Роль молекулярно - генетических методов исследования в диагностике туберкулёза

1.

Министерство сельского хозяйства Россиской Федерации
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования «Московская государственная академия ветеринарной
мидицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина»
Даудова Эльмира Арсеновна
ВЫПУСКНАЯ
КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА
«Роль молекулярно-генетических методов исследования в
диагностике туберкулёза»
Направление подготовки 06.04.01 Биология
Квалификация- магистр

2.

Актуальность исследования
■ На
сегодняшний
день
наблюдается
тенденция
к
изучению
различных
методов диагностики туберкулеза и
выявления микобактерий, вызывающих
заболевания у людей. Это
■ По данным Всемирной организации
здравоохранения, миллионы людей попрежнему остаются инфицированными
микобактериями, и лишь небольшая
часть из них своевременно обращается в
медицинские учреждения для получения
помощи.
■ В условиях растущей глобальной угрозы,
связанной с антибиотикорезистентностью
МБТ, ранняя диагностика становится
критически важной для эффективного
контроля распространения инфекции.

3.

Цель исследования - оценка эффективности МГМ
диагностики ТБ и их сравнительный анализ с
традиционными культуральными методами.
Объект исследования: молекулярно-генетические методы
диагностики ТБ.
Предмет исследования: технологии МГМ, ПЦР в
реальном времени, гибридизационные технологии и
картриджные системы.
Теоретическая значимость исследования заключается в
расширении знаний о молекулярно-генетических методах
диагностики ТБ, их механизмах действия и возможностях
применения в клинической практике.

4.

Задачи ВКР:
общую
■Проанализировать
эпидемиологическую
ситуацию
по
туберкулезной этиологии.
■Изучить роль молекулярно-генетических
методов в диагностике ТБ.
■Определить преимущества и недостатки
использования МГМ по сравнению с
традиционными методами.
сравнительный
анализ
■Провести
эффективности
различных
методов
диагностики ТБ на основе данных
амбулаторных карт пациентов.

5.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ИССЛЕДОВАНИЯ
База исследования: Федеральное
государственное бюджетное учреждение
«Национальный медицинский
исследовательский центр
фтизиопульмонологии и инфекционных
заболеваний» Министерства
здравоохранения Российской Федерации
(ФГБУ «НМИЦ ФПИ»).
Материалы исследования представлены в
виде выборки из историй болезней 564
стационарных больных, у которых был
установлен диагноз туберкулез.
Все пациенты были госпитализированы для
лечения и диагностики данного заболевания

6.

КЛАССИФИКАЦИЯ БОЛЬНЫХ
Пациенты, у которых
диагностика ТБ проводилась
с помощью как
традиционных методов, так
и МГМ
Пациенты, получившие
лечение на основании
результатов исследований
МГМ, таких как ПЦР,
гибридизационные и
картриджные технологии.
Пациенты, у которых диагноз
был установлен с
использованием
бактериологического метода
диагностики, включая
микроскопию,
культуральные исследования
и клинические данные

7.

Возрастно-половая
характеристика групп

8.

Методы диагностики ТБ в
различных группах выборки
Группа пациентов
Бактериологический метод диагностики
Методы диагностики
- Микроскопия
- Культуральные исследования
Лечение на основании МГМ
- Клинические данные
- ПЦР (включая PCR Real Time)
- Гибридизационные технологии
Комплексный анализ
- Картриджные технологии (Xpert® MTB/RIF)
- Микроскопия
- Культуральные исследования
- Клинические данные
- ПЦР (включая PCR Real Time)
- Гибридизационные технологии
- Картриджные технологии (Xpert® MTB/RIF)

9.

Сопутствующие заболевания
пациентов выборки

10.

Клинические формы ТБ

11.

Инструменты, используемые для
диагностики ТБ в ФГБУ «НМИЦ
ФПИ»
Технология МГМ
Гибридизационные технологии
Инструмент
- Микробиологические чипы - ТБ-Биочип, ТББиочип-2;
Набор
реагентов
для
определения
лекарственной чувствительности к офлоксацину
«ТБ-БИОЧИП-2»;
ПЦР в режиме реального времени
Набор
реагентов
для
определения
лекарственной
чувствительности
к
рифампицину, изониазиду «ТБ-БИОЧИП-МДР».
- Набор реагентов РеалБест ДНК МВТС;
Картриджная технология
- Набор реагентов «АмплиСенс® МБТ-EPh».
Картридж Xpert MTB/RIF

12.

Группы пациентов, отобранные
для исследования
№ п/п
Количество
человек
Тип методов диагностики
Конкретные технологии
1
96
Вторая группа - 188 чел.
ПЦР в реальном времени
2
48
Микробиологические чипы
3
44
1
67
2
29
3
94
Картриджные технологии
Третья группа - 190 чел.
ПЦР
в
реальном
времени, Исследование с помощью «ДНКкультивирование
технологии», BACTEC MGIT 960/320
Микробиологические
чипы,
Исследование с помощью систем ТБкультивирование на жидких средах с Биочип, ТБ-Биочип-2, BACTEC MGIT
использованием автоматических систем 960/320
Картриджные
технологии,
Исследование с помощью картриджей
культивирование
на
плотных Xpert MTB/RIF, метод абсолютных
питательных средах
концентраций
Исследование с помощью «ДНКтехнологии»
Исследование с помощью систем ТББиочип, ТБ-Биочип-2
Картридж Xpert MTB/RIF

13.

Яндекс-форма сбора
статистических данных

14.

Достоверность технологий МГМ

15.

Выявление МБТ в зависимости от
клинической формы заболевания

16.

Результаты МГМ, в зависимости
от формы ТБ
Форма ТБ
хронический
легочный
острый
легочный
инфильтратив
ный
кавернозный
ТБ«ДНКБиочип, технологи
ТБи»
Биочип-2
0,871
Xpert MTB/RIF
0,923
0,974
0,772
0,632
0,775
0,857
-
0,91
1
0,875
1

17.

Выборка с диагностикой ТБ с
применением культуральных
методов
Группа
Количество человек
Методы диагностики
Первая
186
Культуральные методы
Третья
190
Культуральные методы
Молекулярно-генетические методы

18.

Сравнительный анализ выявляемости
МБТ с использованием различных
методов

19.

Преимущества культуральных
методов исследования 2.
диагностики
ТБ
1. Высокая
Возможность
чувствительн
ость и
специфичност
ь.
3.
Разнообразие
применения.
определения
чувствительн
ости к
антибиотика
м.
4.
Возможность
получения
дополнительн
ых данных.

20.

Недостатки культуральных
методов исследования
диагностики ТБ
1. Длительное время
ожидания результатов.
2. Ограниченные
условия роста.
3. Необходимость в
высококвалифицирован
ном персонале.
4. Риск загрязнения.

21.

Сравнительная оценка методов
диагностики ТБ
Критерий
Чувствительность и скорость выявления
Достоверность и точность
Специфика клинических форм
Характеристика
Культуральные методы, хотя и обеспечивают высокую чувствительность,
требуют значительного времени для получения результатов. В первой
группе большинство положительных результатов было получено на 30-й
сутки.
В
то
же
время,
молекулярно-генетические
методы
продемонстрировали свою скорость: 155 положительных результатов были
получены всего за 5 суток в третьей группе, что подчеркивает их
эффективность и необходимость в экстренных случаях.
В ходе исследования были проанализированы различные технологии МГМ.
Результаты показали, что абсолютный показатель достоверности
чувствительности МГМ составляет около 90%. Например, технологии ТББиочип показали положительный результат в 88% случаев, а ПЦР в
реальном времени – 89%. Эти результаты подтверждают, что молекулярногенетические методы обеспечивают высокую точность диагностики, что
критически важно для адекватного лечения.
Анализ выявляемости МБТ в зависимости от клинической формы
заболевания также показал, что молекулярно-генетические методы более
эффективно выявляют различные формы ТБ. Например, в случае
хронического легочного ТБ, МГМ продемонстрировала высокую
выявляемость (94,7%), тогда как культуральные методы требовали больше
времени для достижения аналогичных результатов.

22.

Этапы проведения ПЦР в
комбайне
Этап
Описание
Добавление праймеров
В
реакционную
смесь
добавляют
специфические праймеры, направленные на
гены, характерные для Mycobacterium
tuberculosis.
Циклы термоциклирования Процесс включает циклы нагрева и
охлаждения, что позволяет амплифицировать
целевые фрагменты ДНК.
Анализ результатов
Полученные
результаты
будут
анализироваться
с
использованием
флуоресцентных меток, что позволит
количественно оценить наличие МБТ.

23.

Максимальные сроки поучения
результатов выявляемости МТБ

24.

1.
2.
Преимущества
комбайна
Экономическа
Компактност
я
ь и удобство
эффективнос
размещения.
ть.

25.

ВЫВОДЫ
■ Результаты исследования подчеркивают
важность внедрения молекулярногенетических методов в практику
диагностики туберкулеза, что может
значительно улучшить качество
медицинской помощи и эффективность
борьбы с этой инфекцией.
■ Практическая значимость проявляется
в том, что результаты исследования
могут быть использованы для
совершенствования диагностики ТБ в
лечебных учреждениях, а также для
разработки рекомендаций по

26.

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!