Подбор праймеров

1. Подбор праймеров

2. Основные принципы

• Длина 18-30 нуклеотидов
• Температура отжига 45-65°С, максимально допустимая разница
между температурами отжига праймеров 5°С
• Должно быть одно место отжига
• Праймеры могут быть не полностью комплиментарны матрице,
но изменения допустимы только на 5’-конце, 3 ’-конец
обязательно должен быть полностью комплиментарным
• Желательно, чтобы праймеры заканчивались на 3 ’-конце на А/Т
• Недопустима самокомплементарность(димеры и вторичные
структуры) праймеров, особенно на 3 ’-конце (минимум 4
нуклеотида)
• Стандартная концентрация праймеров в реакционной смеси 0,20,5 мкМ