Лиганды, используемые в аффинной хроматографии

1.

Лиганды используемые в
аффинной хроматографии
1. Иммобилизованные лектины
a. ConA концевые сахара Man, NANA
b. WGA концевые сахара NAGA
c. Lentil Lectin Man, NANA
2. Иммобилизованные красители
3. Иммобилизованные субстраты - кофакторы
4. Металл хелатная хроматография Zn, Co, Ca, Fe
5. Иммобилизованные лиганды (гормоны)
6. Ковалентная хроматография – иммобилизация по -SH
7. Хроматография на антителах - Иммуноаффинная хроматография

2.

3. Аффинная хроматография

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10.

11.

12.

13.

14.

15.

16.

17.

18.

19.

20.

21.

22.

23.

24.

25.

26.

27.

28.

Молекулярные основы металхелатной хроматографии

29.

30.

31.

32.

Лектины
используемые в аффинной хроматографии гликопротеинов

33.

Специфичность и способы элюции гликопротеинов
с лектинсодержащих сорбентов

34.

35.

Эффективность связывания антител,
Влияние концентрации BrCN и рН при связывании
BrCN
Иммобилизация Антител на Sepharose
pH8,7(mgAB/2ml)(%)
pH7,2(mgAB/2ml)(%)
pH6,4(mgAB/2ml)(%)
100 mg/ml
19,3 (96,5%)
18,6 (93,0%)
18,0 (90(%)
50 mg/ml
18,6 (92,7%)
17,8 (89%)
15,3 (76,5%)
25 mg/ml
17,1 (85,5%)
15,5 (73,6%)
14,7 (73,5%)

36.

Связывающая способность BrCN активированной Сефарозы
МАТ иммуноаффинного сорбента.
Эффект концентрации BrCN, и рН реакции иммобилизации.
BrCN
Антигенсвязывающая
эффективность
Общее
количество
связавшегося на
антителах
фермента
рН
8,7
рН
7,2
рН
6,4
рН
8,7
рН
7,2
рН
6,4
100
0,42
0,47
0,49
8,13
8,73
8,82
50
038
0,42
0,49
6,95
7,51
7,52
25
0,36
0,47
0,51
6,07
7,20
7,42

37.

Эффект концентрации антител
на антигенсвязывающую способность AffiGel10 сорбента
Кол-во АТ
связанных с
сорбентом
мг/мл
Выход
фермента
в мг.
Антигенсвязывающая
эффективность
мг/мл
13,5
6,78
0,21
7,6
3,40
020
4,9
3,84
0,26
2,4
1,8
0,25
0,61
0,48
0,26

38.

Антиген-связывающая емкость иммуносорбентов,
приготовленных из различных МАТ
МАТ
Антитела
иммобилизова
нные
на
сорбент
мг
%
Общее
количество
связавшегося
фермента
(мг)
Антигенсвязывающая
эффективность
Мг/мл
3D11
18,7
93,5
19,4
1,00
3F3
17,2
86,0
16,0
0,91
3E1
16,5
82,5
14,2
0,83
2B12
17,5
87,5
9,8
0,56
1C4
18,7
93,5
8,7
0,48
2D3
15,3
76,5
8,0
0,53
4D4
18,6
93,0
8,0
0,043
4D7
17,7
87,0
1,6
0,09
3H11
17,7
88,5
1,0
0,06
5A6
17,4
87,0
0,4
0,02

39. Эффект концентрации антител на антиген-связывающую емкость AffiGel10 сорбента

Эффект концентрации антител на антигенсвязывающую емкость AffiGel10 сорбента
Количество
Выход Эффективность
связывания
иммобилизованн антиген
а
ых антител мг/мл
мг/мг
мг
13,5
6,78
0,21
7,6
3,40
0,20
4,9
3,84
0,26
2,4
1,8
0,25
0,61
0,48
0,26

40.

41.

42.

43.

44.

45.

1. Иммобилизованные лектины
2. Иммобилизованные красители
3. Иммобилизованные субстраты - кофакторы
4. Металл хелатная хроматография Zn, Co, Ca, Fe
5. Иммобилизованные лиганды (гормоны)
6. Ковалентная хроматография – иммобилизация по -SH
7. Хроматография на антителах - Иммуноаффинная
хроматография