Комплексное лечение хронического пародонтита на основании изучения гипоксия-зависимых антимикробных иммунных реакций

1.

Комплексное лечение хронического
пародонтита на основании изучения
гипоксия-зависимых антимикробных
иммунных реакций
Аспирант: Хамукова Асият Ахмедовна
Научный руководитель: д.м.н., профессор М.А. Амхадова

2.

Актуальность исследования
При колонизации пародонтогенных микробов в десневом желобке
рО2 снижается с 8,4 кПа до 2,33 кПа, при гингивите и ХГП
формирование биопленки анаэробных бактерий приводит к резкому
ограничению кислородного снабжения тканей
Прогрессирование ХГП
Дентальный гель, содержаний NADH (Никотинамид-АденинДинуклеотид-Гидрид) – мощный биологический антиоксидант
Влияние NADH на гипоксия-зависимые факторы регуляции
иммунных реакций, воспаление и регенерацию тканей
неизвестно
?

3.

Цель работы
Повышение эффективности
диагностики, лечения и прогноза
развития хронического пародонтита на
основе современных методов
исследования гипоксия-зависимых
антимикробных иммунных комплексов

4.

Задачи исследования
1
Изучить диагностическую
информативность клиниколабораторных показателей у больных с
хроническим пародонтитом в
зависимости от степени тяжести

5.

Задачи исследования
2
Оценить диагностическую значимость
гипоксия-зависимого фактора (HIF-1 ),
кателицидина LL37 и
провоспалительного ИЛ-6 во
взаимосвязи с характеристиками
микробиоценоза содержимого
пародонтального кармана (ПК)

6.

Задачи исследования
3
Определить клиническую
эффективность дентального геля
Никотинамид-Аденин-ДинуклеотидГидрида в составе комплексного лечения
хронического генерализованного
пародонтита.

7.

Задачи исследования
4
Установить патогенетическую значимость
дентального геля Никотинамид-АденинДинуклеотид-Гидрида в составе комплексного
лечения хронического генерализованного
пародонтита для коррекции нарушений
гипоксия-зависимых иммунных реакций по
динамике HIF-1 , кателицидина LL37 и ИЛ-6 в
содержимом пародонтального кармана.

8.

Задачи исследования
5
Разработать метод лечения хронического
пародонтита легкой и средней степени тяжести
с учетом изучения содержания HIF-1 ,
кателицидина LL37 и ИЛ-6 в динамике и
коррекции энергообмена клеток.

9.

Научные положения, выносимые
на защиту
1. При развитии хронического
генерализованного пародонтита
гипоксия-зависимый механизм регуляции
иммунных реакций полости рта участвует
в патогенезе развития заболевания.

10.

Научные положения, выносимые
на защиту
2. Гипоксия-зависимый контроль
врожденного антимикробного иммунитета,
реализующийся сочетанным повышением в
десневой жидкости HIF-1 , антимикробного
пептида кателицидина LL37 и
провоспалительного медиатора ИЛ-6,
активируется при средней тяжести ХГП.

11.

Научные положения, выносимые
на защиту
3. Дополнительное назначение дентального
геля Никотинамид-Аденин-ДинуклеотидГидрида в составе комплексного лечения
ХГП сопровождается повышением
клинической эффективности терапии за
счет активации гипоксия-зависимых и
иммуннорегуляторных защитных
механизмов, ограничения воспаления и
деструкции тканей пародонта

12.

Научная новизна исследования
Впервые изучено влияние транскрипционного фактора HIF-1a
на секрецию антимикробного пептида кателицидина LL37 в
полости рта и активность провоспалительного цитокина ИЛ-6
в тканях пародонта.
Впервые установлено влияние гипоксия-зависимого фактора
на активность врожденного антимикробного иммунитета при
развитии воспалительных изменений пародонта.
Проведен анализ эффективности дополнительного воздействия на
энергетический обмен посредством применения дентального геля
Никотинамид-Аденин-Динуклеотид-Гидрида при лечении
хронического пародонтита.

13.

Научная новизна исследования
Впервые установлено, что использование дентального геля
Никотинамид-Аденин-Динуклеотид-Гидрида сопровождалось
коррекцией гипоксии в тканях, о чем свидетельствовало
снижение уровня гипоксия-зависимого фактора HIF-1α в
экссудате пародонтальных карманов.
Впервые доказано, что при снижении уровня HIF-1α в
динамике лечения НАДХ происходило сочетанное
ограничение синтеза ИЛ-6 и кателицидина LL37, что по
совокупности отражало эффективное ограничение
воспалительного повреждения тканей пародонта при
коррекции энергетического метаболизма в тканях пародонта.

14.

Теоретическая и практическая
значимость исследования
Дана объективная оценка состояния гипоксия-зависимого контроля
врожденного антимикробного иммунитета и секреции
провоспалительного медиатора ИЛ-6 при хроническом пародонтите
и разработаны критерии оптимизации лечения заболевания.
Установлены дифференциальные точки разделения концентрации
HIF-1α и кателицидина LL37 в содержимом пародонтальных
карманов для легкой и средней степени тяжести ХГП.

15.

Теоретическая и практическая
значимость исследования
Разработано патогенетическое обоснование для назначения
дентального геля Никотинамид-Аденин-Динуклеотид-Гидрида при
лечении хронического пародонтита.
Доказано повышение клинической эффективности лечения ХГП
легкой и средней степени тяжести при дополнительном назначении
дентального геля Никотинамид-Аденин-Динуклеотид-Гидрида к
стандартной терапии.

16.

Материал исследования
В клиническое исследование было включено 60 пациентов в возрасте от
30 до 45 лет с хроническим генерализованным пародонтитом (МКБ К05.3)
легкой и средней степени тяжести и 15 человек контрольной группы в
возрасте 18-25 лет без стоматологических заболеваний
57%
43%
Жен.пол
Муж.пол
Основание для включения пациентов в исследование:
- диагноз «хронический генерализованный пародонтит» (К05.3 по МКБ-10) легкой и
средней степени тяжести (глубина ПК менее 6 мм);
-состояние ремиссии.

17.

Методы исследования
Клинические: индекс гигиены по OHI-S, папиллярно-маргинальноальвеолярный индекс (РМА), пародонтологический индекс Рассела
Иммунологические: иммуноферментный метод определения
концентрации гипоксия-зависимого фактора 1- , ИЛ-6,
кателицидина-LL37 в содержимом ПК
ПЦР в режиме реального времени: качественно-количественное
определение содержания пародонтогенных бактерий
Статистический метод анализа результатов

18.

Получение биоматериала
Биоматериал – экссудат пародонтальных карманов.
Забор содержимого пародонтального кармана:
1. сбор экссудата бумажным штифтом №25 в течение 20
сек; 2. один штифт в пробирку с реактивом «ДНКэкспресс» - транспортная среда и выделение ДНК;
3. другой штифт в пробирку с фосфатно-солевым
буфером, инкубация 20 мин, центрифугирование,
получение супернатанта.
2. доставка в иммунологическую лабораторию для
проведения ПЦР в режиме реального времени и ИФА

19.

Группы пациентов
1 группа (n=30) – пациенты с ХГП (К05.3), которым дополнительно
в пародонтальные карманы вводили дентальный гель НикотинамидАденин-Динуклеотид-Гидрида (экспозиция по 20 мин 1 раз в день) в
течение 10 дней.
2 группа (n=30) – пациенты с ХГП легкой и средней степени
тяжести (К05.3 по МКБ-10) и стандартным лечением ХГП.
Группа контроля (n=15) – пациенты в возрасте от 18 до 25 лет с
удовлетворительным уровнем гигиены рта, отсутствием
заболеваний пародонта в активной фазе.

20.

Лабораторные методы исследования
Иммунологические: иммуноферментный анализ - концентрация
гипоксия-зависимого фактора-1α, антимикробного пептида
кателицидина LL37, интерлейкина-6 с помощью специфических
тест-систем на иммуноферментном анализаторе Lisa ("Эрба
Лахема с.р.о.", Чехия).

21.

ПЦР в режиме реального времени для
качественно-количественного определения
пародонтопатогенных бактерий
Взятие биопробы.
Выделение ДНК из биопробы
Качественное и количественное определение
соотношения облигатно-анаэробных бактерий
Porphyromonas endodontalis, Porphyromonas gingivalis,
Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Treponema
denticola, Prevotella intermedia, Fusobacterium nucleatum,
Tannerella forsythensis с помощью панели «Дентоскрин»
(ООО НПФ «Литех», Россия) и амплификатора CFX 96
(БиоРад, США).
Критический уровень микроорганизмов в 1 мл
исследуемого материала - 105.

22.

Cтатистический анализ результатов
Корреляционный анализ, ROC-анализ,
логистический регрессионный анализ.
Продолжительность проспективного
наблюдения - 6 месяцев. Эпохи анализа
клинического исследования – 14 дней, 3 и 6
мес. после окончания лечения,
лабораторного исследования – 3 и 6
месяцев.

23.

Исходные клинические индексы
пациентов
Индекс
ИГ
РМА, %
Глубина ПК, мм
ПИ
1 группа
(n=30)
2,42 0,08
41,0 2,24
4,1 0,26
1,97 0,17
2 группа
(n=30)
2,49 0,10
44,3 2,22
4,06 0,25
2,07 0,19
ХГП ЛСТ
53%
47%
1 ГРУППА
ХГП ССТ
57%
43%
2 ГРУППА
р
>0,05
>0,05
>0,05
>0,05

24.

Изменение лабораторных показателей в
содержимом ПК в зависимости от степени
тяжести ХГП
ИЛ-6
HIF-1alfa
400
40
*о
Кателицидин LL37
34
*о
35
350
30
28
*
Кателицидин LL37, пг/мл
30
ИЛ6, пг/мл
HIF-1 alfa, пг/мкл
300
250
200
*о
32
25
20
15
150
10
26
24
22
20
*
18
16
14
12
10
100
8
5
50
Зд
ХГП ЛС
ХГП СрС
Медиана
25%-75%
Мин.-Макс.
0
Зд
ХГП ЛС
ХГП СрС
Медиана
25%-75%
Мин.-Макс.
6
4
Зд
ХГП ЛС
ХГП СрС
* - достоверные отличия от здоровых пациентов, о – по сравнению с ХГП легкой степени
тяжести при p<0,05
Медиана
25%-75%
Мин.-Макс.

25.

Результаты корреляционного анализа между
иммунорегуляторными, кислород-зависимыми факторами
в содержимом пародонтальных карманов и клиническими
индексами при ХГП
ИГ
РМА
R=0,76;
p<0,001
R=0,87;
p<0,001
Кателицидин R=0,77;
p<0,001
LL37
Биомаркеры
HIF-1
ИЛ-6
R=0,72;
p<0,001
R=0,78;
p<0,001
Глубина
ПК
R=0,76;
p<0,001
R=0,71;
p<0,001
ПИ
R=0,93;
p<0,001
R=0,59;
p<0,001
R=0,73;
p<0,001
R=0,84;
p<0,001
R=0,92;
p<0,001

26.

Результаты корреляционного анализа между
иммунорегуляторными, кислород-зависимыми факторами и
количеством пародонтопатогенных бактерий в содержимом
ПК при ХГП
HIF
1
0,8
0,728*
0,6
0,4
0,2
0
0,497*
LL37 0,913*
ИЛ-6
* - статистически значимая связь при p<0,05

27.

Динамика индекса гигиены и индекса PMA в
1 и 2 группах
ИГ
1 группа
2 группа
3,0
3,0
2,5
2,5
*
*
2,0
2,0
*
*
ИГ, баллы
1,5
ИГ, баллы
1,5
*
1,0
1,0
1гр исх
1гр 14дн
1гр 3мес
1гр 6мес
0,5
2гр исх
2гр 14 дн
2гр 3мес
РМА
2гр 6мес
1 группа
2 группа
50
50
45
45
40
40
35
35
30
*
*
РМА, %
* - достоверные отличия по
сравнению с исходной
величиной показателя при
p<0,05
РМА, %
0,5
*
*
30
*
*
25
25
*
20
20
15
15
10
1гр исх
1гр 14дн
1гр 3мес
1гр 6мес
10
2гр исх
2гр 14 дн
2гр 3мес
2гр 6мес

28.

Динамика глубины ПК и пародонтологического
индекса в 1 и 2 группах
Глубина ПК
2 группа
5,0
4,5
4,5
4,0
4,0
3,0
2,5
*
*
3,5
*
2,5
2,0
2,0
1,5
1,5
1,0
1,0
1гр исх
1гр 14дн
1гр 3мес
1гр 6мес
*
3,0
ПИ Рассела
2гр исх
2гр 14 дн
2гр 3мес
2гр 6мес
1 группа
2 группа
2,6
2,8
2,4
2,6
2,2
2,4
2,0
*
1,8
*
1,6
*
ПИ Рассела, баллы
*
*
ПИ Рассела, баллы
3,5
Глубина ПК, мм
Глубина ПК, мм
1 группа
5,0
2,2
2,0
1,4
1,6
1,2
1,4
1,0
1,2
1гр исх
1гр 14дн
1гр 3мес
1гр 6мес
*
1,8
2гр исх
2гр 14 дн
2гр 3мес
2гр 6мес

29.

Клинический пример
Пациент Т., 1990 года рождения
Диагноз: хронический генерализованный
пародонтит средней степени тяжести.
До и после комплексного лечения с
применением дентального геля НикотинамидАденин-Динуклеотид-Гидрида

30.

Динамика лабораторных показателей в
1 и 2 группах
ИЛ-6
HIF-1A
*
*
*
*
150,0
100,0
50,0
0,0
1 группа
2 группа
Исх.
189,3
203,6
3 мес.
124,3
146,7
6 мес.
115,1
173,0
35,0
30,0
25,0
20,0
15,0
10,0
5,0
0,0
*
Исх.
28,8
29,4
1 группа
2 группа
*
3 мес.
6,7
7,8
*
*
6 мес.
4,2
11,1
Кателицидин LL37
25,0
20,0
пг/мл
ПГ/МКГ
200,0
ПГ/МЛ
250,0
*
15,0
*
10,0
5,0
0,0
1 группа
2 группа
Исх.
20,2
21,1
*
*
3 мес.
10,9
11,4
6 мес.
9,6
13,8
* - достоверные отличия по сравнению
с исходными величинами

31.

Прогноз высокого риска прогрессирования
ХГП от легкой к средней степени тяжести
LL 37
100
100
80
80
Sensitivity
Sensitivity
HIF-1a
60
40
60
40
20
20
0
0
0
20
40
60
80
100
100-Specificity
Если уровень HIF-1альфа в содержимом
ПК до лечения выше 103 пг/мкл → высокий
риск повышение тяжести ХГП с легкой до
средней.
ДЧ=87,1%, ДС=79,3%, ОШ=4,2
0
20
40
60
80
100
100-Specificity
Если уровень кателицидина LL37 в
содержимом ПК до лечения выше 17,2
пг/мл → высокий риск повышение тяжести
ХГП с легкой до средней.
ДЧ=88%, ДС=65,7%, ОШ=2,6

32.

Выводы
1
У пациентов с ХГП при средней тяжести заболевания в отличие от легкой
степени поражения пародонта наиболее выраженное повышение
(p<0,05) концентрации в экссудате пародонтальных карманов отмечается
для гипоксия-зависимого фактора HIF-1a (в 3,15 раз) и кателицидина
LL37 (в 2,9 раз). При легкой степени тяжести ХГП концентрация HIF-1a в
десневой жидкости не отличается от контрольного уровня у здоровых
лиц. Концентрация ИЛ-6 в содержимом пародонтального кармана
значительно превышает контрольное значение как при легкой (в 11,4
раз), так и при средней (в 13,6 раз) степени тяжести заболевания.
Диагностическая информативность определения клинико-лабораторных
показателей в содержимом ПК для мониторинга степени патологии
пародонта выше для HIF-1a и кателицидина LL37.

33.

Выводы
2
Наиболее выраженная тесная корреляционная
зависимость с содержанием пародонтопатогенных
бактерий в пародонтальных карманах у пациентов с
ХГП установлена для концентрации кателицидина
LL37 (R=0,913; p<0,001) и HIF-1 (R=0,728; p=0,004),
для концентрации ИЛ-6 связь была значимой, но
умеренной (R=0,497; p=0,02).

34.

Выводы
3
Использование НАДГ в комплексном лечении
пациентов с ХГП по сравнению со стандартной
терапией сопровождается улучшением
гигиенического состояния полости рта в течение 3
мес. от начала терапии, более эффективным
купированием воспалительных изменений десны со
снижением индекса РМА, ограничением деструкции
мягких и твердых тканей пародонта с сокращением
глубины ПК и снижением пародонтального индекса,
начиная через 14 дней наблюдения.

35.

Выводы
4
Дополнительное терапевтическое воздействие антиоксиданта НАДГ
приводит к более выраженному снижению синтеза и накопления HIF-1α и
ИЛ-6 в воспалительном экссудате у пациентов со средней тяжестью
заболевания через 3 мес. и у больных с легкой и средней степенью
тяжести поражения пародонта через 6 мес. наблюдения. После лечения
у пациентов 1 и 2 групп различия концентрации кателицидина LL37 в
содержимом пародонтальных карманов формируются только через 6
мес. наблюдения. Дополнительное терапевтическое воздействие
антиоксиданта НАДГ сопровождается наиболее эффективным и
последовательным снижением в содержимом пародонтальных карманов
гипоксия-зависимого фактора HIF-1α.

36.

Выводы
5
У пациентов с ХГП при повышении уровня HIF-1 в
содержимом пародонтальных карманов выше 103
пг/мкл, риск развития остеодеструкции возрастает в
4,2 раза (p<0,05), при повышении концентрации
кателицидина LL37 более 17,2 пг/мл – в 2,6 раза
(p<0,05), что требует дополнительного курсового
использования дентального геля НАДГ в комплексе
стандартных мер лечения для повышения
клинической эффективности терапии.

37.

Практические рекомендации
1
У пациентов с ХГП при консервативной
терапии дополнительно к стандартным мерам
для повышения клинической эффективности
лечения рекомендуется введение в
пародонтальные карманы дентального геля
Никотинамид-Аденин-Динуклеотид-Гидрида
(экспозиция по 20 мин 1 раз в день в течение
10 дней).

38.

Практические рекомендации
2
У пациентов с ХГП при легкой степени
поражения пародонта рекомендовано в
содержимом пародонтальных карманов
определять концентрацию гипоксиязависимого фактора HIF-1a.

39.

Практические рекомендации
3
Повышение концентрации HIF-1 в
содержимом пародонтальных карманов у
пациентов с ХГП более 103 пг/мкл
ассоциировано с развитием средней степени
поражения пародонта с диагностической
чувствительностью 87,1% и специфичностью
79,3%.

40.

Благодарю за внимание!