наличие иммунитета. Если
иммунитет был
подтвержден, то угрозы
плоду нет
IgM+
IgG-
Начальная стадия заболевания,
есть риск для ребенка.
IgM+
IgG+
Первая половина первичной
острой инфекции, требуется
противовирусное лечение.

51. α-Герпесвирусы (ВОГ)

• VZV (вирус опоясывающего герпеса)
вызывает при первичном
инфицировании ветряную оспу и
опоясывающий герпес у лиц с
иммунодепрессией.
- Инфицирование происходит через
слизистую оболочку верхних
дыхательных путей.
- Латенция вируса – в клетках спутниках
нейронов.

52. ВОГ

53. Исторические сведения

• Заболевание известно с глубокой
древности. Описана как
самостоятельная болезнь в середине
XVI в. итальянскими врачами
В.Видиусом и Ж.Ф.Инграссия, но лишь в
конце XVIII в. ее стали рассматривать
отдельно от натуральной оспы
благодаря работам Фогеля.

54. продолжение…

• В 1911 г. Х.Арагао описал мелкие
включения – элементарные тельца – в
содержимом везикул, справедливо
сочтя их возбудителем инфекции. Вирус
varicella/herpes zoster выделен в 40-х
годах нашего столетия. В 1972 г.
И.Жубковска документировала
заражение ветряной оспой от больного
опоясывающим лишаем.

55.

У лиц со сниженным иммунным статусом
вирус VARICELLA ZOSTER вызывает
опоясывающий герпес :
-Гангренозная форма.
-Гемморагическая форма. Тяжелые
осложнения: пневмония, энцефалит,
миокардит, гепатит.
-Язвенно-некротическая форма.
-Генерализованная форма.

56. ВОГ

• Обладает высокой видовой
специфичн6остью, но отсутствуют
адекватные лабораторные модели.
Выделение вируса очень сложное и
дорогое.
• Главную роль в иммунном ответе
играют ЦТЛ и интерферон.
• Поверхностные гликопротеиды весьма
сходны с гликопротеидами ВПГ.

57. Патогенез ВОГ (1)

• Возбудитель первично размножается в
эпителии слизистой оболочке верхних
дыхательных путей. Затем вирус по
лимфатическим путям попадает в
регионарные лимфатические узлы, а потом в
кровь. В результате гематогенной
диссеминации возбудителя, обладающего
выраженной тропностью к эпителиальным
клеткам, происходит диффузное поражение
кожных покровов. Репродукция вируса в
клетках шиповатого слоя кожи приводит к их
«баллонирующей» дегенерации.

58. Патогенез (2)

• В результате накопления межтканевой
жидкости в полостях, образующихся при
некрозе эпителия, формируются типичные
везикулярные высыпания. В дальнейшем
пузырьки разрываются или их содержимое
резорбируется с образованием корочек.
Повреждённый эпителий постепенно
восстанавливается. При этом не образуется
рубцов, так как некроз эпителия не
распространяется на соединительную ткань.

59. Продолжение..

• Вирус ветряной оспы/опоясывающего
герпеса/ также обладает тропностью к
нервной ткани, поэтому в некоторых
случаях может развиться поражение
ЦНС (менингоэнцефалит). При
выраженном иммунодефиците
возможна генерализация инфекции с
поражением внутренних органов
(лёгких, печени, надпочечников и т.д.).

60. Иммунитет

• Пожизненный, однако со временем
происходит постепенное снижение
уровней специфических антител и если
вирус будет спровоцирован к
интенсивной репликации,то это будет
сопровождаться выраженным
воспалением и невралгией, поражением
кожи в ввиде локализованных
высыпаний.

61. Диагностика (ВОГ)

• Для выявления вирусных антигенов
используют жидкость из везикул,
соскобы, смывы, биоптаты.
• Оптимальным является метод
иммунофлюоресценции (МФА) с
моноклональными антителами.
• ПЦР, ЭМ, иммунопероксидазный тест.

62. Диагностика ВОГ

• Серологическая диагностика затруднена
в связи с перекрестной реактивностью с
ВПГ.
• ФАМА (тест флюоресценции антител к
мембранным антигенам)

63. Схематическая диаграмма первичного течения ветряной оспы

Инфицир
ование
вирусом
ветряно
й оспы
gE-IgG
выделение
вируса
дни
недели
месяцы

64. Схематическая диаграмма динамики маркеров VZV (опоясывающего лишая)

Реактивация
Реактивация
Схематическая диаграмма
динамики маркеров VZV
(опоясывающего лишая)
70-80%

65.

Диагностика
Varicella Zoster
Назначение
Хромоген
№ по
каталогу
Количество
анализов
(включая
контроли)
«ВектоVZV-IgM»
Выявление IgМ к вирусу
Varicella Zoster
ТМБ
D-2188
12 × 8
«ВектоVZV-gE-IgG»
Вявление IgG к
гликопротеину gE вируса
Varicella Zoster
Выявление IgG к вирусу
Varicella Zoster
ТМБ
D-2186
12 × 8
ТМБ
D-2192
12 × 8
«ВектоVZV-IgG»

66. Интерпретация результатов определения маркеров инфекции VZV

Стадия
заболевания
Инкубационный
период или
отсутствие
инфекции
Очень ранняя
первичная
инфенкция
Ранняя первичная
инфенкция
Поздняя первичная
инфекция
Реактивация
Паст-инфекция
Маркеры острой стадии
Пастинфекция
IgM
gE-IgG(остр.)
IgG(циркул.)
—
—
—
+
—
—
+
—
-+
—
—
+
+
+
+
—
+
+
+
+
+

67.

Спасибо за внимание!