Валидация методик теста «Растворение»

1. Валидация методик теста «Растворение»

Докладчик: к.ф.н. Шохин Игорь Евгеньевич
руководитель лаборатории фармакокинетики
ООО «Технология лекарств»
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

2. Нормативные документы

ICH Harmonized Tripartite Guidelines. ICH Q2A «Text on
Validation of Analytical Procedures». – ICH, Geneva, 1995
ICH Harmonized Tripartite Guidelines. ICH Q2B «Validation of
Analytical Procedures: Methodology». – ICH, Geneva, 1997
Guidance for Industry: Analytical procedures and method
validation (draft). U.S. Department of Health and Human Services,
Food and Drug Administration, Center for Drug Evolution and
Research (CDER). U.S. Government Printing Office: Washington,
DC, 2000
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

3. Нормативные документы

USP 33 – NF 28. Monograph 1092 “The Dissolution
Procedure: Development and Validation
Руководство по валидации методик анализа лекарственных
средств (методические рекомендации). Под ред. Юргеля Н.В.,
Младенцева А.Л. Разработано АРФП. – 2007.
Необходимо разработать
указанных документов!
СОП
предприятия
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
на
основе
25 апреля
2012

4. Литература

Валидация аналитических методик для производителей
лекарств. Типовое руководство предприятия по производству
лекарственных средств, подготовленное Федеральным
Союзом Фармпроизводителей Германии (BAH). Пер.
Аладышевой Ж.И. и Спицкого О.Р. Под ред. Береговых В.В. –
М., Литерра, 2008. – 70 с.
И.Е. Шохин, Г.В. Раменская, К.С. Давыдова. Современные
подходы к валидации методик испытания «Растворение» //
Химико-фармацевтический журнал. – Москва, 2011. – т. 45. –
№3. – С. 92-95.
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

5. Литература

Dissolution Technologies Questions and Answers. Edited by
M. Marques, W. Brown. Diss. Tech: Hockesin, DE, USA. –
2010.
R. Hanson, V. Gray. Handbook on Dissolution Testing. 3rd edition.
Diss. Tech: Hockesin, DE, USA. – 2004.
Публикации в журнале Dissolution Technologies.
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

6. Валидация теста «Растворение»

Специфичность
Линейность
Правильность
Прецизионность (сходимость и промежуточная прецизионность
либо воспроизводимость)
Аналитический диапазон
Робастность (устойчивость)
Стабильность растворов
Валидация процедуры фильтрации
При необходимости – валидация автоматического отбора проб
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

7. Специфичность

Специфичность – это способность методики безусловно
определять действующее вещество в присутствии компонентов,
которые могут содержаться в пробе
Проводят тест «Растворение» для исследуемого ЛС и смеси
плацебо-компонентов или ЛФ-плацебо
Эффект влияния плацебо рассчитывают по формуле:
100 С * (Арl/Аst)*(V/L)
Критерий приемлемости – не более 2 %
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

8. Специфичность

Пик плацебо не накладывается на пик ЛВ
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

9. Специфичность

Для пролонгированных ЛС
определять на плацебо-ЛФ,
компомнентов
специфичность желательно
а не на смеси плацебо-
При эффекте влияния плацебо более 2 % следует: (1) изменить
длину волны, (2) проводить измерения при 2-х длинах волн с
соответствующей
поправкой,
(3)
заменить
УФспектрофотометрию на ВЭЖХ
При наличии в составе ЛФ других ЛВ и/или продуктов их распада
необходимо показать отсутствие их влияния на специфичность
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

10. Линейность

Линейность – это способность методики (в пределах
определенного диапазона) получать результаты, прямо
пропорциональные концентрации (количеству) действующего
вещества в пробе
Линейность методик теста «Растворение» допустимо определять
в мерных колбах
Для малорастворимых ЛВ – содержание орг. р-ля не более 5 %
Диапазон концентраций должен покрывать ± 20 % от верхней и
нижней границы нормы теста «Растворение»
Не менее 6 уровней концентраций, желательно 9 (АРФП, 2007)
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

11. Линейность

Для ЛФ немедленного высвобождения при норме не менее 75 %
за 45 мин: 55 %, 65 %, 75 %, 85 %, 95 %, 105 %, 115 %, 125 % и
135 % (шаг 10 %)
Для пролонгированных ЛВ при норме не более 25 % в течение 2
ч и не менее 85 % в течение 12 ч: диапазон 5 % - 95 %
Устанавливаются требования к: (1) свободному члену линейной
зависимости, а, (2) коэффициенту корреляции, r, (3) остаточному
стандартному отклонению, S0 (АРФП, 2007)
Формулы расчета приведены в Руководстве АРФП
USP: r2 не менее 0,98; отрезок по оси y незначительно
отличается от нуля
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

12. Линейность

Критерии приемлемости для ЛФ немедленного
высвобождения (9 концентраций в диапазоне 55 % - 155 %)
Критерии
№
1
Коэффициент корреляции (r)
2
Свободный член линейной
зависимости
3
Требования к остаточному
стандартному отклонению (S0)
Критические
значения
min r = 0,99839
max a% = 2,1
max S0,% = 1,58
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

13.

№
п/п
Концентрация
растворов для оценки
валидационных
характеристик, мг/мл
Концентрация растворов для
оценки
валидационных
характеристик,
в
%
от
номинального
значения
концентрации, (Xi)
Cт. отклонение, SD
Относит ст. отклонение, RSD (%)
Относит. доверит. интервал Δz,% = t(95%,8)*Sz = 1,34*SD %
Систематическая ошибка δ = |Zср.-100|
Найдено,
Zi= (Yi/Xi)*100%
в % от номинального
значения концентрации.
(Yi)
Zср.
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

14. Линейность

Линейность в нормализованных координатах
(введено-найдено)
Уравнение линейной
зависимости: y = 1,0207 x 1,0136
Коэффициент корреляции:
0,99980
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

15. Правильность

Правильность – это степень близости между известным истинным
значением или справочной величиной и значением,
полученным по данной методике. Характеризуется величиной
относительной погрешности
Проводят тест «Растворение» для смеси плацебо-компонентов
или ЛФ-плацебо с прибавлением стандартного раствора
Не менее 3 концентраций в диапазоне ± 20 % от верхней и
нижней границы нормы теста «Растворение»
Не менее 3 измерений для каждой концентрации
Для кишечнорастворимых ЛС: валидация кислотной стадии по
норме не более 10 %
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

16. Правильность

Для малорастворимых ЛВ – содержание орг. р-ля не более 5 %
для первого разведения
Критерий приемлемости по USP: открываемость (введенонайдено) должна составлять 95 – 105 %
Критерий приемлемости по АРФП: оценивают по критериям
статистической и практической незначимости
Параметры
Критерий
δ
≤ Δz%/√n (0,2)
δ
≤ maxδ (0,96)
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

17.

Уровень
концентраци Введено (Хі)
и (%) и
обозначение
пробы
Кол-во мл станд.
раствора
ЛВ, мг
Площадь пика
Найденное
значение (Yі)
Z= Yі/Хі,%
Zср.
Cт. отклонение, SD
Относит ст. отклонение, RSD (%)
Относит. доверит. интервал Δz, = t(95%,8)*Sz = 2,18*SD
Систематическая ошибка δ=|Zср.-100|
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

18. Прецизионность

Прецизионность – это степень близости (степень дисперсии)
между сериями измерений, полученных при параллельных
измерениях однородного образца в установленных условиях.
Характеризуется величиной относительного стандартного
отклонения.
Проводят тест «Растворение» для смеси плацебо-компонентов
или ЛФ-плацебо с прибавлением стандартного раствора либо
определяют в мерных колбах на стандартных растворах
Либо 3 концентрации в диапазоне ± 20 % от верхней и нижней
границы нормы теста «Растворение» при не менее 3 измерений
Либо 1 концентрация в середине линейного диапазона при не
менее 6 измерений
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

19. Прецизионность

Определяют на нескольких уровнях – повторяемость/сходимость
(repetability), промежуточная прецизионность (intermediate
precision) и воспроизводимость (reproducibility)
При определении воспроизводимости методики испытания
«Растворение» необходимость в определении промежуточной
прецизионности отсутствует
Критерий приемлемости по относительному
отклонению (RSD, %): не более 2 %
Критерий приемлемости по АРФП, 2007: Односторонний
доверительный интервал ΔZ не должен превышать максимально допустимую неопределенность результатов анализа
(ΔAs)
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
стандартному
25 апреля
2012

20.

№
п/п
Введено, в % от
номинального
значения
концентрации (Xі)
Площадь пика
Найдено,
в % от номинального
значения концентрации. (Yi)
1
2
3
4
5
6
100
100
100
100
100
100
81899
84444
84204
84940
83547
84185
97,10
100,12
99,84
100,71
99,06
99,82
99,44
1,26
1,27
Yср.
Cт. отклонение, SD
Относит ст. отклонение, RSD (%)
Относит. доверит. интервал Δz, % = t(95%,8)*Sz =
2,18*SD
1,01
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

21. Прецизионность

Определение промежуточной прецизионности: другой день,
другой аналитик, другое оборудование
Допустимо определение промежуточной прецизионности при
проведении
теста
«Растворение»
на
хорошо
охарактеризованной серии ЛС с узкими границами однородности
дозирования, а не на стандартных растворах + плацебо-смеси
Не менее 6 единиц ЛФ, желательно 12 (в каждый из дней)
Критерии приемлемости по USP: при норме высвобождения не
более 85 % и ниже – различия в результатах теста не более 10
%, при норме более 85 % - не более 5 %
Критерий приемлемости по АРФП: Δintra = t (95%, m*n-1)*
RSDintra% не должна превышать ΔAs
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

22.

№ п/п
Результаты
1-й сотрудник (м.н.с. ЛФК
Ярушок Т.А.), 09.12.2011
Результаты
2-й сотрудник (в.н.с. ЛФК
Медведев Ю.В.), 12.12.2011
1
2
3
4
5
6
Среднее
Среднееintra
SD
SDintra
RSD (%)
RSD (%)intra
t (95%, m*n-1)
Δintra = t (95%,
m*n-1)* RSDintra%
= 1,8125
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

23. Аналитический диапазон

Аналитический диапазон – это интервал между верхним и
нижним значением концентрации (количества) анализируемого
компонента в пробе (включая и эти значения), в рамках
которого доказана приемлемая правильность, прецизионность
и линейность методики
По Руководству АРФП допустимо одновременное определение
правильности, прецизионности и линейность методики на 9
растворах
Диапазон
Шаг,
%
RSDy%
В,%
max
ΔAs,
max
δ, %
max
S0,%
min
r
max
a, %
55 - 135%
10
27,39
-
3%
0,96
1,58
0,99839
2,1
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

24. Робастность (устойчивость)

Робастность (robustness) – это измерение способности
аналитической
методики
оставаться
неизменной
при
небольших, намеренных изменениях условий испытания и
показывает надежность методики при обычном использовании
Определяют в 3 – 6 повторностях, в зависимости от результатов
определения промежуточной прецизионности
Параметры: изменение объема и состава среды растворения
(рН, буферной емкости, концентрации поверхностно-активных
веществ), число оборотов мешалки, температура, метод
деаэрации среды…
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

25. Робастность (устойчивость)

Для ВЭЖХ: колонка (одного типа), состав подвижной фазы (доля
органического компонента, доля буферного раствора, рН),
градиент элюирования, скорость потока подвижной фазы,
температура колонки, длина волны УФ-детектирования…
Для УФ-спектрофотометрии: длина волны
Следует валидировать именно критические параметры
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

26. Стабильность растворов

Определяют для испытуемого и стандартного растворов
Для испытуемого раствора: срок годности при комнатной
температуре
Для стандартного раствора: при комнатной температуре и при
хранении в холодильники при температуре 2 оС- 8 оС
Стабильность стандартного раствора определяют относительно
свежеприготовленного стандартного раствора, испытуемой
пробы – относительно первоначальных данных количественного
определения той же пробы
Норма 98 – 102 %
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

27. Фильтрация

Сорбция на фильтрах – один из наиболее важных критических
параметров, наряду с процедурной дегазации
Проводят на стандартном и испытуемом растворе
Раствор фильтруют не менее 3 раз
Для стандартного раствора сравнивают результаты
фильтрованного и нефильтрованного растворов
КО
Для испытуемого раствора сравнивают результаты
фильтрованного и центрифугированного растворов
КО
Норма 98 – 102 %
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012

28. Валидация отбора проб

Источник вариабельности
пробоотборнике и т.д.
–
сорбция
на
Проводят тест «Растворение» для смеси плацебо-компонентов
или ЛФ-плацебо с прибавлением стандартного раствора, либо на
хорошо охарактеризованной серии ЛС с узкими диапазоном
однородности дозирования, с автоматическим и ручным отбором
проб
Норма 98 – 102 %
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
каналах,
в
25 апреля
2012

29. Валидация програмного обеспечения

Согласно 21 CFR Part 11, U.S. FDA
Автоматические таблицы Excel для обработки результатов
Программное обеспечение автоматизированных систем для
теста «Растворение»
Программное
обеспечение
спектрофотометр, ВЭЖХ…
средств
измерения:
Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
УФ-
25 апреля
2012

30. Спасибо за внимание!

Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты
Конференция-семинар с международным участием
25 апреля
2012