Санитарная микробиология

1. САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

МУК 4.2.2942—11
Методы санитарнобактериологических
исследований
объектов
окружающей среды,
воздуха и контроля
стерильности
в лечебных
организациях

2.

3.2. Исследования микробной
обсемененности объектов внешней среды
3.2.1. Бактериологическое исследование
микробной обсемененности объектов внешней
среды предусматривает определение
стафилококков, бактерий группы кишечных
палочек, сальмонелл, синегнойной палочки.
Отбор проб с поверхностей различных
объектов осуществляют методом смывов.
По эпидемиологическим показаниям
номенклатура исследований микробной
обсемененности объектов внешней среды
может быть расширена.

3.

3.2.2.
Взятие смывов производят
стерильными ватными тампонами,
вмонтированными в пробирки. Для
увлажнения тампонов в пробирки наливают по
2,0 мл стерильной 0,1 % пептонной воды с
добавлением нейтрализаторов
дезинфицирующих средств.
3.2.3.
При контроле мелких предметов смывы
забирают с поверхности всего предмета. При
контроле предметов с большой поверхностью
смывы проводят в нескольких местах
исследуемого предмета общей площадью
примерно 100 см2.

4.

схема бактериологического исследования
на обнаружение стафилококка
3.2.4. Для обнаружения стафилококков делают высев
0,2—0,3 мл смывной жидкости в пробирку с 5,0 мл 6,5 %
солевого бульона. Засеянные пробирки инкубируют при
37 С в течение (24 ± 2) ч, после чего делают высев на
желточно-солевые среды на основе сред:
элективно-солевой агар, стафилококкагар,
манитолагар или среда № 10 по ГФ XII, агар БайдПаркер. Дальнейшие исследования выделенных
культур стафилококков проводят по схеме:
1. Первый день.
Для определения наличия S. aureus забор проб проводят
на желточно-солевые среды на основе сред: элективносолевой агар, стафилококкагар, маннитолагар или среда
№ 10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Чашки с посевами
инкубируют в термостате при 37 С (48 ± 2) ч.

5.

2. Второй—третий день.
На вышеуказанных средах стафилококк растет в виде
круглых, блестящих, маслянистых, выпуклых,
пигментированных колоний. Следует учитывать, что
стафилококки, выделенные от человека, дают
положительную лецитовителлазную реакцию в 60—70 %
случаев. Отвивка на скошенный агар для дальнейшего
исследования не менее 2 колоний, подозрительных на
стафилококк.
Для исследования отвивают прежде всего колонии,
дающие положительную лецитовителлазную реакцию
(образование радужного венчика). При отсутствии на
чашках таких колоний дальнейшему исследованию
подвергаются пигментированные колонии, схожие по
морфологии со стафилококком. При одновременном
наличии на чашках колоний стафилококка,
отличающихся по пигменту, следует отвивать не менее
двух колоний различного вида. Пробирки с посевом
помещают в термостат при 37 С на (24 ± 2) ч.

6.

3. Четвертый день.
После инкубации у выделенных штаммов проверяют
морфологию, тинкториальные свойства (окраска по
Граму) и наличие плазмокоагулирующей активности
в реакции плазмокоагуляции (РПК).
Окраску по Граму проводят общепринятым методом.
Под микроскопом окрашенные по Граму
стафилококки имеют вид фиолетово-синих кокков,
располагающихся гроздьями или небольшими
кучками («кружево»).
Если культура обладает только
плазмокоагулирующей или только
лецитовителлазной активностью, то для
окончательного ответа требуется учитывать другие
признаки, позволяющие определить принадлежность
штамма к виду S. aureus (ферментация маннита,
гемолитическая активность).

7.

При
необходимости, после выделения чистой
культуры, проводят определение
чувствительности/устойчивости к
антибиотикам, дезинфицирующим
средствам, бактериофагам.
4. Пятый день.
Учёт результатов дополнительных тестов.
Окончательная выдача ответа.

8. МУК 4.2.2942—11 Выявление энтеробактерий

МУК 4.2.2942—11
ВЫЯВЛЕНИЕ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ
3.2.5. Для обнаружения бактерий группы
кишечных палочек делают высев 0,2—0,3 мл
смывной жидкости в пробирку с 5,0 мл среды
Кесслера. Засеянные пробирки инкубируют
при 37 С в течение (24 ± 2) ч и делают пересев
на среду Эндо. Выросшие колонии на среде
Эндо подвергают дальнейшему изучению для
установления их возможной принадлежности к
патогенным энтеробактериям.

9. МУК 4.2.2942—11 Выявление энтеробактерий

МУК 4.2.2942—11
ВЫЯВЛЕНИЕ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ
3.2.6.
Для обнаружения сальмонелл
делают высев 0,2—0,3 мл смывной жидкости
в пробирку с 5,0 мл одной из сред
обогащения (магниевая, селенитовая или
среда Раппапорта-Вассилиадиса).
Засеянные пробирки инкубируют при 37 С в
течение 18—20 ч, делают пересев на среду
Эндо и висмут-сульфит агар с последующим
отбором подозрительных колоний и их
идентификацией.

10. МУК 4.2.2942—11 Выявление синегнойной палочки

МУК 4.2.2942—11
ВЫЯВЛЕНИЕ СИНЕГНОЙНОЙ ПАЛОЧКИ
3.2.7.
Для обнаружения синегнойной палочки
делают высев на среду № 8 (бульон для накопления
стафилококков и синегнойной палочки) и среду № 9
(для определения синегнойной палочки по наличию
пигмента пиоцианина) или питательные среды в
соответствии с ГФ XII. Колонии, подозрительные на
синегнойную палочку (колонии с ровными или слегка
волнистыми краями, гладкой блестящей
поверхностью с характерным запахом и пигментом,
однако, следует учесть, что запах и пигмент могут
сильно варьировать или вообще отсутствовать),
пересевают на скошенный агар.
P. aeruginosа – Грам (-) палочка, подвижная,
оксидазо(+), О/F глюкозы (+/-), ростёт при 42 С.

11. МУК 4.2.2942—11

3.2.8. Ориентировочный перечень объектов,
подлежащих санитарно-бактериологическому
контролю методом смывов:
А. Операционный блок:
интубационная трубка;
маска наркозного аппарата;
тройник наркозного аппарата;
гофрированная трубка;
ларингоскоп;
роторасширитель;
дыхательный мешок;

12.

ёмкости и приспособления для мытья и обработки
рук;
фартуки (клеенчатые или полиэтиленовые);
рабочие столы;
операционный стол;
шланг вакуум-отсоса, внутренняя часть емкости;
шланг кислородной подводки;
клапан вдоха;
стойки для введения лекарственных средств и
вспомогательные приспособления;
ручка бестеневой лампы;
руки персонала, участвующего в операции;
медицинские изделия многократного применения;

13.

Б. Послеоперационные палаты, отделения,
палаты реанимации и интенсивной терапии:
кровать и постельное белье, подготовленные для
больного;
полотенца и приспособления для обработки рук
персонала;
руки персонала;
шланг кислородной подводки;
запасная наркозная аппаратура (набор
реанимационной укладки);
шланг вакуум-отсоса, внутренняя часть емкости;
внутренняя поверхность шкафов и холодильников
(для хранения лекарственных средств,
градусников);
медицинские изделия многоразового
использования;

14.

В. Перевязочные, процедурные:
кушетка и приспособления для перевязок;
полотенца и приспособления для обработки рук
персонала;
руки персонала;
спецодежда персонала;
мебель (медицинские столы, тумбочки);
оборудование для химической стерилизации (стойки,
чехлы для хранения стерильных эндоскопов, емкости
с крышкой для химической стерилизации);
гибкая часть эндоскопов и оптика;
внутренняя поверхность шкафов и холодильников
для хранения лекарственных препаратов и изделий
медицинского назначения;
внутренняя и наружная поверхности бактерицидных
камер для хранения простерилизованных изделий
медицинского назначения.

15. МУ № 3182-84 «Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках

МУ № 3182-84 «МЕТОДИЧЕСКИЕ
УКАЗАНИЯ ПО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМУ
КОНТРОЛЮ В АПТЕКАХ
Ориентировочный перечень объектов,
подлежащих контролю методом смывов:
Рабочее место
Стол для приготовления инъекционных
растворов
Стол для приготовления глазных капель
Весы для взвешивания сухих веществ
Тара для хранения прокладок и пробок
Ступки
Кран водопроводный
Руки, сан. одежда персонала
Полотенце

16. МУ 2657- 82. «Методические указания по санитарно-бактериологическому контролю на предприятиях общественного питания и торговли

МУ 2657- 82. «МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО
САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОМУ КОНТРОЛЮ НА
ПРЕДПРИЯТИЯХ ОБЩЕСТВЕННОГО ПИТАНИЯ И
ТОРГОВЛИ ПИЩЕВЫМИ ПРОДУКТАМИ»
2.7.3.
В практике текущего санитарного надзора за
объектами общественного питания, торговой сети,
пищеблоками детских, дошкольных и подростковых
учреждений, а также буфетами-раздаточными
лечебно-профилактических учреждений (в том числе
санаториев, домов отдыха и др.) широко используется
метод смывов с целью контроля эффективности
санитарной обработки инвентаря, оборудования,
посуды, санитарной одежды и рук персонала. Метод
смывов дает возможность объективно оценить
санитарное содержание обследуемых
учреждений.

17.

При проведении санитарно-бактериологических
исследований смывов в основном ограничиваются
выявлением бактерий группы кишечных
палочек, обнаружение их расценивают как
одно из подтверждений нарушения
санитарного режима При выявлении вторичного
массивного обсеменения готового продукта со
значительным превышением в нем общего
количества микробов в смывах также необходимо
определять общую бактериальную
обсемененность и наличие бактерий рода
Proteus и St. aureus.
Особое внимание при проведении смывов
уделяют контролю оборудования и
аппаратуры, которые используются по ходу
технологического процесса приготовления
продуктов, не подвергающихся в дальнейшем
тепловой обработке (холодный цех).

18.

При взятии смывов необходимо пользоваться следующими
рекомендациями:
Взятие смывов производится с помощью стерильных
увлажненных ватных тампонов, вмонтированных в
пробирки с 5мл 0,1% пептонной воды или изотонического
раствора NaCl
1) Из оборудования следует обращать внимание на разделочные доски,
мясорубки, производственные столы для готовой пищи, особенно в цехе
приготовления холодных закусок.
2) Смывы с рук, с санитарной одежды, полотенец берутся в основном у
работников, имеющих дело с продукцией, не подвергающейся в
дальнейшем тепловой обработке (персонал кухни, холодного цеха,
раздатчицы, буфетчицы, официанты, продавцы). Порядок определен
разделом 2.7.3, п. "а".
3) Смывы с крупного оборудования и инвентаря берут с поверхности в 100
кв. см, для ограничения поверхностей используют шаблон (трафарет),
сделанный из проволоки, металлической пластинки. Трафарет имеет
площадь 25 кв. см, чтобы взять смывы с площади в 100 кв. см, его
накладывают 4 раза в разных местах поверхности контролируемого
объекта.

19.

4) При взятии смывов с мелких инструментов обтирается вся
поверхность предмета, при заборе смывов с тарелок
протирают всю внутреннюю поверхность. При взятии
смывов с мелких предметов одним тампоном протирают
три одноименных объекта - три тарелки, три ложки и т.п.
У столовых приборов протирают их рабочую часть.
5) При исследовании стаканов протирают внутреннюю
поверхность и верхний наружный край стакана на 2 см
вниз.
6) При взятии смывов с рук протирают тампоном ладонные
поверхности обеих рук, проводя не менее 5 раз по каждой
ладони и пальцам, затем протирают межпальцевые
пространства, ногти и подногтевые пространства.
7) При взятии смывов с санитарной одежды протирают 4
площадки по 25 кв. см - нижнюю часть каждого рукава и 2
площадки с верхней и средней частей передних пол
спецовки. С различных мест полотенца берут 4 площадки
по 25 кв. см.

20. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ СМЫВОВ

При текущем санитарном надзоре за предприятиями общественного
питания и торговли, детскими и лечебными учреждениями
исследование смывов проводят на присутствие бактерий группы
кишечных палочек.
Исследование на наличие St. aureus, бактерий рода Proteus,
определение общей бактериальной обсемененности производится по
показаниям. Например:
а) исследование смывов на стафилококки проводят при обследовании
кремово-кондитерских цехов, столовых и ресторанов, молочных
кухонь и других пищеблоков, обращая особое внимание на контроль
рук персонала;
б) общую микробную обсемененность можно определять для
установления эффективности санитарной обработки посуды в
посудомоечных машинах, а также при оценке новых моющих и
дезинфицирующих средств.
В случае повторного обнаружения бактерий группы кишечных
палочек в значительном проценте смывов на объекте рекомендуется
провести исследование смывов с инвентаря, оборудования и рук
персонала на наличие энтеробактерий

21.

5.2.1. Методика посева смывов на БГКП.
При плановых санитарно-гигиенических
обследованиях для выявления БГКП производят
посевы смывов на среды Кесслер с лактозой или
КОДА, при этом в пробирку со средой опускают
тампон и переносят оставшуюся смывную жидкость.
Посевы на средах Кесслер или КОДА инкубируют при
37 град. C, через 18 - 24 часа со среды Кесслер
производят высев на плотную дифференциальную
среду Эндо, со среды КОДА высев производят только в
случае изменения окраски среды или ее помутнения.
Далее чашки термостатируют при 37 град. 18-20ч.
Посевы просматривают. Из колоний, подозрительных
или типичных для БГКП, готовят мазки, окрашивают
по Граму и микроскопируют. Обнаружение
грамотрицательных палочек указывает на наличие
БГКП (п.4.4.1)

22.

5.2.2 Методика посева на общую бактериальную
обсемененность.
Для определения общей обсемененности поверхностей
контролируемых предметов взятие смывов производят
по методике, описанной выше (п. 4.3), перед посевом в
пробирку с тампоном добавляют 5 мл 0,1% пептонной
воды или изотонического раствора хлорида натрия.
Тампон тщательно отмывают, после чего 1,0 мл
смывной жидкости помещают в чашку Петри и
заливают расплавленным МПА. Чашки помещают в
термостат при 30 град. C. Предварительный подсчет
выросших колоний производят через 48 часов,
окончательный - через 72 часа. Количество колоний,
выросших на чашке, умножают на 10 для определения
общего количества бактерий, содержащихся на
поверхности исследуемого предмета.

23.

5.2.3. Методика посева на St. aureus.
Для выявления St. aureus посев смывов производят
на чашки с МСА или ЖСА, непосредственно втирая
посевной материал тампоном, затем последний
погружают в пробирку с 6,5% солевым бульоном.
Если необходимо определить и бактерии группы
кишечных палочек, то остатки смывной жидкости
переносят пипеткой в среды Кесслер или КОДА.
Далее - культуру определяют до рода и вида.
5.2.4. Оценка результатов.
Обнаружение санитарно-показательных и условнопатогенных бактерий в смывах с поверхностей
чистых, подготовленных к работе предметов,
инвентаря и оборудования, а также рук персонала
свидетельствует о нарушении санитарного режима и
дает основание для проведения административных
мер.

24. БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ!