Гематология

1. Гематология

1
Гематология
TS GEM 60 И ОБЩИЙ АНАЛИЗ КРОВИ (ОАК)

2.

Во все пробирки дожен быть
заранее добавлен антикоагулянт
ЭДТА К2 (EDTA K2) (2-замещенная
калиевая соль
этилендиаминтетрауксусной
кислоты) и ЭДТА К3 (EDTA K3)
Проба после аспирации в
анализаторе делится на две части,
которые под воздействием
реагентов образуют тестовые
образцы, применяющиеся в
дальнейшем для определения
WBC, HGB, RBC/PLT и
дифференциации WBC на 5 групп.
GEM 60 комбинирует несколько
методов: Импедансный,
колориметрический и цитометрия
2

3.

В анализаторе используются три ключевых
реагента:
Дилюент (Diluent) — Изотонический
буферный раствор. Его задача —
разбавить кровь, сохранить клетки
неповреждёнными и создать
электропроводящую среду для
импедансного подсчёта .
Lyse Diff — Лизирующий раствор для
канала дифференцировки. Он
разрушает эритроциты и «перфорирует»
мембраны лейкоцитов так, чтобы те
сохранили свою структуру, но стали
различимы для анализатора, и их
разделяют по размеру, гранулярности и
интенсивности свечения
Lyse Hem — Отдельный лизирующий
раствор для канала гемоглобина. Он
полностью разрушает эритроциты,
высвобождая гемоглобин
3

4. Импедансный метод (Принцип Культера) — для WBC, RBC, PLT (лейкоциты, эритроциты и тромбоциты)

Кровь разводится в изотоническом
растворе (дилюенте). Клетки, являясь
изоляторами, проходят через
маленькое отверстие (апертуру). В
этот момент они изменяют
электрическое сопротивление между
электродами, вызывая электрический
импульс
Число импульсов = количество
клеток.
Амплитуда импульса = объём
клетки.
Тромбоциты —небольшие
клетки— генерируют импульсы низкой
амплитуды, эритроциты и лейкоциты —
высокой. После лизиса эритроцитов в
суспензии остаются лейкоциты. Из
первого счёта импульсов высокой
амплитуды вычитают импульсы второго
счёта (лейкоциты) и разница
соответствует количеству эритроцитов.
4

5. Колориметрический (фотометрический) метод — для HGB (гемоглобин)

Образец, разведённый для измерения
лейкоцитов и гемоглобина, поступает в
гемоглобиновую камеру, где
смешивается с лизирующим
раствором. Лизирующий раствор
разрушает эритроциты и превращает
гемоглобин в гемоглобиновый
комплекс. Лазерный источник света
расположен сбоку от камеры и
испускает луч монохроматического
света с длиной волны 550 нм.
Сигнал оптической интенсивности
усиливается и преобразуется в сигнал
напряжения, который сравнивается с
референсными показаниями
напряжения фонового теста
5

6. Полупроводниковая лазерная проточная цитометрия — для дифференцировки WBC по 5 группам

Образец крови вводится в проточную
камеру, окружённую со всех сторон
проточной жидкостью (дилюентом).
Клетки выстраиваются одна за другой,
проходят через центр проточной
камеры и проходят через лазерный луч.
Светорассеяние под разными углами
показывает размер, гранулярность и
структуру ядра. Прямое
светорассеивание делит клетки по
размеру, боковое — по
гранулярности. Анализ
светорассеяния позволяет разделить их
на нейтрофилы, лимфоциты,
моноциты, эозинофилы и базофилы
(NEU, LYM, MON, EOS, BAS)
6

7. Параметры, измеряемые TS GEM 60

Анализатор TS Gem 60 работает в
двух режимах:
CBC (СВС): базовый анализ, 14
параметров (подсчёт эритроцитов
RBC, лейкоцитов WBC, тромбоцитов
PLT, гемоглобин HGB, гематокрит
HCT и расчётные индексы) + 3
гистограммы (RBC, WBC, PLT).
CBC+DIFF (СВС+DIFF): расширенный
анализ,
24
параметра
+
4
дополнительных исследовательских
параметра
+
2
диаграммы
рассеяния (главная и боковая) + 2
гистограммы (RBC, PLT).
7

8. Эритроцитарные параметры (красные клетки крови, переносящие кислород)

RBC (Red Blood Cells, Эритроциты): Измеряется импедансным
методом (принцип Культера) .
HGB (Hemoglobin, Гемоглобин): Определяется
колориметрическим (фотометрическим) методом.
Расчетные эритроцитарные параметры:
HCT (Hematocrit, Гематокрит): HCT = (RBC × MCV)/10
MCV (Mean Corpuscular Volume, Средний объём эритроцита):
Средний размер одного эритроцита.
MCH (Mean Corpuscular Hemoglobin, Среднее содержание
гемоглобина в эритроците): MCH = HGB / RBC
MCHC (Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration, Средняя
концентрация гемоглобина в эритроците): Показывает, насколько
«насыщен» эритроцит гемоглобином: MCHC = HGB / HCT × 100
RDW-CV (Red Cell Distribution Width — Coefficient of Variation,
Ширина распределения эритроцитов по объёму): Коэффициент
вариации, отражающий степень анизоцитоза (различия
эритроцитов по размеру). Рассчитывается как отношение
стандартного отклонения объёма к MCV.
RDW-SD (Red Cell Distribution Width — Standard Deviation):
Стандартное отклонение ширины распределения эритроцитов.
Это прямое измерение ширины гистограммы на уровне 20% от
пика. Не зависит от MCV.
8

9. Тромбоцитарные параметры (тромбоциты — клетки, отвечающие за свёртываемость крови)

PLT (Platelets, Тромбоциты): Абсолютное количество
тромбоцитов. Подсчитывается импедансным методом
импульсы низкой амплитуды.
Расчетные тромбоцитарные параметры:
MPV (Mean Platelet Volume, Средний объём
тромбоцита)
PCT (Plateletcrit, Тромбокрит): Аналог гематокрита для
тромбоцитов. Показывает, какую долю объёма крови
занимают тромбоциты: PCT = (PLT × MPV) / 10000
PDW (Platelet Distribution Width, Ширина распределения
тромбоцитов по объёму): Степень гетерогенности
тромбоцитов по размеру
P-LCR (Platelet-Large Cell Ratio, Коэффициент больших
тромбоцитов): Процентное содержание крупных
тромбоцитов (объёмом более 12 фл) от общего числа
тромбоцитов: P-LCR = (P-LCC / PLT) × 100, где P-LCC —
количество тромбоцитов объёмом более 12 фл
9

10. Лейкоцитарные параметры (Лейкоциты — это клетки иммунной системы)

WBC (White Blood Cells, Лейкоциты): Кондуктометрический
(импедансный) метод. Подсчитывается после лизиса
эритроцитов.
Дифференцировка лейкоцитов (5-DIFF): Анализатор
подсчитывает как относительное (%), так и абсолютное (#)
количество каждого типа лейкоцитов методом лазерной
проточной цитометрии. Клетки проходят через лазерный луч.
Анализ прямого (FSC) и бокового (SSC) светорассеяния позволяет
разделить лейкоциты на 5 популяций.
• NEU (Нейтрофилы): Основные клетки, борющиеся с
бактериями.
• LYM (Лимфоциты): Отвечают за иммунную память и борьбу с
вирусами.
• MON (Моноциты): Фагоцитируют крупные частицы и бактерии.
• EOS (Эозинофилы): Участвуют в аллергических реакциях и
борьбе с паразитами.
• BAS (Базофилы): Самый редкий тип лейкоцитов, участвует в
аллергических реакциях.
10

11. Диаграммы рассеяния

Главная диаграмма рассеяния (или DIFFскаттерограмма): Это основной график
для дифференцировки. По одной оси
откладывается светорассеяние под малым
углом (FSC), которое зависит от размера
клетки. По другой оси — светорассеяние
под углом 90° (SSC), которое зависит от
внутренней сложности клетки
(гранулярность, структура ядра)
Боковая диаграмма рассеяния (или
WBC/BASO-скаттерограмма): Это
дополнительный график, который
используется для точного подсчета
базофилов — самой редкой популяции
лейкоцитов
11

12. Расчет 3-DIFF (лимфоциты, моноциты/«средние клетки», гранулоциты) по объёму (метод Культера)

Под действием гемолитика разные типы лейкоцитов меняют
размер в разной степени, и тогда их удаётся различить по
объёму.
На гистограмме лейкоциты распределяются так:
а — 35–90 фл: лимфоциты (сильно уменьшаются под
действием гемолитика).
б — 120–400 фл: гранулоциты — нейтрофилы, базофилы,
эозинофилы (сжимаются незначительно).
в — 90–120 фл: зона «средних лейкоцитов» (MID). Лучше
всего коррелирует с моноцитами, но коэффициент
корреляции невысок (R = 0,5–0,8), поэтому правильнее
называть их «средние клетки». Сюда же могут частично
попадать базофилы, эозинофилы и патологические
формы.
12

13. Дополнительные параметры

Незрелые гранулоциты (IG) — это клетки-предшественники
нейтрофилов (метамиелоциты, миелоциты, промиелоциты),
которые в норме находятся в костном мозге и не должны попадать в
периферическую кровь . Их появление в анализе крови — это
тревожный сигнал, который указывает на то, что костный мозг
усиленно работает, чтобы справиться с инфекцией или
воспалением. Этот параметр особенно важен для ранней
диагностики сепсиса и других тяжелых бактериальных инфекций .
Атипичные лейкоциты (также называемые реактивными или
вариантными лимфоцитами) — это активированные лимфоциты,
которые изменили свою форму и размер в ответ на стимуляцию .
Они появляются при вирусных инфекциях (например, инфекционный
мононуклеоз, вирусный гепатит), а также при аллергических
реакциях или приеме некоторых лекарств . Их появление — это
признак того, что иммунная система активно борется с чем-то.
В режиме 5-DIFF анализатор не имеет отдельной программы для
поиска атипичных лимфоцитов (ALY) или незрелых гранулоцитов (IG).
Он лишь подсвечивает флажками (flags) образцы, в которых
заподозрено наличие таких клеток, и предлагает провести ручную
микроскопию.
13

14. 6-DIFF и 7-DIFF (сначала рутинный канал WDF, а затем, если он заподозрит неладное, автоматически включается специализированный

канал WPC)
Канал WDF (White Cell Differential): Реагент перфорирует мембраны
лейкоцитов. Флуоресцентный краситель проникает внутрь и
окрашивает в основном РНК цитоплазмы. Считает 5 популяций
зрелых лейкоцитов и имматурные гранулоциты (IG). Если он видит
подозрительные клетки, то выдаёт флажок-предупреждение: Бласты
или аномальные лимфоциты.
Канал WPC (White Precursor Cell): Более сильный лизис повреждает
липидные мембраны клеток, и краситель проникает в ядро и
окрашивает ДНК (а не РНК, как в WDF). Разные патологические
клетки по-разному реагируют на этот агрессивный реагент из-за
состава их мембран
Бласты (Blasts) — ретикулоциты, Молодые тромбоциты, Незрелые
гранулоциты
2. Аномальные/неопластические лимфоциты — атипичные лейкоциты
1.
14