Взятие, подготовка биоматериала для исследования гемостаза. Практическое занятие № 1

1.

Практическое занятие № 1
Взятие, подготовка биоматериала для
исследования гемостаза
Москва
2025

2.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ
Объект:
Цель:
биоматериал
изучить правила приема и регистрации биоматериала для
исследования системы гемостаза
Предмет:
прием и регистрация
Задачи:
1. Проанализировать
преаналитический
исследовании системы гемостаза
этап
при
2. Изучить стандартную операционную процедуру (СОП)
Прием и регистрация биологического материала в
лаборатории. Предварительная оценка доставленных
проб биологического материала
3. Освоить алгоритм приема и регистрации биоматериала в
условиях лаборатории.
medcollege.ru
2

3.

ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП
Подготовка пациента, взятие биоматериала, дос тавка проб
8-12 часовое
голодание
Исключить прием алкоголя
Исключить прием медикаментов
Соблюдать методику взятия
Исключить физические нагрузки
Контейнер для транспортировки
medcollege.ru
3

4.

ВЛИЯНИЕ ПРОЦЕДУРЫ ВЗЯТИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ КРОВИ НА
ИССЛЕДОВАНИЕ ГЕМОСТАЗА
Продолжительный
Гипоксия и увеличенная проницаемость мембран клеток крови
веностаз (затруднение
венозного оттока)
Механичес кие
Выпускание
крови
из
шприца
в
пробирку
с
силой
повреждения
интенсивное встряхивание при перемешивании
и
Гемолиз
При длительном стоянии крови появляющиеся радикалы кислорода (02-) и
дефицит субстратов приводят к порозности
(пористость) мембран
эритроцитов.
Свертывание
Появляются в сыворотке ферменты из тромбоцитов, в частности, кислая
фосфатаза.
Длительное
хранение пробы
Активация протеолиза (расщепления белков на более мелкие
полипептиды или аминокислоты), потеря ферментами четвертичной
структуры, блокада SH-групп (сульфгидрильные группы).
medcollege.ru
4

5.

ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП
Прием, регис трация, подготовка проб к ис с ледованию
Прием биоматериала
Регистрация
биоматериала
Центрифугирование
проб
medcollege.ru
Подготовка проб
к исследованию
5

6.

ПРИЕМ БИОМАТЕРИАЛА
medcollege.ru
6

7.

medcollege.ru
7

8.

medcollege.ru
8

9.

СОП Прием и регис трация биологичес кого материала в
лаборатории. Предварительная оценка дос тавленных проб
биологичес кого материала
medcollege.ru
9

10.

Выполнение процедуры
№
этапа
7.1
7.2
7.3
7.4
7.5
7.6
7.7
7.8
7.9
7.10
7.11
Опис ание этапа
Проверить наличие направления на лабораторное обследование и правильность его
заполнения
Сопоставить количество направлений количеству доставленных образцов
Проверить образцы на наличие маркировки и идентификации
Проверить соответствие штрих-кода (при наличии) и ФИО пациента на контейнере
и на бланке направления
Проверить целостность пробирки или контейнера
Проверить пробу на соответствие типа пробирки или контейнера видам
запрашиваемых исследований
Проверить правильность наполнения пробирки
Проверить время взятия биоматериала (была ли задержка при транспортировке)
и условия транспортировки (температурный режим сумки-холодильника)
Проверить пробу на наличие резкого гемолиза и хилеза (в соответствии
с критериями, принятыми в лаборатории)
Проверить пробу с антикоагулянтом на наличие видимых сгустков в пробирке
Проверить срок годности пробирки
medcollege.ru
10

11.

Выполнение процедуры
№
этап
а
7.12
7.13
7.14
7.15
7.16
Опис ание этапа
Принять пробы при отсутствии несоответствий (пункты 7.1–7.11), сообщить сотруднику,
доставившему
материал,
о
том,
что
биоматериал
принят,
внести
запись
в Журнал регистрации поступления биологического материала (приложение 1) или оформить в
ЛИС, сделать отметку в акте доставки биологического материала (при наличии)
Поставить принятые пробы в транспортировочный контейнер и обеспечить доставку проб в
лабораторию
Проинформировать при выявлении несоответствий (пункты 7.1–7.11) сотрудника, доставившего
материал, внести запись в Журнал регистрации выбракованного биологического материала с
обязательным указанием даты выявления несоответствия, данных пациента, названия
направившей медицинской организации (клинического отделения), причины отбраковки, ФИО и
должности сотрудника, получившего информацию
Зафиксировать отказ в приеме биологического материала в ЛИС (при наличии), указать причину
выбраковки
До принятия решения ответственным о возможности принять пробы в работу поместить
отбракованные
пробы
биоматериала
в
холодильник
(пробирки
в вертикальном положении в штативе, контейнеры с биоматериалом на подносе). Пробы хранить в
холодильнике 24 часа, после чего утилизировать их согласно СОП «Порядок обращения с
медицинскими отходами»
medcollege.ru
11

12.

Завершение процедуры
№
этапа
8.1
8.2
8.3
8.4
Опис ание этапа
Протереть дезинфицирующими салфетками рабочую поверхность стола (время
экспозиции согласно инструкции к дезинфицирующим салфеткам)
Проверить температурный режим холодильника. Сделать запись в Журнале учета
температурного режима холодильника. Температура в конце смены. (приложение 4)
Снять перчатки согласно СОП «Применение СИЗ», маску и поместить их в отходы
класса Б
Обработать руки гигиеническим способом согласно СОП «Гигиеническая
обработка рук»
9.
Ответственнос ть
9.1.
Настоящая стандартная операционная процедура определяет порядок действий медицинского
лабораторного техника (фельдшера-лаборанта) при выполнении процедуры внутрилабораторного
контроля качества лабораторных исследований.
9.2.
Медицинский лабораторный техник (фельдшер-лаборант) несет персональную
ответственность за выполнение данной инструкции.
medcollege.ru
12

13.

ВИДЫ СЫВОРОТКИ (ПЛАЗМЫ)
Отцентрифугированная кровь
а) норма, б) иктеричнос ть, в) гемолиз, г) хилез (липемия )
medcollege.ru
13

14.

ПРОБОПОДГОТОВКА
Пробоподготовка проводится на специально оборудованных рабочих местах
(или в отдельном помещении) и предусматривает первичную обработку образцов
биоматериалов (термостатирование, центрифугирование, отделение сыворотки,
дозирование проб и т.д.).
Для этого рабочее место оснащается специальным оборудованием и
устройствами (центрифуги, термостаты и др.). Пробы, хранившиеся в холодильнике,
перед проведением исследования необходимо нагреть до комнатной температуры. В
процессе хранения и транспортировки проб крови существенное влияние на
стабильность аналитов оказывает свет и сильная вибрация. Тряска может привести к
гемолизу. Под воздействием прямого солнечного света в образце разрушается
билирубин, витамин С, порфирины, креатинкиназа, фолиевая кислота.
medcollege.ru
14

15.

ВИДЫ БИОМАТЕРИАЛОВ ДЛЯ КЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Нативная венозная кровь, взятая из крупных вен (чаще из локтевой) без
применения антикоагулянтов.
2. Венозная кровь с добавлением антикоагулянтов.
3. Капиллярная кровь из пальца для определения глюкозы, общего анализа
крови (ОАК) и других компонентов.
4. Артериальная кровь, взятая из крупных артерий (чаще бедренной или
подключичной) – для определения газов крови.
medcollege.ru
15

16.

ВЕНОЗНАЯ КРОВЬ
Использование венозной крови для биохимических исследований
наиболее предпочтительно.
В
зависимости
от того,
какой
материал
необходимо
получить
(сыворотку или плазму), кровь собирают в вакуумные пробирки без добавок
(для получения сыворотки), либо с добавлением антикоагулянтов (для
получения плазмы).
medcollege.ru
16

17.

КАПИЛЛЯРНАЯ КРОВЬ
Капиллярная кровь чаще всего используется для определения
глюкозы или общего анализа крови.
Для
взятия
пробы
капиллярной
крови
используют
стерильные
скарификаторы-копья одноразового применения или лазерные перфораторы.
Между объемом получаемой крови и глубиной прокола имеется прямая
зависимость. В связи с этим скарификатор должен выбираться в зависимости от
места прокола и количества крови, необходимого для выполнения различных
исследований с лезвиями разных размеров.
Свернувшаяс я и гемолизированная пробы не подлежат ис с ледованию.
Количество собираемой крови зависит от количества назначенных анализов
и требуемых для них объемов биоматериала.
Для биохимии хотя бы 6 мл, для коагулограммы – 4,5 мл.
medcollege.ru
17

18.

ВАКУУМНЫЕ ПРОБИРКИ
Для стандартизации условий взятия, транспортировки и хранения
биологических проб пациента были разработаны вакуумные системы
забора крови.
Проба находится в одной пробирке при взятии, транспортировке,
анализе и хранении, что исключает необходимость переливания,
уменьшает возможность возникновения гемолиза и вспенивания образца.
Вакуум исключает воздействие давления поршня шприца на форменные
элементы.
Использование вакуумных пробирок не допускается при
исследовании газов крови и КОС.
medcollege.ru
18

19.

КОНСЕРВАНТЫ
1. Этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) – антикоагулянт, который предохраняет кровь от
свертывания, связывая и эффективно удаляя ионы кальция, присутствующие в
плазме (кальций необходим для свертывания крови). ЭДТА также защищает клетки
крови от разрушения. Добавляют в пробирки для сбора крови с целью полного
подсчета клеток крови и выполнения некоторых других гематологических тестов.
1. Гепарин (в виде натриевой или калиевой соли этой кислоты, т.е. натрий гепарина
или калий гепарина/гепаринат натрия или калия) – антикоагулянт, который
предохраняет кровь от свертывания, ингибируя превращение протромбина в
тромбин.
Добавляют
в
пробирки
для
сбора
крови
с
целью
проведения
биохимических исследований, для которых необходима плазма. Антикоагулянтные
свойства гепарина используются в терапии.
medcollege.ru
19

20.

КОНСЕРВАНТЫ
3. Цитрат (в виде натриевой соли, т.е. цитрата натрия) – антикоагулянт, который
предохраняет кровь от свертывания, связывая ионы кальция (подобно ЭДТА).
Добавляют в пробирки для сбора крови с целью изучения процессов свертывания.
4. Оксалат (в виде натриевой или аммонийной соли, т.е. оксалата натрия или
аммония) – антикоагулянт, который предохраняет кровь от свертывания, связывая
ионы кальция (подобно ЭДТА). Используют вместе с фторидом натрия для
определения содержания глюкозы в крови.
5. Фторид натрия – это ферментный яд, который прекращает метаболизацию
глюкозы в крови после ее сбора, т.е. сохраняет ее концентрацию. Используется
вместе с оксалатом аммония специально для определения содержания глюкозы в
крови.
medcollege.ru
20

21.

РАЗДЕЛИТЕЛЬНЫЙ ГЕЛЬ
1.
Плотность геля ниже, чем у кровяного сгустка и осадка клеток, но выше, чему плазмы.
2.
При центрифугировании гель движется вверх и образует стабильный барьер, между
сывороткой / плазмой и сгустком / осадком клеток. Гелевый барьер стабилизирует
параметры сыворотки / плазмы in vitro.
3.
После центрифугирования пробирки можно транспортировать, не боясь взмутить осадок,
а также замораживать.
4.
Вторичная
пробирка
не
нужна,
следовательно,
сыворотку
/
плазму
после
центрифугирования можно отбирать прямо из первичной пробирки (экономия времени
на перенос материала и ресурсы).
Таким образом, гелевый барьер увеличивает выход сыворотки, обеспечивает ее
качество, надежно изолирует сыворотку от попадания клеток и ее компонентов.
Повторное центрифугирование пробирок с гелем не допускается
medcollege.ru
21

22.

ЦВЕТОВАЯ КОДИРОВКА
ПРОБИРОК
medcollege.ru
22

23.

ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ
Сыворотка – неразделенная внеклеточная часть крови после
завершения адекватного процесса свертывания крови.
Для отделения сыворотки от клеток крови в пробе крови, взятой у пациента,
вакуумную пробирку следует оставить при комнатной температуре в течение, по
меньшей мере 30 мин.
Для получения качественной пробы важно выдержать полное время
свертывания крови. Этот период может быть короче в случае использования
активатора свертывания.
Центрифугирование свернувшейся крови с целью получения сыворотки
следует выполнять, только убедившись в том, что кровь полностью свернулась (в
нормальных условиях кровь свертывается около 30 минут).
medcollege.ru
23

24.

ПОЛУЧЕНИЕ ПЛАЗМЫ
Преимущества использования сыворотки по сравнению с плазмой обусловлено тем, что
добавление антикоагулянтов может вызывать интерференцию с некоторыми аналитическими методами
лабораторного анализа или изменять концентрацию определяемых компонентов:
• примесь катионов в антикоагулянтах: NH4+, Li+, Na+, K+;
• интерференция аналитов, вызванная связываем металлов с ЭДТА и цитратом (например, снижение
активности щелочной фосфатазы при связывании цинка, снижение активности УП 03 (II курс, 4
семестр) металлопротеиназ, угнетение металлозависимой активации клеток при функциональных
тестах, связывание ионизированного кальция гепарином);
• интерференция фибриногена в гетерогенных иммунных исследованиях;
• ингибирование метаболических или каталитических реакций гепарином (н/р Taq-полимеразы в ПЦР);
• интерференция ЭДТА, цитрата
с
распределением
ионов между внутри- и межклеточными
пространствами (например, Cl- , NH4+);
• электрофорез белков следует проводить только в сыворотке.
Интерференция – вмешательство постороннего фактора в результаты анализа.
medcollege.ru
24

25.

ПОЛУЧЕНИЕ ПЛАЗМЫ
Преимущес тва ис пользования плазмы:
• экономия времени: пробы крови могут быть отцентрифугированы сразу после их
получения (нет необходимости ждать не менее 30 минут для получения
сыворотки);
• выход плазмы из одного и того же объема крови на 15-20% больше, чем
сыворотки;
• предотвращение, вызванной свертыванием интерференции при использовании
сыворотки.
Вследствие вызванных свертыванием крови в вакуумной пробирке
изменений, некоторые исследования дают достоверные результаты, только при
использовании плазмы (например, нейроспецифическая енолаза, серотонин,
аммиак).
medcollege.ru
25

26.

ТИПИЧНЫЕ ОШИБКИ
ОШИБКИ
ПОСЛЕДСТВИЯ
Невыдерживание времени
свертывания крови для получения
сыворотки
«Недосвертывание», сгусток над
гелем после центрифугирования,
возможность засорения анализатора,
искажение результатов
Нарушение режима
центрифугирования образца крови
(t°, время, относительное
центробежное ускорение)
Плохой гелевый барьер,
недостаточное количество
плазмы/сыворотки, гемолиз
Нарушение условий хранения
пробы (t°, длительность, свет)
Гемолиз, изменение концентрации /
активности аналитов
medcollege.ru
26

27.

Гемолиз
это разрушение эритроцитов в образце крови с выходом из них различных
биологически активных веществ и, что самое главное, гемоглобина в плазму.
Гемолиз обусловлен физиологическими особенностями организма человека, сдавшего
кровь, а также нарушением методики забора крови.
Причины, связанные с методикой забора крови, приводящие к гемолизу:
• наложение жгута на слишком длительное время;
• на поверхности кожи в месте осуществления венепункции остались следы
дезинфицирующего раствора (спирта);
• слишком интенсивное перемешивание крови в пробирке;
• центрифугирование крови не по установленным преаналитическим правилам (при слишком
высоких оборотах, дольше необходимого);
• взятие крови шприцем с последующим перемещением ее в вакуумную пробирку;
• нарушение методики взятия капиллярной крови (слишком интенсивное надавливание рядом
с местом прокола, сбор крови с поверхности кожи краем микропробирки и прочее);
• хранение образцов крови с нарушением температурного режима, замораживание и
последующее размораживание образцов крови перед транспортировкой в лабораторию;
• слишком длительное хранение образцов крови при комнатной температуре.
medcollege.ru
27

28.

ГЕМОЛИЗ
В капиллярной крови гемолиз возникает в 2 раза чаще, поэтому используют венозную
кровь. Риск гемолиза в сыворотке выше, чем в плазме. При гемолизе выполнению анализа
«мешают» те вещества, которые выходят в плазму из эритроцитов (преимущественно
гемоглобин). Приборы для их проведения могут неправильно интерпретировать полученный
результат и выдать неправильный результат.
Основным признаком гемолиза крови служит изменение ее окраски. Степень
изменения окраски напрямую соответствует степени гемолиза.
Слабый гемолиз не всегда может быть заметен визуально. В современных
лабораториях образцы крови, подозрительные на гемолиз, подвергаются специальному
исследованию, которое позволяет оценить примерное количество свободного гемоглобина в
крови, и точно определить степень гемолиза.
Гемолиз в плазме/сыворотке служит причиной увеличения концентрации таких
аналитов, как калий, лактатдегидрогеназа, ас партатаминотранс фераза.
medcollege.ru
28

29.

ЛИПИЕМИЯ (ХИЛЕЗ)
это высокая концентрация липидов (преимущественно триглицеридов) в
образце крови. Липемичная сыворотка имеет желтовато-белый цвет, выраженность которого
зависит от концентрации жиров. Наличие липемии возможно при некоторых заболеваниях, при
которых нарушается обмен веществ.
Возникновение и степень липемии не зависит от процедуры взятия крови и
последующих преаналитических действий с образцом. Высокая концентрация жиров в крови
может исказить значение лабораторного показателя. Связано это с особенностями методов
исследования и оборудования, на котором выполняются анализы.
Липемия создает помехи путем рассеяния света и нарушения (поглощения)
пропускания света при прохождении через реакционную смесь.
Чтобы избежать липемии следует всегда спрашивать пациента о том, принимал ли он
пищу перед тем, как сдавать кровь на анализ. В случае, если прием пищи был по времени
позже, чем того требуют правила подготовки к необходимым анализам, следует рекомендовать
пациенту отложить сдачу крови и правильно подготовится к анализам.
medcollege.ru
29

30.

ИКТЕРИЧНОСТЬ
это высокая концентрация билирубина и его производных в образце крови.
Иктеричность встречается при различных заболеваниях печени и некоторых
наследственных заболеваниях. Иктеричная сыворотка имеет ярко-желтый цвет, оттенок
которого напрямую зависит от концентрации в ней билирубина, чаще всего обусловлена
различными заболеваниями печени, при
которых резко повышается в крови уровень билирубина.
Иногда повышение уровня билирубина в крови может быть связано с длительным
голоданием пациента накануне анализа, хотя даже очень длительное отсутствие приема
пищи у совершенно здорового человека редко приводит к иктеричности полученной
сыворотки крови.
medcollege.ru
30

31.

ИКТЕРИЧНОСТЬ
Высокая концентрация билирубина в крови может исказить значение
лабораторного
показателя. Связано это с особенностями методов
исследования и оборудования, на котором выполняются анализы. Билирубин отличается
значительным светопоглощением при длине волны 340-500 нм.
В сильнокислом растворе оптическая плотность связанного билирубина смещается в
спектр ультрафиолетовых волн. Как следствие, билирубин создает помехи при определении
ряда аналитов, использующих эти длины волн.
Если полученный образец имеет признаки иктеричности, следует предупредить
пациента о вероятной необходимости повторного взятия крови для анализа.
При этом следует учитывать, что не всегда возможно скорректировать повышенный
уровень билирубина в крови, в этом случае нужно оповестить лабораторию об особенностях
состояния здоровья пациента и это будет учтено при выполнении исследований.
medcollege.ru
31

32.

Практическое занятие № 1
В зятие, подготовка биоматериала для
ис с ледования гемос таза
Мос ква
2025