Микробиологическая диагностика сибирской язвы

1.

* Лекция№26
Микробиологическая
диагностика сибирской язвы

2.

* Возбудитель Bacillus anthracis входит в семейство
* Bacillaeсеае, рода Bacillus.
* Материалом для микробиологической диагностики
является содержание карбункула при кожной форме
сибирской язвы, кал при кишечной форме, мокроты при
легочной форме, кровь при септической форме.

3.

* Можно исследовать также различные объекты внешней
среды (вода, почва), сырье животного происхождения,
продукты питания.

4.

* Микробиологическую диагностику сибирской язвы
проводят:
* микроскопическим,
* бактериологическим,
* биологическим,
* аллергологическим методами.

5.

* Кроме того, при исследовании трупного материала, кожи,
волос, ставят реакцию термопреципитации Асколи для
выявления антигена микробов.

6.

* Микроскопический метод.
* Из материала, который исследуют, готовят мазки,
фиксируют над пламенем и окрашивают по Граму и
Романовскому.

7.

* Обнаружение в мазках крупных грамположительных
окруженных капсулами (иногда одна капсула на 2-3
микробные клетки) палочек с обрубленимы концами,
расположенных парами и цепочками, дает основание для
постановки ориентировочного диагноза.

8.

9.

10.

11.

* С целью ускоренной индикации
возбудителя используют РИФ при которой из
взятых проб готовят мазки, фиксируют их и
обрабатывают люминесцирующей
сывороткой.

12.

* Через 15-20 минут препарат промывают
водой, высушивают и микроскопируют в
люминесцентном микроскопе. При
обнаружении специфического свечения
микробов ставят предварительный диагноз
сибирской язвы.

13.

14.

* Бактериологический метод. Является основным.
Материал для исследования засевают на чашки Петри с
мясопептонным агаром.

15.

* Если исследуют кровь, то ее предварительно засевают в
мясопептонный бульон и выдерживают в термостате в
течение 18-24 часов при температуре 37 ° С.

16.

* В бульоне возбудитель сибирской язвы растет, образуя
осадок в виде кусочков ваты, бульон при этом остается
прозрачным.
* На МПА образует R-формы колоний: матовые большие
шероховатые колонии с неровным краем, которые под
микроскопом выглядят как локоны или львиная грива.

17.

* С одной части такой подозрительной колонии готовят
мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют.

18.

* Вторую часть пересевают на скошенный агар для
получения большого количества чистой культуры
микробов.

19.

* Через сутки инкубации в термостате, микробы, выросшие
на скошенном агаре проверяют на чистоту и продолжают
идентифицировать путем изучения биохимических свойств
(расщепляют глюкозу, лактозу, мальтозу до кислоты без
газа, разжижают желатин),

20.

* свойства лизировать эритроциты, чувствительности к
бактериофага сибирской язвы, постановки пробы с
пенициллином (на агаре с пенициллином через 3:00 роста
бациллы распадаются на отдельные шарики, которые при
микроскопии определяются как феномен («жемчужного
ожерелья»).

21.

* Во время проведения бактериологического метода
обязательная проверка выделенной чистой культуры
микробов на патогенность для лабораторных животных,
потому что в природе есть лжепалочки сибирской язвы,
антракоидов, очень похожи по многим признакам на
Bacillus anthracis, но не патогенны для животных и
человека.

22.

23.

24.

25.

26.

* Биологический метод.
* Готовят эмульсию материала, который исследуют, в
стерильном физиологическом растворе и вводят подкожно
белым мышам, морским свинкам или кроликам.

27.

* В случае наличия в материале B. аnthracis, мыши и
морские свинки погибают через 24-36 часов, кролики —
через 48-72 часа.

28.

* При вскрытии павших животных, проявляют увеличены,
вследствие застоя крови, органы. Особенно резко
изменена селезенка. В мазках из органов и крови
обнаруживают палочки сибирской язвы с хорошо
выраженной капсулой.

29.

* Биологический метод позволяет ускорить диагностику.
Его используют также в тех случаях, когда материал для
исследования сильно загрязнен посторонней
микрофлорой, особенно гнилостных.

30.

* Аллергический метод.
* Для диагностики свежих случаев сибирской язвы
применяется специфический препарат — антраксином,
которому ставят внутрикожную аллергическую пробу на
ладонной поверхности предплечья.

31.

* В случае положительной реакции через 24 часа в месте
введения антраксином появляется гиперемия и
инфильтрат размером более 15 мм.

32.

* Проба может быть положительной уже на первой неделе
заболевания и долго держится после перенесения
заболевания, поэтому она может использоваться для
ретроспективной диагностики.

33.

34.

* Серологическая реакция
термопреципитации Асколи.
* Используют для выявления термостабильного антигена
возбудителя в различных объектах животного
происхождения (шерсть, кожа и др.).
* Антиген извлекают кипячением исследуемого субстрата в
физиологическом растворе с последующим
фильтрованием.

35.

* В пробирки малого диаметра вносят 0,5 мл
преципитирующих сибиреязвенных сыворотки, а затем
осторожно по стенке пробирки пастеровской пипеткой
наслаивают на нее 0,5 мл полученного экстракта
исследованого материала

36.

* Если в полученном экстракте является антиген сибирской
язвы, то на границе двух жидкостей через 2-5 минут
образуется кольцо преципитата беловатого цвета.
* Реакция Асколи отличается высокой чувствительностью.

37.

*КОЖНАЯ ФОРМА

38.

*Работа в боксах