Histologická technika 1

1. Histologická technika 1 MUDr. Richard Becke

• Systém jednotlivých kroků, procesů a
• postupů k zhotovení histologického
• preparátu.
• Tento základní postup je zobrazen
• na obrazové tabuli.

2. Snímek 2

3. Odběr materiálu

• 1/ Biopsie - odběr vzorku / tkáně / ze živého
organismu.
• 2/ Nekropsie – odběr vzorku / tkáně / z
• mrtvého organismu.

4. Způsoby odběru

• 1/ Excize
• 2/ Punkce
• /probatorní punkce/
• /trepanobiopsie /
• 4/ Endoskopická
biopsie
• 5/ Stěr / výtěr /
• 6/ Obtisk
• 3/ Kyretáž

5. Velikost odebrané tkáně

• 1/ Pro světelný mikroskop :
maximálně do velikosti 1 cm3
• 2/ Pro elektronový mikroskop :
maximálně do velikosti 1 mm 3
• Čím menší odebraný vzorek – tím lepší
• fixace celého vzorku.

6. Excize / vyříznutí /

• 1/ použít ostrý chirurgický nástroj
• např. skalpel./ nestříhat nůžkami /
• 2/ nejčastější způsob odběru, např. v průběhu
operace je možno takto odebrat kousek tkáně.
• 3/ excize je biopsie i nekropsie.

7. Punkce / nabodnutí / diagnostická punkce

Dutá jehla a inj.stříkačka
1/ kde je možno použít punkci: např. :
játra , ledviny, pancreas, lymfatické uzliny
štítná žláza,
2/ sternální punkce – kostní dřeň,sternum
3/ tekutiny : krev nebo
mozkomíšní mok – lumbální punkce.
Získá se jen malý kousek tkáně, pár
buněk.!!!!

8. Trepanobiopsie

Trepanon / lat. /
Speciální odběr kostní dřeně z lopaty kosti
kyčelní
Používá se : trepanobioptická jehla
/ navrtá se kost , doprostřed jehly
se zavede vodič – odebere se valeček
kostní dřeně – pro vyšetření
• Možnost odebrat kostní dřeň • pro transplantaci

9. Snímek 9

Sternální punkce
Trepanobiopsie

10. Snímek 10

Lumbální punkce
Odběr mozkomíšního
moku

11. Kyretáž / mikroabraze /

• 1/ provádí se nástrojem : kyreta
• 2/ odběr děložní sliznice/endometrium/
• 3/ účel : kontrola správně vytvořené
• sekreční fáze menstruačního cyklu,tedy
• správná tvorba hormonů žlut. tělíska.

12. Endoskopická biopsie

• 1/ Endoskop – přístroj, kamera, osvětlení, malé
ostré nůžky na konci trubice.
• 2/ Dýchací cesty : laryngoskopie
bronchoskopie
• 3/ Trávicí trubice : oesophagoskopie
gastroskopie
rektoskopie
kolonoskopie

13. Snímek 13

Laryngoskop

14. Snímek 14

Karcinom tlustého střeva – kolonoskopie , odběr kousku tkáně

15. Stěr / výtěr /

1/ Poševní cytologie speciálním stětečkem
jemný stěr povrchových buněk epitelu
vaginy /následné vyšetření v mikroskopu/
/ exfoliativní poševní cytologie /
2/ Děložní čípek
Cytologické vyšetření – buňky děložního hrdla –
preventivní vyšetření k včasnému rozpoznání
rakoviny děložního čípku / papillomavirus /
• 2/ mikrobiologie – častěji využívá tento
druh odběru.

16. Důležité body při odběru

• 1/ zodpovědnost lékaře při odběru!!!!
• 2/ vše řádně označit, značit lahvičky!!!!
• 3/ nezaměnit materiál, nezaměnit lahvičky
důsledky záměny mohou být tragické!!!
• 4/ doručit do laboratoře, zodpovědnost
personálu oddělení nemocnice
• 5/ okamžitě fixovat!!!!

17. Průvodka k histolog.materiálu

Tento dokument /formulář/ musí obsahovat
důležité body:
Číslo průvodky souhlasí s číslem lahvičky
Informace o pacientovi /jméno, rodné číslo,
věk,klinickou diagnózu,číslo pojišťovny/.
Informace o odběru: přesná lokalizace odběru,
Fixační tekutina – její druh.
• Čas odběru a čas, kdy byl materiál vložen do
fixační tekutiny.

18. Fixace odebrané tkáně

• Je to jemná , rychlá a šetrná denaturace
• bílkovin v cytoplasmě buněk, aby se
• zabránilo autolýze.
• Musí se provést okamžitě po odběru!!!!!

19. Rozklad tkáně způsobený enzymy

AUTOLÝZA
• Je to samovolný
rozklad buněk a tkání
• způsobený vlastními
• enzymy
• HNILOBA
• Je to samovolný,
pomalejší rozklad
tkáně způsobený
• enzymy bakterií

20. Enzymy v buňkách

• Pracují v našem těle za ideální :
• Teploty
• pH
• Odběrem se mění tyto základní podmínky
• pro činnost enzymů a okamžitě začínají
• autolytické změny.

21. Enzymy Látky, ze kterých se skládá organismus, neustále podléhají chemické přeměně. Každá z tisíců těchto chemických reakcí je

katalyzována speciálním
enzymem.
Název enzymu má koncovku -áza (fosfatáza, dehydrogenáza).
Enzym je tvořen velkou molekulou proteinu, její 3D uspořádání vytváří „aktivní
centrum“, místo, kde se váže molekula substrátu ( = látka, jejíž přeměnu na
produkt enzym katalyzuje).
Vazba enzymu a
substrátu („zámek a klíč“)
Elliot H, Elliot D: Biochemistry and molecular biology, 2001
Funkce některých enzymů vyžadují kromě bílkovinné molekuly (apoenzym)
přítomnost kofaktorů ( Mg+2 , Zn+2) nebo nebílkovinného koenzymu (např.
deriváty vitamínů). Teplota a pH prostředí výrazně ovlivňuje funkci enzymů.

22. Požadavky na fixaci

• 1/ rychlost / pomalá fixace je k ničemu,
např. v histochemii / ,záleží na velikosti
• odebraného vzorku.
• 2/ šetrnost/ fixace nesmí ničit buňky,nesmí
nastat destrukce tkáně /.
• 3/ má umožnit další zpracování vzorku
• / především umožnit barvení tkáně/.

23. Možnosti fixace

• 1/ Fyzikální metody
• 2/ Chemické metody /fixační tekutiny/
• 3/ Kombinace 1/ a 2/