Влияние нового фармакологического препарата на фертильность и качество пренатального развития эмбрионального плода крыс

1.

ВЛИЯНИЕ НОВОГО
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА НА
ФЕРТИЛЬНОСТЬ И КАЧЕСТВО
ПРЕНАТАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ
ЭМБРИОНАЛЬНОГО ПЛОДА КРЫС
Донаева Анжела Авазбековна

2.

Цель исследования: оценка влияния нового фармакологического препарата «К@,
концентрат для приготовления раствора для приема внутрь» на фертильность и качество
пренатального развития эмбрионального плода крыс.
Задачи исследования:
Изучить эмбрио- и фетотоксическое действие исследуемого препарата для приготовления раствора
для приема внутрь, регистрируемое в антенатальный период развития.
Изучить эмбрио- и фетотоксическое действие исследуемого препарата, регистрируемое в
постнатальный период развития потомства
Исследуемый препарат- концентрат для приготовления раствора для приема внутрь в
качестве противовоспалительного средства. Представляет собой прозрачный раствор без цвета и
запаха, хорошо растворимый в воде, расфасованный во флаконах из темного стекла 250 мл.
Объект исследования - виргинные половозрелые белые крысы, доставленные одной
партией из специализированного питомника Государственного унитарного предприятия научноисследовательского института гигиены труда и профпатологии МЗ РФ г. Волгограда (НИИ ГТиП, г.
Волгоград) и прошедших 2-х недельный карантин в виварии НИИ фармакологии ВолгГМУ.
Научная новизна - впервые изучено влияние исследуемого препарата «К@, концентрат
для приготовления раствора для приема внутрь» на процессы эмбрио- органо- и фетотогенеза,
регистрируемого в антенатальный и постнатальный периоды развития потомства. На основании
проведенных исследований сделано заключение об отсутствии у препарата «К@, концентрат для
приготовления раствора для приема внутрь» при пероральном введении беременным крысам в
дозах 0,2 мг/кг и 20 мг/кг эмбрио- и фетотоксического действия, регистрируемого в антенатальный
и постнатальный периоды развития потомства.

3.

Экспериментальные группы
1-й этап исследований:
Изучение эмбрио- и фетотоксического действия, регистрируемого в антенатальном периоде
развития:
Группа 1 (контроль 1), 10 беременных самок, получавших внутрижелудочно дистиллированную воду
в объеме 2 мл/кг с 1 по 19 дни беременности;
Группа 2 (контроль 2), 10 беременных самок, получавших внутрижелудочно дистиллированную
воду в объеме 20 мл/кг с 1 по 19 дни беременности;
Группа 3 (1-я опытная группа), 10 беременных самок, получавших внутрижелудочно препарат в
дозе 0,2 мг/кг (экспериментально показанная терапевтически эффективная доза, в пересчете на
серебро) с 1 по 19 дни беременности;
Группа 4 (2-я опытная группа), 10 беременных самок, получавших с 1 по 19 дни беременности
внутрижелудочно препарат в дозе 20 мг/кг (доза, превышающая терапевтически эффективную в 100
раз в пересчете на серебро ).
При проведении первого этапа экспериментов, исследуемый препарат вводили самкам
внутрижелудочно с 1-го по 19-й дни беременности. В наблюдениях, у беременных самок
исследовали общее состояние, динамику массы тела. Измерение массы тела у беременных самок
проводили на электронных весах МК-6.2-А20 на первый, шестой, двенадцатый, шестнадцатый и
двадцатый дни беременности. Вес тела выражали в г., а прирост относительно первого дня - в %. На
двадцатый день беременности проводили эвтаназию самок, используя метод дислокации шейных
позвонков. У самок вскрывали брюшную полость, выделяли рога матки и яичники. В яичниках
подсчитывали количество желтых тел беременности. В рогах матки определяли количество мест
имплантаций, живых, мертвых и резорбированных плодов. На основании полученных данных
вычисляли (в %) эмбриональную (пред- и постимплантационную) гибель плодов.

4.

2-й этап исследований;
Изучение эмбрио- и фетотоксического действия, регистрируемого в постнатальном периоде развития:
Группа 1 (контрольная группа 3). Фиксированные пометы крысят (по 6 особей), рожденные от 10 беременных крыс самок,
которым с 6 по 20 дни беременности вводили внутрижелудочно дистиллированную воду в дозе 20 мл/кг;
Группа 2 (опытная группа 3). Фиксированные пометы крысят (по 6 особей), рожденные от 10 беременных крыс самок,
которым с 6 по 20 дни беременности вводили внутрижелудочно исследуемый препарат в дозе 20 мг/кг (в пересчете на
серебро).
На 2-ом этапе исследований оценивали состояние пометов крысят (n=20), матерям которых исследуемый препарат
вводили внутрижелудочно с 6-го дня беременности и до родов в дозе 20 мг/кг и самок матерей. В период наблюдений- у
беременных самок отмечали прибавку массы тела, общее состояние. Во время родов - регистрировали состояние помета,
количество живых или мертвых крысят. Наблюдения за этими самками вели до окончания периода лактации. В
наблюдениях за потомствами крысят исследовали скорость физического развития и формирование сенсорнодвигательных рефлексов. Изучали двигательное поведение крысят и способность к процессам обучения и памяти.
В физическом развитии у крысят следили за динамикой прироста массы тела, которую начинали измерять с 4го дня жизни, еженедельно до 2-х месячного возраста. Взвешивание животных проводили на электронных весах (МК-6.2А20), вес тела выражали в г., а общий прирост в %. Другие параметры физического развития как: отлипание ушной
раковины, появление волосяного покрова, прорезывание резцов, открытие глаз, поднятие головы, опускание семенников,
открытие влагалища оценивали визуально в днях. При этом также (в днях) отмечали формирование сенсорнодвигательных рефлексов («переворачивание на плоскости», «отрицательный геотаксис», «мышечную силу»). Изучение
двигательного поведения проводили в тесте "открытое поле", у крысят в 20-и дневном и 1,5 месячном возрасте.
Экспериментальная установка "открытое поле", представляет собой круглую арену, огороженную барьером, пол которой
расчерчен на равные сектора для визуальной регистрации горизонтальной двигательной активности (ГДА - число
пересеченных квадратов), вертикальной двигательной активности (ВДА - вставаний на задние лапки), исследовательской
активности (ИА - заглядываний в напольные отверстия), - актов груминга (Гр) и эмоциональной активности (ЭА - количество
актов дефекаций). Во время эксперимента тестируемую особь помещают в центральный квадрат. Наблюдения проводятся
в течение 3-х минут.
При оценке способности потомства 60-ти дневных крысят к обучению и памяти использовали тест "УРПИ".
Экспериментальная установка "УРПИ" состояла из двух соединенных смежных отсеков, большого освещенного (60x40) и
малого затемненного (15x15), снабженного электродным полом. Тестируемого крысенка помещали в светлый отсек,
хвостом к темному отсеку. Во время эксперимента регистрируют: - латентный период (время первого захода в темную
(опасную) камеру) и количество заходов в данную камеру (отсек). В темном отсеке крысенок подвергался (через
электродный пол) трехкратному электроболевому воздействию (напряжение воздействия соответствовало порогу
вокализации равному 35 V), с интервалом между импульсами 0,5 сек. Животное считалось обученным, если в течение 30
сек., после сеанса обучения оно больше не заходило в темный отсек камеры. Тест на воспроизведение памятного следа
проводился в последующем через трое суток, после обучения (спонтанная амнезия). При этом тестируемого крысенка
вновь помещали в светлый отсек камеры, а в последующем в течение 3-х мин, у него регистрировали латентный период
захода в темную камеру и количество заходов в нее.

5.

Таблица 1 - Влияние Исследуемого препарата «Концентрат для приготовления раствора
для приема внутрь» (внутрижелудочно, 1-19 дни беременности), на прирост массы тела
беременных крыс (г., М±m)
Периоды
измерений (дни)
Варианты опытов (дозы веществ)
Контрольная
группа - 1
Дистиллированна
я вода
(2 мл/кг)
Контрольная
группа - 2
Дистиллированна
я вода
(20 мл/кг)
Опытная
группа -1
Исследуемый
препарат
(0,2 мг/кг)
Опытная
группа -2
Исследуемы
й препарат
(20 мг/кг)
Исход
213,0±5,84
212,1±4,40
214,0±7,38
216,3±5,84
6
233,0±6,03
224,8±4,88
235,6±4,78
227,8±6,96
267,2±8,78
240,6±6,69
261,8±5,95
254,4±6,20
285,5±10,10
251,0±7,74
275,1±9,58
268,3±7,10
16
20

6.

Таблица 2 - Влияние Исследуемого препарата «концентрат для приготовления раствора
для приема внутрь» (внутрижелудочно, 1-19 дни беременности) на процессы
эмбрионального развития плодов (М±m)
Исследуемые
Варианты опытов (дозы веществ)
Контрольная
Опытная
Опытная
параметры (на 1 Контрольная
самку)
группа- 1
группа- 2
группа -1
группа -2
Дистиллированна Дистиллированна Исследуемый Исследуемый
я вода
я вода
препарат
препарат (20
(2 мл/кг)
(20 мл/кг)
(0,2 мг/кг)
мг/кг)
Желтые
тела 10,5±0,65
11,2±0,65
10,9±0,60
11,7±0,26
(количество)
Места имплантаций 9,4±0,65
9,5±0,62
9,0±0,91
9,0±0,37
(количество)
Резорбции
0,1±0,10
0,0±0,00
0,2±0,13
0,3±0,15
(количество)
Доимплантационна 10,3±3,67
14,6±3,72
18,1±7,43
22,7±3,55
я гибель (в%)
Послеимплантацион 1,1±1,48
0,0±0,00
2,1±1,41
3,5±1,77
ная гибель (в%)
Количество плодов 9,3±0,67
9,5±0,62
8,8±0,90
8,7±0,42
Кранио-каудальный 3,0±0,08
3,0±0,07
3,0±0,11
3,0±0,07
размер (см.)
Масса тела (г)
2,5±0,09
2,2±0,06
2,3±0,07
2,2±0,09

7.

Таблица 3 - Влияние Исследуемого препарата «Концентрат для приготовления раствора для
приема внутрь» (внутрижелудочно, 1-19 дни беременности) на процессы оссификации плодов
Варианты опытов (дозы веществ)
(М±m))
Точки оссификаций
(на 1 самку)
Контрольная группа- 1
Дистиллированная вода
(2 мл/кг)
Грудина
3,9±0,08
Ребра
12,2±0,08
Позвонки
22,1±0,22
Верхняя конечность правая
Лопатка
1,0±0,00
Ключица
1,0±0,00
Конечность
3,0±0,00
Пястна
3,2±0,05
Верхняя конечность левая
Лопатка
1,0±0,00
Ключица
1,0±0,00
Конечность
3,0±0,00
Пястна
3,2±0,05
Нижняя конечность правая
Тазовые
3,0±0,00
Конечность
3,0±0,00
Плюсна
3,2±0,05
Нижняя конечность левая
Тазовые
3,0±0,00
Конечность
3,0±0,00
Плюсна
3,2±0,05
Контрольная группа- 2
Дистиллированная вода
(20 мл/кг)
Опытная
группа -1
Исследуемый препарат
(0,2 мг/кг)
Опытная
группа -2
Исследуемый
препарат (20 мг/кг)
3,9±0,04
12,4±0,15
22,6±0,10
3,7±0,07
11,3±0,10***
20,5±0,16***
3,5±0,07###
10,5±0,18###
20,3±0,28###
1,0±0,00
1,0±0,00
3,0±0,00
3,1±0,03
1,0±0,00
1,0±0,00
3,0±0,00
3,0±0,00**
1,0±0,00
1,0±0,00
3,0±0,00
2,9±0,05##
1,0±0,00
1,0±0,00
3,0±0,00
3,1±0,03
1,0±0,00
1,0±0,00
3,0±0,00
3,0±0,00**
1,0±0,00
1,0±0,00
3,0±0,00
2,9±0,05##
3,0±0,00
3,0±0,00
3,1±0,03
3,0±0,00
3,0±0,00
3,0±0,00**
3,0±0,00
3,0±0,00
2,9±0,05##
3,0±0,00
3,0±0,00
3,1±0,03
3,0±0,00
3,0±0,00
3,0±0,00**
3,0±0,00
3,0±0,00
2,9±0,05##
Примечание:
** - P < 0,01, *** - P < 0,001 - различия достоверны относительно контрольной группы 1 (интактный);
## - P< 0,01 - различия достоверны относительно контрольной группы 2 (дистиллированной воды);

8.

Таблица 4 - Влияние Исследуемого препарата «концентрат для приготовления раствора для приема
внутрь» (внутрижелудочно, 1-19 дни беременности) на количество кровоизлияний во внутренние
органы плодов (М±m)
Варианты опытов (дозы веществ)
Исследуемые
Контрольная группа- 1
параметры (на1самку) Дистиллированная
вода
(2 мл/кг)
Контрольная группа- 2
Дистиллированная
вода
(20 мл/кг)
Опытная
группа -1
Исследуемый
препарат
(0,2 мг/кг)
Опытная
группа -2
л
Исследуемый
препарат (20
мг/кг)
Головной мозг
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
Лицевой отдел
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
Шейный отдел
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
Грудной отдел
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
Брюшной отдел
0,0±0,00
0,00±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
Тазовый отдел
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
Подкожные
кровоизлияния
0,0±0,00
0,0±0,00
0,0±0,00
0,1±0,05#
Примечание:
# - P< 0,05 - различия достоверны относительно контрольной группы 2
(дистиллированной воды)

9.

Таблица 5 - Влияние Исследуемого препарата « концентрат для приготовления
раствора для приема внутрь» (внутрижелудочно, с 6 дня беременности по день
родов) на динамику массы тела крыс-самок (г.,М±m)
Периоды измерений (дни)
Варианты опытов (дозы веществ)
Контрольная
группа
Дистиллированная вода
(20 мл/кг)
-
3 Опытная группа -3
Исследуемый
препарат
(20 мг/кг)
Масса тела в период беременности
Исход
227,8±7,12
216,5±7,25
20 день
305,9±11,96
290,3±8,69
1-й день после родов
245,0±9,40
235,2±8,88
7 день
253,9±13,26
240,3±8,13
14 день
256,0±12,85
242,7±6,42
21 день
243,5±13,09
239,8±6,08
Масса тела в период лактации

10.

Таблица 6 - Влияние Исследуемого препарата «Концентрат для приготовления раствора для
приема внутрь» на массу тела (г., М±m) крысят в постнатальный период развития (крысам матерям
препарат вводили внутрижелудочно, с 6 дня беременности по день родов)
Периоды измерений (дни)
Самцы
4
7
14
21
30
60
Самки
4
7
14
21
30
60
Варианты опытов (дозы веществ)
Контрольная
группаДистиллированная вода
(20 мл/кг)
3 Опытная группа -3
Исследуемый
препарат
(20 мг/кг))
9,5±0,59
11,6±0,58
17,5±0,92
24,6±1,51
38,4±1,93
77,0±3,71
8,1±0,35
10,2±0,40
15,9±0,55
22,4±0,87
37,4±1,59
87,5±2,35*
8,9±0,57
10,7±0,62
16,6±0,95
22,8±1,54
34,8±2,04
68,8±4,26
7,4±0,35*
9,2±0,40*
14,5±0,59
20,8±0,87
33,3±1,41
70,8±2,05
Примечание:
* - P<0,05 - различия достоверны относительно контрольной группы 3 (дистиллированной воды);

11.

Таблица 7- Влияние Исследуемого препарата «Концентрат для приготовления раствора для приема
внутрь» на физическое развитие (дни, М±m) крысят в постнатальный период развития (крысам
матерям препарат вводили внутрижелудочно, с 6 дня беременности по день родов))
Исследуемые параметры
Варианты опытов (дозы веществ)
Контрольная группа Дистиллированная вода
(20 мл/кг)
3 Опытная группа -3
Исследуемый препарат
(20 мг/кг)
Отлипание ушной раковины
3,3±0,06
4,4±0,09***
Появление волосяного покрова
5,2±0,08
5,2±0,08
Прорезывание резцов
11,8±0,08
12,5±0,13***
Открытие глаз
18,0±0,22
18,9±0,18**
Опускание семенников
25,9±0,06
26,6±0,12***
Открытие вагины
59,3±0,53
62,4±0,17***
Примечание:
** - P<0,01; *** - P<0,001 - различия достоверны относительно контрольной группы 3 (дистиллированной воды)

12.

Таблица 8 - Влияние препарата «Концентрат для приготовления раствора для приема внутрь» на
скорость созревания сенсорно-двигательных рефлексов (дни, М±m) крысят в постнатальный
период развития (матерям препарат вводили внутрижелудочно, с 6 дня беременности по день
родов))
Исследуемые параметры
Варианты опытов (дозы веществ)
Контрольная группа Дистиллированная вода
(20 мл/кг)
3 Опытная группа -3
Исследуемый препарат
(20 мг/кг)
Переворачивание на плоскости
6,8±0,25
5,3±0,11***
Отрицательный геотаксис
7,1±0,17
7,4±0,11
Избегание обрыва
7,8±0,16
8,2±0,16
Зрачковый рефлекс
18,9±0,18
19,3±0,23
18,9±0,18
19,3±0,23
18,9±0,27
18,8±0,11
Избегание
обрыва
визуальным стимулом)
Мышечная сила
Переворачивание
падении
в
(вызванное
свободном 19,9±0,16
18,6±0,14***
Примечание:
*** - P<0,001 - различия достоверны относительно контрольной группы 3 (дистиллированной воды)

13.

Таблица 9 - Влияние препарата «Концентрат для приготовления раствора для приема внутрь» на
двигательную активность 20-ти дневных крысят в тесте «открытое поле» (крысам матерям
препарат вводили внутрижелудочно, с 6 дня беременности по день родов) (М±m))
Исследуемые параметры
Варианты опытов (дозы веществ)
Контрольная
группаДистиллированная вода
(20 мл/кг)
3 Опытная группа -3
Исследуемый препарат
(20 мг/кг)
Горизонтальная активность
14,7±0,75
14,4±0,80
Вертикальная активность
5,1±0,44
3,7±0,31**
Исследовательская активность
2,7±0,28
2,4±0,27
Акты груминга
2,1±0,17
1,6±0,14*
Акты дефекаций
1,3±0,16
1,1±0,13
Примечание:
* - P<0,05; ** - P<0,01- различия достоверны относительно контрольной группы 3 (дистиллированной воды)

14.

Таблица 10 - Влияние исследуемого препарата «Концентрат для приготовления раствора для
приема внутрь» на эмоционально-двигательное поведение 45-ти дневных крысят в тесте
«открытое поле» (матерям которых препарат вводили внутрижелудочно, с 6 дня беременности по
день родов) (М±m))
Исследуемые параметры
Самцы
Горизонтальная активность
Вертикальная активность
Исследовательская активность
Акты груминга
Акты дефекаций
Самки
Горизонтальная активность
Вертикальная активность
Исследовательская активность
Акты груминга
Акты дефекаций
Варианты опытов (дозы веществ)
Контрольная
группа3 Опытная группа -3
Дистиллированная вода
Исследуемый препарат
(20 мл/кг)
(20 мг/кг)
41,9±0,88
9,9±0,80
9,0±0,87
1,7±0,50
1,4±0,55
52,6±0,72***
12,5±0,75*
9,2±0,88
0,8±0,46
1,9±0,40
45,9±0,96
9,4±0,86
8,7±0,70
1,9±0,55
1,7±0,41
55,1±0,98***
11,1±0,84
9,9±0,89
0,7±0,23*
1,9±0,67
Примечание:
* - P<0,05; *** - P<0,001 - различия достоверны относительно контрольной группы 3 (дистиллированной воды)

15.

ВЫВОДЫ
Проведено изучение эмбрио- и фетотоксического действия исследуемого препарата. Исследуемый препарат на первом
этапе экспериментов вводился внутрижелудочно беременным крысам с 1-го по 19 дни беременности в дозах 0,2 и 20 мг/кг. На втором
этапе препарат вводили внутрижелудочно беременным крысам с 6-го дня беременности и до родов в дозе 20 мг/кг.
По результатам первого этапа исследований установлено отсутствие эмбрио- и фетотоксического действия у данного
препарата. Показано, что у беременных крыс самок, получавших препарат, в период беременности, не повреждались процессы эмбриооргано- и фетогенеза. При этом у эмбрионов, выделенных от самок, получавших препарат, отмечено достоверное снижение процессов
оссификации скелета и отсутствие кровоизлияний во внутренние органы.
В исследованиях второго этапа, у крысят, рожденных от матерей, получавших исследуемый препарат, не отмечено грубых
нарушений в скорости физического развития и скорости формирования сенсорно-двигательных рефлексов, что свидетельствует об
отсутствии у этого препарата (интрагастрально, в дозе 20 мг/кг с 6-го по 20 дни беременности) повреждающего влияния на процессы
антенатального развития плодов, регистрируемых в постнатальный период развития.
На основании проведенных исследований сделано заключение об отсутствии у исследуемого препарата, вводимого
интрагастрально беременным самкам в дозах 0,2 и 20 мг/кг, патологического влияния на процессы эмбрио- органо- и фетотогенеза,
регистрируемого в антенатальный и постнатальный периоды развития потомства.
Показано, что препарат не обладает тератогенным, эмбриотоксическим и фетотоксическим действием, не влияет на
качество эмбрионального развития плодов. Выявляемые эффекты угнетения процессов оссификации, зафиксированные в антенатальном
созревании плодов и некоторое постнатальное отставание сроков формирования физического развития в 1-й месяц постнатальной
жизни, не сказались в целом на качестве постнатального созревания потомства. К 2-х месячному возрасту физическое развитие
потомства было полностью завершено. Поведенческая активность, способность к обучению и запоминанию у данных крысят не
различались с данными контроля.

16.

Доклад окончен. Благодарю за внимание!