Brucellacapt® In Vitro Diagnostik Kullanım için

1.

1
BRUCELLACAPT®
In Vitro Diagnostik Kullanım için
BRUCAPT: Total anti-Brucella antikorlarının saptanması için, tek
aşamalı immunocapture analizi. 24 test. Taramada 96 test.
GİRİŞ:
İnsan brusellozunun çok çeşitli klinik bulguları olması, tanıyı
zorlaştırmaktadır. Brusellozun serolojik tanısında en çok
kullanılan teknikler, direkt aglütinasyon, Rose Bengal testi,
Coombs testi ve ELISA'dır. Bu teknikler, hastalığın akut fazında,
yeterince hassastır. Bruselloz tanısını serolojik açıdan ekarte
etmek için, sadece gelişmiş Coombs testi kullanılabilir. Ayrıca,
Coombs testi ile ölçülen serum titrelerinin artması, hastalığın
yeniden aktive olduğunun bir işareti olabilir. Bu testte,
Brucella'ya spesifik olmayan immünoglobülinleri uzaklaştıran
reaksiyonun gerçekleşmesine yardımcı olan bir anti-human
immünoglobülin serumunun yıkama adımından sonra
eklenmesiyle, tamamlanmamış aglütine olmayan antikorlar
tespit edilir. Bununla birlikte, pek çok laboratuvarda çalışması
meşakkatli olduğu için rutin olarak uygulanmaz, teşhis
konmayan vak'alar önemli ölçüde artar.
BRUCELLACAPT®, kolay ve direkt yolla çalışır.
Coombs testinde ve BRUCELLACAPT® titreleri arasında iyi bir
korelasyon elde edilmiştir; böylece yüksek hassasiyet ve
özgünlük sergilenmiştir.
Yakın zamanda yapılan araştırmalar, uygun klinik seyri olan
hastalarda BRUCELLACAPT® ile elde edilen titrelerin
gelişiminde
bir
düşüş
olduğunu
göstermiştir,
BRUCELLACAPT® hastalığın tanısı ve takibi için önemli bir araç
haline gelmiştir.
TEST PRENSİBİ:
Test, anti-huan immünoglobülinleri ile kaplanmış U-dipli
kuyucuklu striplerden oluşur. Serum eklenip dilüe edildikten
sonra antijen ilave edilir ve striplerde aglütinasyon
gerçekleşinceye kadar 24 saat inkübe edilir. Bu tahlil, yalnızca
Coombs testi ile ölçülebilen aglütinasyonun ve eksik
antikorların saptanmasına olanak sağlar.
KİT ÖZELLİKLERİ:
Tüm reaktifler kullanıma hazır olarak sunulmuştur.
Tekniğin performansına yardımcı olması için bakteri
süspansiyonu ve serum dilüenti renklendirilmiştir.
Numuneler için predilüsyon gerekli değildir.
12 adet kırılabilir 8-kuyucuklu stripler halinde sunulmaktadır;
bu sayede sadece çalışılacak numune kadar kuyucuk tüketilmiş
olur.
Testin sonucu 24 saat içinde tek bir adımla elde edilir.
KİT İÇERİĞİ:
1 VIRCELL BRUCELLACAPT PLATE: 2 plak; 12 adet 8 kuyucuklu
strip U-dipli, immünglobinlerin yakalanması için özel işlem
görmüş.
2 VIRCELL BRUCELLACAPT SERUM DILUENT: 14 ml boyalı serum
dilüenti
3 VIRCELL BRUCELLACAPT SUSPENSION: 12 ml Brucella
abortus bacterial suspension ;
boyalı ve formaldehitle muamele edilmiş.
4 VIRCELL BRUCELLACAPT POSITIVE CONTROL: 250 µl pozitif
kontrol Proclin içerir.
5 VIRCELL BRUCELLACAPT NEGATIVE CONTROL: 250 µl
nrgatif kontrol Proclin içerir.
2-8ºC ‘de saklayın ve son kullanım tarihini kontrol edin.
Gerekli ama sağlanmayan malzemeler:
-Hassas mikropipetler 5 µl.
-Sekiz kanallı mikropipet 50 µl.
-Termostatlı inkübatör.
-Nem bölmesi.
SAKLAMA KOŞULLARI:
2- 8 °C de saklayın. Son kullanma tarihi geçmiş olan kitleri
kullanmayın. Bu, sadece reaktifler kapalı olarak ve 2-8ºC'de
saklandığı taktirde geçerlidir. Kitler, kapalı halde ve 2-8ºC'de
saklandıklarında, son kullanma tarihilerinde belirtilen ayın
sonuna kadar kullanılabilir.
AÇILMIŞ REAKTİFLERİN SAKLANMASI:
Reaktif
Plate
Tüm bileşenler
Stabilite ve Saklama
2-8ºC’de 3 ay.
(orijinal paketinde)
Son kullanma tarihi için ambalaj
etiketine bakın (2-8ºC'de)
REAKTİFLERİN STABİLİTELERİ VE KULLANIMLARI:
Mikrobiyal kontaminasyonu önlemek için reaktifleri aseptik
koşullarda tutun/çalışın.
Bakteriyal süspansiyon, ışığa karşı hassastır. Işığa maruz
bırakmayın.Serum dilüenti ve bakteri süspansiyonundan,
sadece test için gerekli olan miktarlarda kullanın. Fazla
gelen solüsyonu, tekrar şişeye koymayın.
VIRCELL, S.L., Kit içindeki reaktiflerin yanlış kullanımından
dolayı, sorumluluk kabul etmez.
ÖNERİLER VE ÖNLEMLER:
1. Sadece in vitro diagnostik kullanım için. Sadece
profesyonel kullanım içindir.
2. Sadece kit bileşenlerini kullanın. Farklı kitlerin veya
üreticilerin bileşenlerini karıştırmayın. Diğer VIRCELL
BRUCELLACAPT® lotları, sadece serum dilüsyon eşdeğerleri
ile uyumludur.
3. Her bir test adımı için temiz pipet uçları kullanılmalıdır.
Sadece temiz ve tercihen atılabilir malzeme kullanın.
4. Pakete zarar gelmesi halinde, kullanmayın.
5. Ağzınızla pipetleme yapmayın.
6. Kitteki kontroller, insan ve hayvan orijinli maddeler
içerir. Bu kitteki insan serum kontrolleri, Hepatit B Yüzey
Antijeni (HBsAg), Hepatit C antikorları ve İnsan İmmün
Yetmezlik Virüsü antikorları için test edilmiş ve negatif
bulunmuş olsa da, kontrol serumları ve hasta numuneleri
potansiyel bulaşıcı olarak ele alınmalıdır. Bakteriyal
süspansiyon, inaktive B. abortus antijeni içerir. Buna
rağmen yine de potansiyel enfeksiyöz olarak ele alınmalı
ve dikkatli kullanılmalıdır. Hiçbir mevcut yöntem, bu veya
diğer bulaşıcı ajanların olmadığına dair tam bir garanti
veremez. Tüm malzemeler, potansiyel bulaşıcı olarak ele
alınmalı ve atılmalıdır. Klinik atıkların atılmasıyla ilgili yerel
düzenlemelere uyun.
7. Bakteriyal süspansiyon, formaldehyde (konsantrasyon
<%1) içerir. Cilt, göz ve mukoza ile temasından
kaçının.
8. Kitte bulunan cam malzemeler, kırılması halinde fiziksel
hasara neden olabilir. Dikkatli çalışın!

2.

2
9. Yalnızca bu insertte açıklanan protokolleri uygulayın.
Belirtilenlerin dışındaki inkübasyon sıcaklıkları ve nem koşulları,
hatalı sonuçlar verebilir.
10. Reaktifleri kesinlikle, gerekenden daha uzun süre oda
sıcaklığında bırakmayın.
11. İnkübasyonlar esnasında kuyucuklar, kit içinden çıkan
yapışkan bantlarla kapatılmalıdır. Belirtilenden daha fazla bant
kullanılması, yanlış sonuçlara neden olabilir.
12. Bacterial suspension 3 ‘ü kullanmadan önce kuvvetlice
çalkalayın.
NUMUNELERİN TOPLANMASI VE İŞLENMESİ:
Kan, nitelikli personel tarafından venipunktür teknikleri
kullanılarak, aseptik olarak toplanmalıdır. Steril veya aseptik
tekniklerin kullanılması numunenin bütünlüğünü koruyacaktır.
Serum / plazma numuneleri toplandıktan sonra 2-8ºC’de
muhafaza edilmeli ya da test 7 gün içerisinde yapılmayacaksa
dondurulmalıdır
(-20ºC).
Numuneler
tekrar
tekrar
dondurulup/çözülmemelidir. Hiperlipidemik, hemolizli veya
kontamine numuneleri kullanmayınız. Partikül içeren
numuneler, santrifüjlenerek temizlenmelidir. Bu kit, serum
veya plazma ile kullanım için uygundur.
Kontrol materyali, dahili olarak onaylanmış referans Serum panelleri
için izlenebilir.
KULLANICILAR İÇİN VALİDASYON PROTOKOLÜ:
Her test çalışmasına pozitif ve negatif kontroller dahil
edilmelidir. Bu, testin ve kitin geçerliliğini sağlar.
Pozitif ve negatif kontrol titreleri, ilgili etikette belirtilmiş
olmalıdır.
SONUÇLARIN YORUMLANMASI
Kuyucuğun yüzeyini tamamen kaplayan bir tabaka
görünüyorsa, test pozitiftir. Kuyucuğun ortasında düğüme
benzer bakteri görünümü ise, negatif sonucun işaretidir.
1/320'den yüksek titreler, brusellozu düşündürse de, tanı
koymadan önce diğer klinik bulgular ve seroprevalans ile
birlikte değerlendirilmelidir. Endemik bölgelerde, <1/320
titreler sıklıkla görülmektedir
1/5120 pozitif titrasyon olması durumunda, özellikle
BRUCELLACAPT® bu hastalardaki hastalığın takibi için
kullanılacaksa, serumu ilave dilüe ederek test etmeniz önerilir.
TEST PROSEDÜRÜ:
1. Kullanmadan önce tüm reaktifleri oda sıcaklığına getirin.
Çalışılacak numune sayısı kadar well - strips 1 çıkarın.
2. A kuyucuğuna 50 µl serum diluent 2 pipetleyin. A'dan H'ye
kadar olan kuyucukların içerisine 50 µl serum diluent ekleyin. A
kuyucuğuna her bir serumdan, positive 4 ve negative 5
kontrollerden 5'er µl pipetleyin. A'dan H'ye kadar olan herbir
kuyucuğa 50 µl ile çift dilüsyon yapın.
3. Tüm kuyucuklara,kuvvetlice çalkaladığınız bacterial
suspension 3'ten 50'şer µl pipetleyin.
4. Yapışkan bant ile sıkıca kapatın ve 37oC'de, ışığa maruz
kalmadyan korunaklı bir nem odasında 24 saat inkübe edin.
5. Dikkate alınması gereken titre sonuçlarını okuyun: A sırası
için 1/40, B sırası için 1/80, C sırası için 1/160, D sırası için
1/320, E sırası 1/640, F sırası 1/1280, G sırası1/2560 ve H sırası
için 1/5120.
BAKTERİYAL SÜSPANSİYONU KULLANMADAN ÖNCE
KUVVETLİCE ÇALKALAYIN. TESTİN İNKÜBASYONUNU, IŞIĞA
MARUZ KALMAYAN KORUNAKLI NEM ODASINDA YAPIN.
TARAMA PROSEDÜRÜ:
BRUCELLACAPT® tarama testi olarak kullanılacaksa, iki dilüsyon
(1/320 ve 1/640) önerilir. Pozitiflerse, 1/640'dan başlayarak
tam titrasyon yapılmalıdır. Ek bir serum dilüenti (ref B0002.
500ml) gereklidir. 1/160 ve 1/320 dilüsyonlarını hazırlamak
için, birinci tüpe (A) 800 μl ve ikinci tüpe (B) 100 μl dilüent
ekleyin. A tüpüne 5 μl serum ekleyin, iyice karıştırın ve 100 μl B
tüpüne aktarın. Plağın birinci kuyucuğuna A tüpünden 50
μl,ikinci kuyucuğuna ise B tüpünden 50 μl pipetleyin. Son
olarak, önceden çalkalanmış antijen süspansiyonunun 50 μl'ni
tüm kuyucuklara ilave edin. Plağı dikkatlice çalkalayın ve
yukarıda tarif edildiği gibi inkübe edin.
INTERNAL KALİTE KONTROL:
Her lot, dağıtılmadan önce, kullanıcılar için doğrulama
protokolünden daha katı spesifikasyonlara
uyan dahili Q.C testine tabi tutulur. Her lotun, son Q.C
sonuçları mevcuttur.
POZİTİF REAKSİYON NEGATİF REAKSİYON
SINIRLAMALAR:
1. Bu kit, insan serumu ile kullanılmak üzere tasarlanmıştır.
2. Bu kitin kullanıcısının paketteki prospektüsü dikkatli bir
şekilde okuması ve anlaması tavsiye edilir. Güvenilir test
sonuçları elde etmek için, protokole sıkı sıkıya bağlı kalınması
gerekir. Numunelerin ve reaktiflerin doğru pipetlenmesi ve
inkübasyon adımlarının doğru zamanlanması, doğru sonuçlar
için şarttır.
3. Numune sonuçları, klinik değerlendirme ve diğer tanı
yöntemleri ile birlikte kullanılmalıdır. Kesin bir tanı, izolasyon
teknikleri ile yapılmalıdır.
4. Bu test, enfeksiyonun yerini göstermez. İzolasyonun yerini
alması için tasarlanmamıştır.
5. Saptanabilir bir antikor seviyesinin olmaması,enfeksiyon
olasılığını ekarte etmez.
PERFORMANSLAR:
DUYARLILIK VE ÖZGÜLLÜK:
DAHİLİ:
Sağlıklı kontrollere karşılık gelen 85, geri kalanı hastalığın çeşitli
dönemlerine ait olan bruselloz hastalarına ait 206 serum
incelendi. Coomb testi mikroassay tekniği ile gerçekleştirilmiştir.
Sonuçlar tabloda verilmiştir:

3.

3
C
O
O
M
B
S
BRUCELLACAPT®
3202560204801280 10240
81920
NEG
40160
NEG
82
3
40-160
1
5
1
5
12
11
7
18
2
3201280
256010240
2048081920
>81920
TOPLA
M
85
1
8
3
31
10
26
61
3
11
16
5
5
46
206
>81920
TOPLAM
83
13
20
31
13
HARİCİ:
82'sinin teşhisi konulmuş 315 serum, şüpheli hastalardan 157
serum 412 kontrol serumu, BRUCELLACAPT®, Coombs test ve
serum aglütinasyon testi (SAT) (Ref. no.12) ile çalııldı,
Sonuçlar aşağıdaki gibi idi:
Testin sonuçları, belirtilen numuneler ile etkileşim ya da çapraz
reaktivite
olmaksızın,
kitin
spesifik
reaksiyonunu
göstermektedir.
ETİKETLERDE KULLANILAN SEMBOLLER:
In vitro diagnostik medikal ürün
Kullanım tarihi (son kullanma tarihi)
x-yºC’de muhafaza
<X> testleri için yeterli içerik
Parti kodu
Katalog numarası
Kullanım talimatlarına bakın
Hassasiyet
Onaylanmış
hastalar
Özgünlük
BRUCELLACAPT COOMBS
®
SAT
%95.1
% 91.5
% 65.8
%99
% 99.8
%100
<X> kuyucuk
TAHLİL PROSEDÜRÜNÜN ÖZETİ:
A KUYUCUĞUNA, 50 µl SERUM
DILUENT PİPETLEYİN.
112 hastadan alınan145 serum incelendi (Ref. 11),
BRUCELLACAPT® ve Coombs testi arasında titreler 1 / 40-1 /
2560 arasında iyi korelasyon görüldü; BRUCELLACAPT® Coombs
testinden daha yüksek titreler gösterdi.
Çalışma iki grupta gerçekleştirilmiştir: Birinci grupta 42
primoinfekte hasta ve 100 sağlıklı birey; İkinci grupta ise 24
hasta ve 28 sağlıklı birey vardı. Bunların tamamında da, daha
önceden enfeksiyon öyküsü mevcuttu. Aşağıdaki sonuçlar elde
edildi (Referans No.20):
Grup 1
Grup 2
Hassasiyet
Özgünlük
Hassasiyet
Özgüllük
Coombs
%100
%98
%100
%80
BRUCELLACAPT
%100
%95
%95
% 74
®
INTRA-ASSAY HASSASİYET :
3 serum (2 pozitif ve 1 negatif) aynı operatör tarafından esasen
değişmemiş koşullar altında gerçekleştirilen tek bir deneyde,
beş grup halinde ayrı ayrı pipetlendi. Birden fazla dilüsyon
yapıldığında, titre kaymaları gözlendi.
INTER-ASSAY HASSASİYET:
3 serum (2 pozitif ve 1 negatif), operatörün veya test gününün
farklı olduğu, 5 farklı koşulda ayrı ayrı pipetlendi. Birden fazla
dilüsyon yapıldığında, titre kaymaları gözlendi.
ÇAPRAZ REAKTİVİTE VE ETKİLEŞİMLER:
Sendromik grubun diğer üyeleri (Salmonella typhi O,
Salmonella typhi H, sitomegalovirüs, Toxoplasma, Epstein-Barr
virüsü) için pozitif olarak bilinen 16 numune test edildi.
A’DAN H’YE KADAR OLAN
KUYUCUKLARA, 50 µl SERUM
DILUENT PİPETLEYİN.
A KUYUCUĞUNA, 5 µl SERUM
PİPETLEYİN.
HER KUYUCUĞA 50 µl İLE
ÇİFT DİLÜSYON YAPIN
TÜM KUYUCUKLARA, 50 µl
ANTIGEN PİPETLEYİN.
Çalkalayın ve 37ºC de 24 saat inkübe edin (ışıktan koruyarak).
BİBLİYOGRAFİ:
1. Alton, G. G. and L. M. Jones. 1967. Laboratory techniques in
brucellosis. Monogr Ser World Health Organ 55:1-92.
2. Baum, M., O. Zamir, R. Bergman-Rios, E. Katz, Z. Beider, A.
Cohen, and M. Banai. 1995. Comparative evaluation of
microagglutination test and serum agglutination test as
supplementary diagnostic methods for brucellosis. J Clin
Microbiol 33:2166-70.
3. Benito, R., E. Duran, J. Gil, and M. C. Rubio. 2000. Brucelosis
osteoarticular: uso diagnóstico en ensayos de inmunocapturaaglutinación. Med Clin (Barc) 114: 639.
4. Benito, R., M. E. Duran, J. Gil, and M. C. Rubio. 2001.
Bacteremia por Brucella con serología convencional negativa.
Enferm Infecc Microbiol Clin 19:348-9.
5. Bosilkovski, M. et al. 2009. The role of Brucellacapt test for
follow-up patients with brucellosis. Comp. Immun. Microbiol.
Infect. Dis. 33;435-442.
6. Colmenero, J. D., J. M. Reguera, A. Fernandez-Nebro, and F.
Cabrera-Franquelo. 1991. Osteoarticular complications of
brucellosis. Ann Rheum Dis 50:23-6.
7. Desmonts, G., Y. Naot, and J. S. Remington. 1981.
Immunoglobulin M-immunosorbent agglutination assay for

4.

4
diagnosis of infectious diseases: diagnosis of acute congenital
and acquired Toxoplasma infections. J Clin Microbiol
14;486-91.
8. Duran-Ferrer, M., J. Mendoza, A. Osuna, V. Caporale, A.
Lucas, L. Leon, and F. Garrido. 2002. Evaluation of a new
immunocapture test for the diagnosis of ovine brucellosis
caused by Brucella melitensis. Vet Rec 151:629-35.
9. Escolar, J. L., J. Villalobos, L. Condor, and E. Clavijo. 2000.
Peritonitis fibrinar causada por Brucella sp. Enferm Infecc
Microbiol Clin 18:97-8.
10. Foz, A. 1970. Estandarización de reacciones serológicas
usadas en el diagnóstico de brucelosis. Microbiol Esp
23;159-77.
11. Gomez, M. C., C. Rosa, P. Geijo, and M. A. Escribano. 1999.
Estudio comparativo del test Brucellacapt versus el test de
Coombs para Brucella]. Enferm Infecc Microbiol Clin 17:283-5.
12. Orduna, A., A. Almaraz, A. Prado, M. P. Gutierrez, A. GarciaPascual, A. Duenas, M. Cuervo, R. Abad, B. Hernandez, B.
Lorenzo, M. A. Bratos, and A. R. Torres. 2000. Evaluation of an
immunocapture-agglutination
test
(Brucellacapt)
for
serodiagnosis of human brucellosis. J Clin Microbiol 38:4000-5.
13. Orduńa A, Prado A, Gutierrez MP, Garcia-Pascual A, Cuervo
M, Abad R, Dueńas A, Bratos MA, Alamarz A, and RodriguezTorres A. Brucellacapt: A new method immunocaptureagglutination test for the diagnosis of human brucellosis. 10 th
ECCMID. Stockholm.
14. Ortega, M., A. Lara, M. J. Perez, V. Diaz, A. Ruiz, and M.
Rodriguez. 2001. Bacteremia causada por Brucella sp. con
serología convencional negativa. Enferm Infecc Microbiol Clin
19:34.
15. Pellicer, T., J. Ariza, A. Foz, R. Pallares, and F. Gudiol. 1988.
Specific antibodies detected during relapse of human
brucellosis. J Infect Dis 157:918-24.
16. Prado A, Gutierrez MP, Dueñas A, Ruiz L, Mantecon MA,
Bratos MA, and Orduña A. Serological follow-up of brucella
patients using an immunocapture-agglutination test
(Brucellacapt), Coombs anti-Brucella and LPS-ELISA test. 10 th
ECCMID. Stockholm.
17. Rubio Vallejo, M., J. L. Del Pozo Leon, J. M. HernandezMolina, I. Dorronsoro Ibero, T. Marrodan Ciordia, and R. Diaz
Garcia. 2002. Diagnostico de brucelosis humana. Papel del pH
en el test de seroaglutinación e influencia del pH sobre la
actividad aglutinante de anticuerpos IgM, IgG e IgA. Enferm
Infecc Microbiol Clin 20:144-9.
18. Sanchez-Sousa, A., C. Torres, M. G. Campello, C. Garcia, F.
Parras, E. Cercenado, and F. Baquero. 1990. Serological
diagnosis of neurobrucellosis. J Clin Pathol 43:79-81.
19. Serra, J. and M. L. Gozzi. 2002. Discrepancias entre el test
de Coombs anti-Brucella y el test Brucellacapt . Enferm Infecc
Microbiol Clin 20:413-4.
20. Serra, J., J. Velasco, P. Godoy, and J. Mendoza. 2001. Puede
el test Brucellacapt ser sustituido por el test de Coombs en el
diagnóstico de la brucelosis humana?. Enferm Infecc Microbiol
Clin 19:202-5.
21. Casao, M.A., Navarro, E., Solera, J. 2004. Evaluation of
Brucellacapt for the diagnosis of human brucellosis. Journal of
Infection 49: 102-108.
22. Durán-Ferrer, M., León, L., Nielsen, K,. Caporale, V.,
Mendoza, J., Osuna, A., Perales, A., Smith, P., De- Frutos, C.,
Gómez- Martín, B., Lucas, A., Chico, R., Delgado, O. D.,
Escabias, J. C., Arrogante, L., Díaz-Parra, R. and Garrido, F.
2004. Antibody response and antigen-specific gammainterferon profiles of vaccinated and unvaccinated pregnant
sheep experimentally infected with Brucella melitensis.
Veterinary Microbiology 100: 219- 231.
23. Queipo-Ortuño, M. I., Colmenero, J. D., Baeza, G., and
Morata, P. 2005. Comparison between LightCycler Real-Time
Polymerase Chain Reaction (PCR) Assay with Serum and PCREnzyme-Linked Immunosorbent Assay with Whole Blood
Samples for the Diagnosis of Human Brucellosis. CID 40: 260-4.
Sorularınız için, lütfen müşteri
hizmetleri ile iletişime geçin:
[email protected]
REVİZYON: 03/2014