Реактивы, используемые в ПЦР-анализе

1. Реактивы, используемые в ПЦР-анализе

Реактивы, используемые в ПЦРанализе

2.

Обработку помещений проводят в соответствии с
требованиями СП 1.3.1285-03 и СП 1.3.2322-08.
Рекомендуемые дезсредства представлены в Методических
указаниях 2009 г. (МУ 1.3.2569-09) и включают:
- Мистраль (амины).
- 0,2%-ный раствором ДП-2Т для ежедневной влажной
уборки помещения в конце рабочего дня, ежемесячной
генеральной уборки и для деконтаминации (Жавель).
Не рекомендуется использовать хлорсодержащие средства
во время работы по выделению нуклеиновых кислот и
амплификации, так как это может привести к ингибированию
ПЦР.
Рабочие помещения должны подвергаться ежедневному
обеззараживанию ультрафиолетовым излучением в конце
рабочего дня. Необходимо использовать УФ-лампы
открытого типа.

3.

4.

Для проведения пробоподготовки- выделения ДНК из биоматериала необходимы:
Комплект реагентов для выделения ДНК (РНК)
из клинического материала;
высокоскоростная
Микроцентрифуга (10-12 тыс.об/мин);
твердотельный термостат
поддерживающий температуру до 99°С;
встряхиватель для микропробирок (типа микроцентрифуги-вортекс)
комплект полуавтоматических микропипеток дозаторов (5-40,40-200, 2001 ОООмкл);*
водоструйный или вакуумный насос с колбой-ловушкой*.
(*- при использовании комплекта реагентов "ДНК-ЭКСПРЕСС" данные позиции
не используются)

5. Зона для приготовления реагента

Назначение
•Здесь готовят основные реагенты для амплификации и праймеры (master
mix)
•Приготовленные основные реагенты и контроли затем вносятся в ПЦР
пробирки.
Оборудование
•Морозильная установка и ящики со льдом.
•Специализированные микропипетки с фильтрами (для защиты от
аэрозолей) − 25 μL, 50 μL, and 100 μL
•Халат
•Перчатки

6. Организация работы в зоне для приготовления реагента

Приготовление реагента должно проводится вдали от зоны, где
производится амплификация и центрифугирование, чтобы избежать
контаминации аэрозолями.
• Рабочая поверхность должны быть деконтоминирована перед
использованием.
•Используется деионизированная вода и специализированные пипетки с
фильтрами для защиты от аэрозолей. Наконечники для пипеток хранятся
в специальных боксах.
•Если готовится большой объем реагентов, то они должны быть
расфасованы по аликвотам.
•Лабораторный халат, используемый в этой зоне, не должен
использоваться в зоне, где проводится ПЦР.
•Работа ведется только в перчатках, которые должны меняться в каждой
из рабочих зон.