Антигликирующие свойства нового класса химических органических соединений

1.

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования
Волгоградский государственный медицинский университет
Министерства здравоохранения Российской Федерации
Колледж ВолгГМУ
АНТИГЛИКИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА НОВОГО
КЛАССА ХИМИЧЕСКИХ ОРГАНИЧЕСКИХ
СОЕДИНЕНИЙ
Выполнила: Студентка 3 курса 3 группы
Магомедова Марина Магомедовна
Научный руководитель: Ассистент кафедры
фармакологии и биоинформатики ВолгГМУ
Ибрагимова Умида Махсатовна

2.

АКТУАЛЬНОСТЬ
1 1
Актуальность
1.
Неферментативное N-гликозилирование
- взаимодей ствие между белками и глюкозой
- источник токсичных конечных продуктов (КПГ)
2.
КПГ формируют поперечные сшивки, что
влечет дегенеративные изменения тканей ,
повышает жесткость матрикса и влияет на
механорецепцию клеток
3.
Реакция принимает участие в:
•патогенезе естественного старения
•хронических воспалительных заболеваниях
•патогенезе поздних осложнений сахарного диабета
Диабетическая стопа
Ретинопатия
2

3.

Актуальность 2
Согласно данным ВОЗ,
количество людей ,
страдающих от
сахарного диабета,
постоянно растёт
В 2023 году более 400
миллионов человек в
мире имели диабет, а к
2045 году это число
может увеличиться до
700 миллионов
3

4.

Поздние
осложнения
СД
САХАРНОГО ДИАБЕТА
4

5.

Цель исследования:
поиск ингибиторов реакции гликирования спектрофлуориметрическим
методом среди синтетических веществ, производных изоиндола и
оценка их антигликирующих свой ств
Задачи исследования:
1.
1. Воспроизвести реакцию неферментативного гликозирования белков
глюкозой с использованием растворителя диметилсульфоксида 99%;
2.
2. Поиск, посредством проверки антигликирующих свой ств, веществ
(производных изоиндола) с наивысшей активностью;
3. Сопоставление контрольных и опытных значений .
3.
5

6.

Объекты исследования
Новосинтезированные химические соединения, производные изоиндола
(предоставлены к.х.н. Зубковым Ф.И., Россий ский Университет Дружбы Народов
(выражаем благодарность)
РУДН
к.х.н. Зубков Федор Иванович
6

7.

АКТУАЛЬНОСТЬ
Объект
исследования
Изоиндол (IZ):
Привилегированная молекулярная основа для создания средств
терапии патологий , ассоциированных с гликированием
Привилегированная молекулярная основа для создания средств терапии патологи й , ассоциированных с гликированием
Инактивирование промежуточных
продуктов гликирования (свободные
и аддукты)
Инактивирование промежуточных продуктов гликирования (свободные и аддукты)
7

8.

Механизм гликирования белков
8

9.

Механизм гликирования липидов
Пентозидин
Весперлизин
АиВ
9

10.

Материалы и методы
Бычий сывороточный
альбумин фракции V
(Химмед, Россия)
Глюкоза безводная
(Вектон, Россия)
Фосфатный буферный
раствор (0,05М рH=7,4)
Референты: пиридоксамин,
аминогуанидин
Аминогуанидин
Пиридоксаминн
• Статистическая обработка данных
( Microsoft Exel; Graph Pad Prism)
• Спектрофлуориметр Infinite
M200 Pro (Tecan Austria)
10

11.

Дизайн исследования
Этап 1:
Настрой ка и валидация экспериментальных
процедур
Этап 2:
Изучение антигликирующей активности
исследуемых соединений
Формирование
заключения о
наиболее
активном
соединениилидере,
проявившем
активность в
данной тестсистеме
Этап 3:
Обработка данных антигликирующей активности
соединений
11

12.

Дизайн исследования
Растворитель:
ДМСО(99%)
Анализируемое
вещество
БСА (1мг/мл)
Глюкоза (0,36М)
Фосфатный буферный
раствор (PBS, pH=7.4)
Гликирование
с глюкозой
Условия реакции:
Инкубация
60°С, 24ч
КПГ
(флуоресценция
λ(ex)=335 нм; λ(em)=385
нм )
12

13.

I день гликирования
370 мг/мл
270 мг/мл
270 мг/мл
370 мг/мл
23,9967
мг/мл
БСА
PBS
(pH-7.4)
Глюкоза
Азид
натрия
БСА
Азид
натрия
PBS
(pH-7.4)
13

14.

Разведение веществ
14

15.

I день гликирования
реакционная среда
внесения веществ в реакционную
среду
ИНКУБАЦИЯ В ТЕЧЕНИЕ 24Ч
ПРИ 60°С
исследуемые образцы
15

16.

II день гликирования
МУЛЬТИСПЕКТРОВОЙ
АНАЛИЗ
СНЯТИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
СПЕКТРОФЛУОРИМЕТРИЕСКИМ
МЕТОДОМ
(Infinite 200 PRO, TECAN)
Закапывание PBS
(pH=10.5 0.05М)
Прокрутка на шей кере
ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКА
удаление надосадочной
жидкости
СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА
16

17.

РЕЗУЛЬТАТЫ

18.

Антигликирующая активность веществ 1
* - статистические различия с
контролем (ANOVA, p<0.05)
Соединения
Концентрация, мкМ
Активность, %,M± SEM
IZ 1
100
8.0±10.2*
IZ 2
100
9.3±9.8*
IZ 3
100
12.2±9.1*
IZ 4
100
8.3±3.9*
IZ 5
100
4.5±7.1*
IZ 6
100
16.1±2.4*
IZ 7
100
18.7±2.2*
IZ 8
100
38.6±7.1***
IZ 9
100
34.0±1.1***
IZ 10
100
26.4±2.5*
IZ 11
100
24.2±2.1***
IZ 12
100
IZ 13
100
IZ 14
100
IZ 15
100
Пиридоксамин
100
Аминогуанидин
100
19.5±1.3***
28.4±1.2***
-2.5±0.8
-3.8±0.9
33.7±2.0***
16.4±1*
18

19.

Антигликирующая активность веществ 2
* - статистические различия с
контролем (ANOVA, p<0.05)
Соединения
Концентрация, мкМ
Активность, %,M± SEM
IZ 1
100
8.0±10.2*
IZ 2
100
9.3±9.8*
IZ 3
100
12.2±9.1*
IZ 4
100
8.3±3.9*
IZ 5
100
4.5±7.1*
IZ 6
100
16.1±2.4*
IZ 7
100
18.7±2.2*
IZ 8
100
38.6±7.1***
IZ 9
100
34.0±1.1***
IZ 10
100
26.4±2.5*
IZ 11
100
24.2±2.1***
IZ 12
100
IZ 13
100
IZ 14
100
IZ 15
100
Пиридоксамин
100
Аминогуанидин
100
19.5±1.3***
28.4±1.2***
-2.5±0.8
-3.8±0.9
33.7±2.0***
16.4±1*
19

20.

Лидеры
Активность
45
35
Axis Title
25
15
5
-5
Активность
IZ 1
IZ 2
IZ 3
IZ 4
IZ 5
IZ 6
IZ 7
IZ 8
IZ 9
IZ 10
IZ 11
IZ 12
IZ 13
IZ 14
IZ 15
8
9.3
12.2
8.3
4.5
16.1
18.7
38.6
34
26.4
24.2
19.5
28.4
-2.5
-3.8
Пиридокс Аминогуа
амин
нидин
33.7
16.4
20

21.

Выводы
1. Настроены методики оценки антигликирующей активности;
2. В
результате
исследования
доказана
ингибирующая
активность
производных изоиндола в реакции гликирования in vitro;
3. Из 15 полученных веществ, производных изоиндола, 11 веществ имеют
антигликирующие свой сва in vitro в концентрации 100 мкМ;
4. Соединения под лабораторными шифрами IZ 7,IZ 8, IZ 9, IZ 10, IZ 11, IZ 12, IZ
13 проявили высокую антигликирующую активность;
5. Изоиндол является перспективной основой молекулярного ядра для
придания молекуле антигликирующих свой ств.
21

22.

БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ!
Магомедова Марина Магомедовна, 3 курс 3 группа