Лаборатория «Микробные технологии»

1. Лаборатория «Микробные технологии»

ЛАБОРАТОРИЯ
«МИКРОБНЫЕ
ТЕХНОЛОГИИ»
Проект выполнили: Агабекян И.А.
Фазлеева И.И.
Яппарова О.Н.
Казань, 2017г.
1

2. Микробные технологии

МИКРОБНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ
Цели центра микробных биотехнологий связаны с
решением научных задач в области производства
ферментов, добавок для сельскохозяйственных
животных, антибиотиков, различных интерферонов,
нахождении общего пути улучшения жизни
человечества на основе фундаментальных научных
достижений.
2

3. Виды проводимых анализов

ВИДЫ ПРОВОДИМЫХ
АНАЛИЗОВ
1. Western-blot анализ
2. Белковый 2D форез
3. Белковый электрофорез
4. Выделение генов ферментов из
бактериальной ДНК
10.Качественная
реакция
на
присутствие ферментов
11.Культивирование
бактериальных
штаммов
12.Метод рестрикции-лигирования
13.Микроскопия световая
5. Выделение геномной ДНК
14.Определение активности фермента
6. Выделение и очистка фермента
15.Полимеразно-цепная реакция (ПЦР)
7. Выделение плазмидной ДНК
16.Секвенирование ДНК
8. ДНК электрофорез
9. Идентификация микроорганизмов
методом
MALDI-TOF
массспектрометрии
17.Трансформация бактериальной ДНК
3

4.

4

5. Белковый форез

БЕЛКОВЫЙ ФОРЕЗ
- способ разделения
смеси белков на фракции
или
индивидуальные
белки, основанный на
движении
заряженных
белковых макромолекул
различного
молекулярного веса в
стационарном
электрическом поле.
5

6. Western-blot анализ

WESTERN-BLOT АНАЛИЗ
- аналитический
метод,
используемый
для
определения
специфичных
белков
в
образце.
6

7. Идентификация микроорганизмов методом MALDI-TOF масс-спектрометрии

ИДЕНТИФИКАЦИЯ
МИКРООРГАНИЗМОВ
МЕТОДОМ MALDI-TOF МАСССПЕКТРОМЕТРИИ
- Метод определяет спектр
белков
напрямую
из
бактериальной клетки. Для
каждого
вида
микроорганизмов
сформирован
характерный
набор белков (биомаркеров),
полученный на основе анализа
не менее 50 масс-спектров
этого вида. Структурированная
таким образом база данных
позволяет быстро и точно
идентифицировать
микробиологические штаммы.
7

8. Секвенирование

СЕКВЕНИРОВАНИЕ
техника
определения
нуклеотидной
последовательности ДНК и РНК
для получения формального
описания
её
первичной
структуры.
В основе метода лежит принцип
секвенирования путём синтеза:
• Одноцепочечные фрагменты
ДНК закрепляются на твердой
подложке.
• ДНК-зависимая
ДНК
полимераза
синтезирует
комплементарную цепь.
• Встраивание каждого нового
нуклеотида регистрируется с
помощью камеры.
8

9. Бокс биологической (микробиологической) безопасности I класс

БОКС БИОЛОГИЧЕСКОЙ
(МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ)
БЕЗОПАСНОСТИ I КЛАСС
Принцип действия:
Действие
бокса
биологической
безопасности
основано
на
принудительном удалении опасных
веществ из рабочей зоны потоком
воздуха, очистке удаляемого воздуха из
боксов биологической безопасности
системой фильтрации и выбросе воздуха
во внешнюю среду.
9

10. бокс микробиологической безопасности II класса

БОКС МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ
БЕЗОПАСНОСТИ II КЛАССА
• Физическая
изоляция
патогенных
биологических
агентов
(ПБА)
и
микроорганизмов
с
целью
предотвращения возможности
заражения воздушно-капельным
путем
персонала
и
контаминации воздуха рабочего
помещения
и
окружающей
среды.
• Возможность
работы
с
небольшим
количеством
токсичных химических веществ,
радионуклидов
и
удаления
запахов рабочих агентов.
10

11. Перечень затраченных реактивов и количество на 10анализов

ПЕРЕЧЕНЬ ЗАТРАЧЕННЫХ
РЕАКТИВОВ И КОЛИЧЕСТВО НА
10АНАЛИЗОВ
Маркеры молекулярного веса ДНК
50мкл.
Мясо-пептонный агар (МПА)
200г.
Набор для аффинной хроматографии
50мл.
Агар
10г.
Агароза
150г.
Акриламид
30г.
Аммоний сернокислый
Бромфеноловый синий
10г.
5г.
Набор для идентификации микроорганизмов 2мл.
на масс-спектрометре
Набор для проведения ПЦР с Taq полимеразой 2мл.
Гидрокарбонат натрия
12г.
Натрий углекислый
10г.
Гидрооксид калия
15г.
5г.
Гидрохлорид аммония
Дезоксирибонуклеотиды (dNTP)
3г.
Нитрат натрия
Праймеры для проведения ПЦР
10мкл.
Раствор Брэдфорд
50мл.
ДНК лигаза
40мкл.
Соляная кислота конц.
45мл.
ДНК полимераза
30мкл.
Сорбент для ионообменной хроматографии
30мл.
Додецилсульфат натрия (SDS)
10г.
Спирт 96%
1л.
Дрожжевой экстракт
50г.
20г.
Кит для выделения геномной ДНК
1 набор
Сульфат калия
Трис
Кит для выделения плазмидной ДНК
1 набор
50г.
Краситель Gel Red
10мкл.
Хлорид натрия
ЭДТА
Краситель Кумасси
300мл.
Экзонуклеазы рестрикции
500мкл.
45мкл.
200г.
10г.
11

12. РАСЧЕТ ПОТРЕБЛЯЕМОЙ ЭНЕРГИИ

Оборудование
Кол-во Вт/ч
Автоклав паровой «ВК-75-01»
1
Блок питания для электрофореза «OmniPAC MAXI»
3
Газовый хроматограф «Хроматэк-Кристалл 7000»
1
Секвенатор «3100 DNA Analyzer» Applied Biosystems
1
Моноблок Lenovo S50 Full HD 4Gb/500Gb
7
Лабораторный морозильник ММ-180/20/35 POZIS
1
Бокс биологической (микробиологической) безопасности I класс 1
БАВ-"Ламинар-С"-1,2 (110.120)
MALDI-TOF масс-спектрометр MALDI-7090
1
Плитка нагревательная «HP-20A»
2
ПЦР-амплификатор «S1000» (Bio-Rad, США)
1
Сушильный шкаф «ШС-80-01»
1
Холодильник с нижней морозильной камерой Indesit IB 160 R
3
2300
450
5000
7500
90
6000
800
ч. в
день
4
2
2
4
6
24
5
4000
600
400
1600
1300
2
2
5
4
24
176
52,8
44
140,8
2308
Шейкер-инкубатор Biosan ES-20
450
6
178,2
3
КВт/ч в
месяц
202,4
59,4
220
560
83,16
4320
88
ИТОГО: ~ 9347кВт/ч в месяц
12

13. Расчет потребляемой воды

РАСЧЕТ ПОТРЕБЛЯЕМОЙ
ВОДЫ
Наименование
Количество
1.
Водяная
баня
GFL
1003(Германия)
2. Деионизатор воды «GFL
2001/4»
3. Стиральная машина с
сушкой белья Еlectrolux
4. Душевая кабина
5. Моечная лабораторная
1
Потребляемая вода/
сутки
14 л
1
10 л
1
50 л
1
1
900 л
350 л
ИТОГО: ~1324 л (1,324 м3) воды
13

14. Кадры. Список сотрудников

КАДРЫ. СПИСОК
СОТРУДНИКОВ
1.
Зав. лабораторией
2.
Научные сотрудники (5 чел.)
3.
Лаборант (4 чел.)
4.
Инженер по охране труда (1 чел.)
5.
Техник-инженер (1 чел.)
6.
Обслуживающий персонал (2 чел.)
14

15. АККРЕДИТАЦИЯ ЛАБОРАТОРИИ

15

16. ПРЕДСТАВЛЕНИЕ (ФОРМЫ) РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗОВ

ПРОТОКОЛ ЛАБОРАТОРНЫХ
ИССЛЕДОВАНИЙ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Лаборатория «Микробные технологии»
123456, РТ, г. Казань, ул. Журналистов, д.15, тел. 512-34-56
Наименование пробы (образца): _______________________________________
Дата и время доставки пробы (образца): ________________________________
Условия транспортировки: ____________________________________________
Условия хранения: ___________________________________________________
Дополнительные сведения: ____________________________________________
Наименование проведенного(-ых) анализа(-ов): __________________________
Результаты : _________________________________________________
Результаты распространяются на образец продукции, представленный на
испытания. Запрещается перепечатка протокола без разрешения испытательной
лаборатории.
Лицо, ответственное за составление данного протокола:
__________________ (ФИО, должность)
______________ (Подпись)
Зав.лабораторией:
__________________ (ФИО)
_____________ (Подпись)
(*Печать)
17

17. ПРОТОКОЛ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

18

18.

1Вход в лабораторию
2Гардероб для рабочего персонала
3Кабинет заведующего лабораторией
4Офис для работы с документами и литературой, окно для
выдачи результатов анализов
5Бытовая комната (кухня)
19

19.

5678910-
Бытовая комната (кухня)
Комната для хранения документов и реактивов
Коридор в лабораторию
Уборная комната
Душевая комната
Прачечная
20

20.

11-
Комната для проведения лабораторных исследований
21

21.

12Инкубационная
комната
13Предбоксник
14Бокс
15Стерилизационная
комната
Условные обозначения:
*-холодильник
WC-туалет
g*- центрифуга
- кондиционер
22

22.

23

23.

- огнетушитель
- пожарный кран
- телефон
- кнопка экстренного вызова
- электрощиток, электрошкаф
- эвакуационный выход
- указатель запасного выхода
- путь к основному эвакуационному выходу
- направление движения к запасному эвакуационному выходу
24

24.

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!
25