презентация 18.06.24VKR(1)

1.

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования
Волгоградский государственный медицинский университет
Министерства здравоохранения Российской Федерации
Колледж ВолгГМУ
АНТИГЛИКИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА НОВОГО
КЛАССА ХИМИЧЕСКИХ ОРГАНИЧЕСКИХ
СОЕДИНЕНИЙ
Выполнила: Студентка 3 курса 3 группы
Магомедова Марина Магомедовна
Научный руководитель: Ассистент кафедры
фармакологии и биоинформатики ВолгГМУ
Ибрагимова Умида Махсатовна

2.

АКТУАЛЬНОСТЬ
1 1
Актуальность
1.
Неферментативное N-гликозилирование
- взаимодей ствие между белками и глюкозой
- источник токсичных конечных продуктов (КПГ)
2.
КПГ формируют поперечные сшивки, что
влечет дегенеративные изменения тканей ,
повышает жесткость матрикса и влияет на
механорецепцию клеток
3.
Реакция принимает участие в:
•патогенезе естественного старения
•хронических воспалительных заболеваниях
•патогенезе поздних осложнений сахарного диабета
Диабетическая стопа
Ретинопатия
2

3.

Актуальность 2
Согласно данным ВОЗ,
количество людей ,
страдающих от
сахарного диабета,
постоянно растёт
В 2023 году более 400
миллионов человек в
мире имели диабет, а к
2045 году это число
может увеличиться до
700 миллионов
3

4.

Поздние
осложнения
СД
САХАРНОГО ДИАБЕТА
4

5.

Цель исследования:
поиск ингибиторов реакции гликирования спектрофлуориметрическим
методом среди синтетических веществ, производных изоиндола и
оценка их антигликирующих свой ств
Задачи исследования:
1.
1. Воспроизвести реакцию неферментативного гликозирования белков
глюкозой с использованием растворителя диметилсульфоксида 99%;
2.
2. Поиск, посредством проверки антигликирующих свой ств, веществ
(производных изоиндола) с наивысшей активностью;
3. Сопоставление контрольных и опытных значений .
3.
5

6.

Объекты исследования
Новосинтезированные химические соединения, производные изоиндола
(предоставлены к.х.н. Зубковым Ф.И., Россий ский Университет Дружбы Народов
(выражаем благодарность)
РУДН
к.х.н. Зубков Федор Иванович
6

7.

АКТУАЛЬНОСТЬ
Объект
исследования
Изоиндол (IZ):
Привилегированная молекулярная основа для создания средств
терапии патологий , ассоциированных с гликированием
Привилегированная молекулярная основа для создания средств терапии патологи й , ассоциированных с гликированием
Инактивирование промежуточных
продуктов гликирования (свободные
и аддукты)
Инактивирование промежуточных продуктов гликирования (свободные и аддукты)
7

8.

Механизм гликирования белков
8

9.

Механизм гликирования липидов
Пентозидин
Весперлизин
АиВ
9

10.

Материалы и методы
Бычий сывороточный
альбумин фракции V
(Химмед, Россия)
Глюкоза безводная
(Вектон, Россия)
Фосфатный буферный
раствор (0,05М рH=7,4)
Референты: пиридоксамин,
аминогуанидин
Аминогуанидин
Пиридоксаминн
• Статистическая обработка данных
( Microsoft Exel; Graph Pad Prism)
• Спектрофлуориметр Infinite
M200 Pro (Tecan Austria)
10

11.

Дизайн исследования
Этап 1:
Настрой ка и валидация экспериментальных
процедур
Этап 2:
Изучение антигликирующей активности
исследуемых соединений
Формирование
заключения о
наиболее
активном
соединениилидере,
проявившем
активность в
данной тестсистеме
Этап 3:
Обработка данных антигликирующей активности
соединений
11

12.

Дизайн исследования
Растворитель:
ДМСО(99%)
Анализируемое
вещество
БСА (1мг/мл)
Глюкоза (0,36М)
Фосфатный буферный
раствор (PBS, pH=7.4)
Гликирование
с глюкозой
Условия реакции:
Инкубация
60°С, 24ч
КПГ
(флуоресценция
λ(ex)=335 нм; λ(em)=385
нм )
12

13.

I день гликирования
370 мг/мл
270 мг/мл
270 мг/мл
370 мг/мл
23,9967
мг/мл
БСА
PBS
(pH-7.4)
Глюкоза
Азид
натрия
БСА
Азид
натрия
PBS
(pH-7.4)
13

14.

Разведение веществ
14

15.

I день гликирования
реакционная среда
внесения веществ в реакционную
среду
ИНКУБАЦИЯ В ТЕЧЕНИЕ 24Ч
ПРИ 60°С
исследуемые образцы
15

16.

II день гликирования
МУЛЬТИСПЕКТРОВОЙ
АНАЛИЗ
СНЯТИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
СПЕКТРОФЛУОРИМЕТРИЕСКИМ
МЕТОДОМ
(Infinite 200 PRO, TECAN)
Закапывание PBS
(pH=10.5 0.05М)
Прокрутка на шей кере
ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКА
удаление надосадочной
жидкости
СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА
16

17.

РЕЗУЛЬТАТЫ

18.

Антигликирующая активность веществ 1
* - статистические различия с
контролем (ANOVA, p<0.05)
Соединения
Концентрация, мкМ
Активность, %,M± SEM
IZ 1
100
8.0±10.2*
IZ 2
100
9.3±9.8*
IZ 3
100
12.2±9.1*
IZ 4
100
8.3±3.9*
IZ 5
100
4.5±7.1*
IZ 6
100
16.1±2.4*
IZ 7
100
18.7±2.2*
IZ 8
100
38.6±7.1***
IZ 9
100
34.0±1.1***
IZ 10
100
26.4±2.5*
IZ 11
100
24.2±2.1***
IZ 12
100
IZ 13
100
IZ 14
100
IZ 15
100
Пиридоксамин
100
Аминогуанидин
100
19.5±1.3***
28.4±1.2***
-2.5±0.8
-3.8±0.9
33.7±2.0***
16.4±1*
18

19.

Антигликирующая активность веществ 2
* - статистические различия с
контролем (ANOVA, p<0.05)
Соединения
Концентрация, мкМ
Активность, %,M± SEM
IZ 1
100
8.0±10.2*
IZ 2
100
9.3±9.8*
IZ 3
100
12.2±9.1*
IZ 4
100
8.3±3.9*
IZ 5
100
4.5±7.1*
IZ 6
100
16.1±2.4*
IZ 7
100
18.7±2.2*
IZ 8
100
38.6±7.1***
IZ 9
100
34.0±1.1***
IZ 10
100
26.4±2.5*
IZ 11
100
24.2±2.1***
IZ 12
100
IZ 13
100
IZ 14
100
IZ 15
100
Пиридоксамин
100
Аминогуанидин
100
19.5±1.3***
28.4±1.2***
-2.5±0.8
-3.8±0.9
33.7±2.0***
16.4±1*
19

20.

Лидеры
Активность
45
35
Axis Title
25
15
5
-5
Активность
IZ 1
IZ 2
IZ 3
IZ 4
IZ 5
IZ 6
IZ 7
IZ 8
IZ 9
IZ 10
IZ 11
IZ 12
IZ 13
IZ 14
IZ 15
8
9.3
12.2
8.3
4.5
16.1
18.7
38.6
34
26.4
24.2
19.5
28.4
-2.5
-3.8
Пиридокс Аминогуа
амин
нидин
33.7
16.4
20

21.

Выводы
1. Настроены методики оценки антигликирующей активности;
2. В
результате
исследования
доказана
ингибирующая
активность
производных изоиндола в реакции гликирования in vitro;
3. Из 15 полученных веществ, производных изоиндола, 11 веществ имеют
антигликирующие свой сва in vitro в концентрации 100 мкМ;
4. Соединения под лабораторными шифрами IZ 7,IZ 8, IZ 9, IZ 10, IZ 11, IZ 12, IZ
13 проявили высокую антигликирующую активность;
5. Изоиндол является перспективной основой молекулярного ядра для
придания молекуле антигликирующих свой ств.
21

22.

БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ!
Магомедова Марина Магомедовна, 3 курс 3 группа